菊花的组织培养上课

课题1：菊花的组织培养组织培养是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。一、植物组织培养的基本过程（1）细胞的分化①概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程.②实例：如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统.③特点：B.不可逆性：C.稳定性：在整个分化过程中，细胞内的遗传物质是不变的、稳定的。A.持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期达到最大限度.细胞分化是依次渐变，不可逆转的.⑤原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果.④结果：形成不同的细胞和组织（2）植物组织培养的原理：植物细胞的全能性①概念：高度分化的植物细胞，仍具有发育为完整个体的潜能，植物细胞的这种特性叫做植物细胞的全能性②细胞具有全能性的原因：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因.③实例：美国生物学家斯图尔德利用胡萝卜根韧皮部细胞培养成胡萝卜植株受精卵>生殖细胞>体细胞④全能性的比较:二、植物组织培养的基本过程:愈伤组织愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞.三、影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取

不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同2、培养基的配制(MS培养基)

大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上部新萌生的侧枝枝条中部的芽①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影响讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。②生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高利于根的形成低利于芽的分化4、pH、温度、光照

（菊花组培：

pH=5.8，温度控制在18—22℃，每日光照12h）5、无菌环境在组织培养的整个过程中，都需要一个无菌环境，包括培养基的灭菌、外植体消毒以及接种过程的无菌操作等。注：植物组织培养过程离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素植物细胞培养不需要光需要光制备MS固体培养基外植体消毒

接种

培养栽培四、实验操作

移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现