尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDPglucosepyrophosphosphprylaseUGP)试剂盒说明书

货号:QS3603

规格：50管/48

样尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucosepyrophosphosphprylase，UGP）试剂盒说明书注意：正式测定以前选择

紫外分光光度法2-3个预期差别大的样本做展望定。测定意义：UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的重点酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP葡-萄糖（UDPG）。测定原理：UGP可逆催化反响生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转变为NADPH，340nm的吸光值增添快率反应了UGP活性。自备实验用品及仪器：天平、低温离心计、研钵、紫外分光光度计、1mL石英比色皿。试剂构成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保留。试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保留。试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保留。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保留，严禁频频冻融。试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保留。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保留，严禁频频冻融。试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保留。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保留，严禁频频冻融。试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保留。酶液提取：组织：依据质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比率（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。细胞：依据细胞数目（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比率（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；而后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。液体：直接检测。测定操作：分光光度计预热30min，调理波长至340nm，蒸馏水调零。取1mL石英比色皿，挨次加入500μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1计算公式：（1）按仍旧本蛋白浓度计算酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟耗费1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。UGP（nmol/min/mgprot）＝[A÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样×Cpr)T=321.54×ΔA÷Cpr（2）按仍旧实质量计算酶活单位定义：每克组织每分钟耗费1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。UGP（nmol/min/g鲜重）＝[A÷（ε×d）×V反总×109]÷(W×V样÷V样总)T=321.54×ΔA÷W（3）依据细胞数目计算酶活单位定义：每104个细胞每分钟耗费1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。UGP（nmol/min/104cell）=[A÷（ε×d）×V反总×109]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.643×ΔA（4）依据液体体积计算酶活单位定义：每毫升液体每分钟耗费1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。UGP（nmol/min/mL）＝[9A÷（ε×d）×V反总×10]÷V样÷T=321.54×ΔAV反总：反响系统整体积，1×10-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1m