标准解读

《GB/T 35909-2018 猪肺炎支原体PCR检测方法》是一项国家标准，规定了使用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术对猪肺炎支原体进行检测的具体步骤与要求。该标准适用于疑似感染猪肺炎支原体的猪只样本，包括但不限于肺组织、鼻拭子等生物材料的病原学诊断。

根据文件内容，首先明确了实验所需的基本条件和设备，比如核酸提取试剂盒、PCR扩增仪以及电泳系统等，并对这些仪器设备提出了具体的技术参数要求。对于样本采集，标准详细描述了不同类型的样本应该如何正确地收集与保存，以确保后续分析过程中的准确性与可靠性。

在核酸提取环节，标准推荐了几种常用的DNA提取方法，并给出了每一步操作的具体指导，如裂解细胞、去除蛋白质污染、沉淀DNA等步骤的操作细节。此外，还特别强调了如何避免交叉污染，保证实验结果的真实有效性。

PCR扩增部分，则是整个检测流程的核心所在。这里不仅列出了引物序列的设计原则及其选择依据，还提供了详细的反应体系配置表，包括各种组分的比例关系及最终体积大小。同时，对于退火温度、循环次数等关键参数也给予了明确指示，以便于实验室人员能够按照统一的标准执行实验。

最后，在产物分析阶段，标准介绍了如何通过琼脂糖凝胶电泳来观察并判断目标片段是否成功扩增出来。如果出现预期大小的条带，则可以认为样本中含有猪肺炎支原体；反之，则为阴性结果。此外，为了进一步提高检测灵敏度和特异性，还可以采用荧光定量PCR或巢式PCR等更为先进的技术手段。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2018-02-06 颁布
  • 2018-09-01 实施
©正版授权
GB/T 35909-2018猪肺炎支原体PCR检测方法_第1页
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GB/T 35909-2018猪肺炎支原体PCR检测方法_第3页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T35909—2018

猪肺炎支原体PCR检测方法

DetectionofmycoplasmahyopneumoniaeusingPCRmethod

2018-02-06发布2018-09-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

猪肺炎支原体PCR检测方法

GB/T35909—2018

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

:

服务热线

:400-168-0010

年月第一版

20182

*

书号

:155066·1-59535

版权专有侵权必究

GB/T35909—2018

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位江苏省农业科学院

:。

本标准起草人邵国青冯志新熊祺琰刘茂军张磊王海燕武昱孜韦艳娜刘蓓蓓甘源华利忠

:、、、、、、、、、、、

王佳王丽

、。

Ⅰ

GB/T35909—2018

猪肺炎支原体PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪肺炎支原体检测的操作方法

PCR。

本标准适用于实验室对猪临床样品猪鼻拭子肺组织和支气管肺泡灌洗液细菌培养物和动物产

(、)、

品中猪肺炎支原体核酸的快速检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

实验室生物安全通用要求

GB19489

实验室质量控制规范动物检疫

GB/T27401

病死及病害动物无害化处理技术规范农医发号

[2017]25

兽医实验室生物安全管理规范中华人民共和国农业部公告第号

(302)

3术语和定义及缩略语

31术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

。

311

..

猪肺炎支原体MycoplasmahyopneumoniaeMHP

;

支原体科支原体属Mycoplasma成员是猪支原体肺炎的主要病原体

(),(MPS)。

注猪支原体肺炎又称猪气喘病是一种经呼吸道感染的慢性病对养猪业造成严重危害

:,,。

32缩略语

.

下列缩略语适用于本文件

。

聚合酶链式反应

PCR(polymerasechainreaction)

磷酸盐缓冲液

PBS(phosphate-bufferedsalinebuffer)

电泳缓冲液

TAETAE(tris-acetate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)

电泳缓冲液

TBETBE(tris-borate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)

Taq酶Taq聚合酶Taq

DNA(DNApolymerase)

脱氧核糖核苷三磷酸

dNTPs(deoxyribonucleosidetriphosphates)

脱氧核糖核酸

DNA(deoxyribonucleicacid)

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