实验四类风湿因子检测

实验四类风湿因子检测第一页，共二十三页，2022年，8月28日类风湿因子的检测

类风湿因子（RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。RF最初由Rose等（1984年）在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。RA患者体内有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要为19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。第二页，共二十三页，2022年，8月28日RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。

第三页，共二十三页，2022年，8月28日类风湿性关节炎类风湿关节炎(RA)：其病因及发病机制仍不完全明了,推测可能为外源性感染作用于遗传易感个体,导致机体免疫系统紊乱,进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的自身免疫性疾病。第四页，共二十三页，2022年，8月28日RF在RA患者中的阳性检出率很高，可达79.6%，是RA患者血清中常见的自身抗体。高滴度RF阳性支持对早期RA的诊断，在RA患者，RF的滴度与患者的临床表现呈正相关，即随症状加重而效价升高。但RF不是仅在RA患者中出现，在SLE、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的阳性率可达28.9%～50%。因而RF对RA患者并不具有严格特异性，RF阳性不能作为诊断RA的惟一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性，但滴均较低（＜40IU/ml），随着RF滴度增加，RF对RA的诊断特异性增高。第五页，共二十三页，2022年，8月28日类风湿因子的病理作用（一）类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类风湿性关节炎特异性RF与自身IgG分子结合形成稳定的免疫复合物，部分被单核-吞噬细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活补体导致血管炎。第六页，共二十三页，2022年，8月28日类风湿因子的病理作用（二）关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正常的IgG分子，IgG-RF自身结合形成多聚体复合物，IgG-RF多聚体沉积于关节表面激活补体引起关节性损伤。

第七页，共二十三页，2022年，8月28日常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价＞80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。第八页，共二十三页，2022年，8月28日IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类RF常伴随高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出现。在正常人及非RA患者中很难检测出IgG型RF．IgG型RF在关节软骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出IgG型RF比血清中检出IgM型RF更具病理意义。RF检测方法一般有胶乳凝集试验、双抗原夹心ELISA法、速率散射比浊法。一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风湿因子。第九页，共二十三页，2022年，8月28日类风湿因子的检测类风湿因子的主要类型：IgM型特点：高凝集、易于沉淀测定方法为：1、乳胶凝集法2、酶联免疫吸附法3、乳胶免疫比浊法第十页，共二十三页，2022年，8月28日胶乳凝集试验检测RF概念：颗粒性抗原与相应抗体，或表面包被抗原（抗体）的颗粒状物质与相应的抗体（抗原）在电解质存在的条件下相互结合，出现肉眼可见的凝集团现象。第十一页，共二十三页，2022年，8月28日正向间接凝集试验—测RF第十二页，共二十三页，2022年，8月28日原理（胶乳凝集试验）类风湿因子（RF）是一组抗变性IgG的自身抗体，它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常人IgG发生凝集反应。将处理过的人IgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒。当待检血清中有RF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgG发生反应，出现凝集现象。第十三页，共二十三页，2022年，8月28日（正向）间接凝集反应原理示意图（变性IgG）第十四页，共二十三页，2022年，8月28日主要的试剂和器材类风湿胶乳诊断试剂RF阴性对照RF阳性对照反应板搅拌棒第十五页，共二十三页，2022年，8月28日操作步骤（1）在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血清、RF阴性血清及待检血清。（2）加20ulIgG致敏的胶乳于各血清样品中，轻微晃动载玻片混匀。（3）1min后观察凝集反应发生情况第十六页，共二十三页，2022年，8月28日结果观察和判断在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性。若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为RF的效价（滴度）。第十七页，共二十三页，2022年，8月28日

注意事项（1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果可靠（2）注意阴性、阳性对照的设立（3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例第十八页，共二十三页，2022年，8月28日直接凝集试验（玻片法）--测ABO血型第十九页，共二十三页，2022年，8月28日原理天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。玻片法属于定性试验。第二十页，共二十三页，2022年，8月28日第二十一页，共二十三页，2022年，8月28日主要的试剂和器材抗A血型定型试剂抗B血型定型试剂搅拌棒玻片第二十二页，共二十三页，2022年，8月28日步骤取玻片1块，