临床免疫学检验：13 Ⅲ型超敏反应及检测

Ⅲ型超敏反应及检测

P267当Ag在体内持续存在或由微生物与宿主细胞不断释放入细胞外液时，可引起特异性Ab产生，从而形成免疫复合物。一.免疫复合物含义及形成：（一）含义：immunecomplex,IC它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。（二）IC的形成：1.Ag持续存在于体内：（产生Ab，形成AgAb或AgAbC）感染：是Ag持续存在于体内的最常见原因，如细菌、病毒、寄生虫感染；组织Ag：自身组织的部分成分如DNA、IgG等发生变异；外源性Ag：在生活、工作环境中接触的外来性物质如粉尘、药物等；肿瘤Ag：如白血病等2.IC的清除受阻：形成的IC一般分为大分子IC、中等大小的IC及小分子IC三种：大分子IC：沉降系数为19S，MW>100万，易被巨噬细胞吞噬而清除；小分子IC：可溶性，沉降系数<6.6S，MW<50万，易被肾小球滤过而排除；中等大小的IC：沉降系数在8.8S－19S间，MW在50－100万间，既不易被巨噬细胞吞噬也不易被肾小球滤过，而沉积在血管壁或肾小球基底膜处，形成免疫复合物病。二.免疫复合物病：（一）致病机理：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板、中性粒细胞作用而致病。激活补体：激活C3a、C5a、C567→趋化嗜中性粒细胞→释放溶酶体酶→引起组织损伤；激活C3a、C5a（过敏毒素）→作用于肥大细胞和嗜碱性粒细胞→释放血管活性介质→血管通透性增加→引起组织水肿；

激活血小板：与血小板上的IgGFc受体结合→使血小板聚集→微血栓形成→局部出血缺血、坏死中性粒细胞作用：中性粒细胞在吞噬IC同时，释放蛋白水解酶、胶原酶等，使血管基底膜及周围组织损伤常见病损部位血管、肾脏、肺部、关节、皮肤（二）所致疾病内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎、变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关节炎；皮肤：皮肤炎、脉管炎；全身：SLE血清病类风湿性关节炎体内变性IgG刺激机体产生抗体(称为类风湿因子,IgM类)，形成IC，沉积于全身小关节滑膜处，引起小关节红肿、变形、僵直、失去运动功能。系统性红斑狼疮

细胞核物质(如DNA、RNA、核内可溶性蛋白)刺激机体产生抗核抗体，形成IC，沉积于周身毛细血管、关节滑膜、心脏瓣膜等处，引起全身性损伤。三.IC检测方法的分类：有两种

(一)局部组织中IC的检测：制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜检测IC所致典型病理改变；或用IF、免疫酶技术检测IC在组织中的沉着。（二）循环中IC的检测：

Circleimmunecomplex，简称CIC。

1.抗原特异性方法：利用IC中Ag的特异性而设计的方法，特异性强。但由于每一种Ag性质不同，就需不同的方法检测，造成检测方法不统一，因此临床上不常用。2.抗原非特异性方法：利用CIC与游离的Ag或Ab相比较，在物理性质、生物学活性上的差异而设计的方法。CIC检测方法大致分为两类：根据物理性质上的差异而设计的方法：A.根据CIC与游离的Ag或Ab分子大小不同而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密度超速离心法B.根据CIC与游离的Ag或Ab溶解度不同而设计的方法：聚乙二醇（PEG）沉淀试验根据生物学性质的差异而设计的方法：A.根据C1q+CIC（AgAb)而设计的方法：抗补体试验、C1q结合试验；B.根据IgGFc受体＋CIC（AgAb)而设计的方法：血小板凝集试验；C.根据C3b受体＋CIC（AgAbC)而设计的方法：Raji细胞试验四.IC检测方法概述：1.聚乙二醇（PEG）比浊试验：原理：PEG为水溶性多聚体，在3％-4％低浓度时，能使IC沉降下来。方法：PEG＋待测血清

↓

使PEG终浓度达到3－4％

↓4℃过夜离心，取出沉淀

↓

将沉淀用NaOH溶解

↓在721分光光度计上测OD值优缺点：该试验不但可检测IC，还可获得IC（收集沉淀），简单，快速；特异性差，易受血清中大分子物质干扰；常作为IC检测的粗筛试验2.抗补体试验：原理：C1q+IC方法：豚鼠血清（其中含有C1q)+待测血清(56°1h灭活其中补体）↓再加入EA（致敏羊红细胞）↓

不溶血溶血（IC阳性）（IC阴性）优缺点：该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性凡引起补体失活的原因都可引起假阳性，因此豚鼠血清必须保持新鲜；待测血清在56°1h灭活补体时，对其中的Ig构型有改变，易引起Ig聚集，它可代替IC而与C1q结合，出现抗补体活性。3.C1q结合试验：原理：C1q＋IC方法：待测血清（灭活补体）＋同位素标记的C1q↓PEG(使IC沉降）

测定沉淀物中的放射活性

优点：对IC的检测既可定性又可定量，重复性好，结果客观；缺点：易出现假阳性C1q不但能与IC结合，还能与鱼精蛋白、C反应蛋白结合

4.Raji细胞试验：原理：Raji细胞是一种有B细胞特征的淋巴母细胞样细胞，由Burkitt氏淋巴瘤衍变而来，其表面无SmIg，含有大量的补体受体，尤其是C3b受体。该法仅适用于检测AgAbC复合物。方法：待测血清+Raji细胞孵育→洗涤，加入同位素标记的抗人IgG→离心、洗涤→检测沉淀细胞的放射活性。IC检测的临床意义：

CIC升高主要见于自身免疫性疾病及感染性疾病

CIC量的消长可反映病情的严重程度、监测治疗效果五.IC检测的有关技术问题：到目前为止，所有检测IC的试验，还没有另人满意的标准化措施;

在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。目前普遍应用的标准品是HAHG——热聚合人IgG（不是IC）。检测IC的理想方法：