标准解读

《GB/T 25168-2010 畜禽cDNA文库构建与保存技术规程》是由中国国家标准化管理委员会发布的一项国家标准，旨在规范畜禽来源的cDNA（互补DNA）文库构建及保存过程中所采用的技术方法和操作流程。该标准适用于以畜禽为材料进行基因表达研究时所需建立的cDNA文库工作。

根据文档内容，首先明确了术语定义，包括但不限于cDNA文库、载体等关键概念，为后续章节的理解奠定基础。接着详细描述了实验准备阶段的要求，比如试剂的选择与配置、实验器材的清洁消毒以及样本采集处理的具体步骤。对于cDNA合成部分，则具体介绍了从总RNA提取到第一链cDNA合成直至双链cDNA制备完成整个过程的操作细节，并对每一步骤中可能遇到的问题给出了相应解决策略。此外，还特别强调了在构建cDNA文库时选择合适载体的重要性，并列举了几种常用的克隆载体类型及其特点。

针对文库筛选与鉴定环节，《GB/T 25168-2010》提供了多种检测手段，如PCR扩增法、限制性内切酶酶切分析等，用以评估文库质量。同时，也指出了如何通过测序或杂交实验来进一步验证目标序列的存在与否。

最后，在保存方面，该标准提出了两种主要方式：短期保存可采用-20℃条件下；长期保存则建议使用液氮罐（-196℃）。并且对于不同类型的cDNA文库给出了具体的保存条件建议，确保其稳定性和可用性。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2010-09-26 颁布
  • 2011-03-01 实施
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文档简介

ICS6502030

B40..

中华人民共和国国家标准

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文库构建与保存技术规程

TechnicalregulationoffarmanimalscDNAlibraryconstructionandpreservation

2010-09-26发布2011-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T25168—2010

前言

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口

(SAC/TC274)。

本标准起草单位中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

:。

本标准主要起草人马月辉关伟军陆涛峰李向臣佟春玲余露露刘鹏

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文库构建与保存技术规程

1范围

本标准规定了畜禽文库构建方法

cDNA。

本标准适用于猪牛羊马驴鸡鸭鹅等畜禽文库构建与保存

、、、、、、、cDNA。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件其随后所有

。,

的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究

(),,

是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准

。,。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准

。

31

.

cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid

以成熟为模板在反转录酶的作用下合成的链

mRNA,cDNA。

32

.

cDNA文库cDNAlibrary

将处于特定发育阶段真核生物体的特定器官或组织中提取的总经过反转录等一系列的生化

RNA,

反应合成双链群体后再插入到适当的载体上经转化寄主菌株构成特定的克隆群体

cDNA,,cDNA。

33

.

寡核苷酸oligonucleotide

一类只有个以下碱基对的短链核苷酸的总称常用作探针确定或的结构

20,DNARNA。

34

.

噬菌斑plaque

被噬菌体感染的细菌所释放的子代噬菌体会继续感染周围的细胞致使在琼脂平板上生长的菌苔

,,

中有大量的细胞发生裂解形成的透明区域

,。

4试剂及溶液配制

除另有规定外试剂为分析纯或生化试剂实验用水符合一级用水的要求

,。GB/T6682。

41焦碳酸二乙酯diethypyrocarbonateDEPC处理水

.(,)

在去离子水中加入静置高压灭菌

1000mL1mLDEPC,37℃12h,(120℃30min)。

422mol/LMgSO4

.

称取加双蒸水溶解后定容到

246.50gMgSO4·H2O,400mL(doubledistilledH2O,ddH2O),

高压灭菌

500mL,。

4310mmol/LMgSO4

.

量取加定容到高压灭菌

1mL2mol/LMgSO4ddH2O200mL,,30min。

441mol/LTris-ClpH75

.(.)

称取碱溶于中调至定容到高压灭菌

121.14gTris,800mLddH2O,pH7.5,1L,。

45SM缓冲液

.

称取量取

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