光激化学发光的应用

LiCASP移液工作站LiCAHT均相发光免疫分析仪

LiCA-HT

光激化学发光的应用工作原理基本结构操作使用维护保养LiCA在均相条件下，将待测样品与含有发光材料的发光微球（纳米级）以及含有感光材料的感光微球（纳米级）等试剂进行混合，由于在发光微球与感光微球表面连接有生物活性分子（抗体或抗原等），可以直接或间接地捕捉待测样品中的靶分子，从而形成发光微球、靶分子和感光微球的免疫夹心复合物。激发光照射后，感光微球被诱导激活，并释放高能态的活性氧分子。该高能态的活性氧分子在近距离被发光微球俘获，从而传递能量以激活发光微球中的发光化合物。数微秒后，发光微球中的发光化合物将释放出高能级红光，用单光子计数器测定这些高能级光子，并通过电脑将光子数换算为靶分子浓度。而当样本不含靶分子时，无法形成免疫夹心复合物，虽然在激发光照射下活性氧离子从感光微球中释放，但无法到达发光微球，即在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红光产生。LiCA技术原理——夹心法感光微粒—亲和素发光微粒-Anti-HBsHBsAg生物素-Anti-HBs发射光610nm200nm激发光680nm1O2感光微粒—亲和素发光微粒标记抗体含待测抗原生物素标记抗体激发光680nm1O2发射光610nm200nm感光微粒—亲和素发光微粒标记抗体不含待测抗原生物素标记抗体激发光680nm1O2LiCA技术原理

——两种微粒

直径：200nm

包被亲和素红色激光680nm照射释放单线态氧

直径：200nm

用于包被抗体/抗原接受单线态氧产生610nm光感光微粒发光微粒工作原理基本结构操作使用维护保养LiCALiCASP移液工作站样品臂试剂臂试管架试剂仓枪头架微孔板废物盒

紧急暂停按钮开关机按钮试剂托盘样本架试剂仓样本仓此微孔板非彼ELISA板

未包被任何抗原/抗体LiCAHT均相发光免疫分析仪托盘上盖板通用液位置清洗液位置HT微孔板槽放置好微孔板1、高功率激光管发出的激发光经平面反射镜反射进去微孔板微孔，激发时间为0.5—1s（时间可调）2、受激发的微孔，移动两个孔距进入CPM光敏面区开始发光，同时CPM开始读光子数，读数时间为0.3—1s（时间可调）LiCAHT单光子计数器工作原理基本结构操作使用维护保养LiCA操作使用

开机开启SP加样仪、电脑主机、显示器电源电脑桌面双击“LiCATouch”图标，输入用户名1，密码1

样本输入批量输入：对已占用试管架输入无效，必须从空试管架输入样本输入依次点击：批量输入→起始管架号→起始编号→结束编号→选择项目→点击确定；单击“试管架”界面，在空闲处加载样本管架号，选择容器类型“0”类（同时加载校正液管架号100），点击确定；（确保本界面的样本位置与SP加样仪样本区的位置一致）切换至任务界面，选择为“等待”状态，核对样本信息无误单个项目录入12批量录入批量录入

定标依次点击：1、设置校准品→设置浓度→选中定标项目→根据校准品说明书输入浓度和验证码→点击保存→点击确定；定标2、点击到“试剂”界面，选中定标项目试剂条码，右键单击“定标”，为定标项目分配试管架号；3、点击“试管架”界面，在“空闲”处加载定标架及校正液管架号，确定试管类型（科室试管类型选“0”类，厂家校准品、质控品、校正液选“1”类）；乙肝两对半校准品管架号为100号。12耗材准备点击“弹出SP”按钮，从冰箱取出试剂托盘，开试剂盖，点击“试剂”界面，查看试剂信息（对未扫入试剂，采取手工输入或更换试剂位置处理）在SP加样仪上查看加入足量枪头和微孔板（若遇到有微孔板前面有已使用的孔位，先到“SP微孔板”界面，选择废弃孔位，点击“禁用选中”）在HT面板查看通用液次数是否够本次试验使用启动加样掀开HT分析仪外盖，检查清洗液量（无清洗液时，用蒸馏水代替）启动加样点击“启动加样”按钮，切换至SP微孔板界面，查看排板信息转移加样完成后，音乐响起，先转移微孔板至HT（微孔板顺序，SP从里到外，HT从左到右），安放听到“嘀”一声响，点击“完成”，切换至HT面板，查看整体进度时间，由仪器自动完成温育I、加样、温育II、读数等步骤；更换通用液若需要更换通用液时，切换至HT面板，查看通用液剩余次数，手动把通用液的黑色盖子拨开，倒置插入过液/过气针内（有落空感觉），点击“更换通用液”，两分钟内待更换完毕，点击“确定”即可

结果导出实验完成后，切换至任务界面，状态选择“全部”，类型选择“样本”，项目选择“全部”，历史查询选择“今天”，点击“导出LIS”，保存至LIS信息系统接收文件夹内；操作流程示意图前期准备样品的准备平衡校准品/定标品开机新批号试剂校准SP工作HT工作定标输出结果定标过期是是转板工作原理基本结构操作使用维护保养LiCA日保养实验结束，进行日保养：1、点击SP“弹出SP”，取出试剂旋上试剂盖，放回冰箱，把标本归位；按右边黄色按钮听到“嘀”一声关机，倒掉废枪头；2、切换至HT面板，点击“重置微孔板”，取出微孔板，关闭HT微孔板，倒掉HT废液；3、单击软件左上角仪器图标，选择“退出”系统，确定，关闭电脑；周保养SP：用纱布沾少量的无水乙醇，清洗两臂的加样枪金属枪头；HT:一周周期完成实验时，抽空检查清洗液瓶内的容量是否少于瓶的1/4；注意事项1、校准品、校正液、质控品最少不低于250ul，故一瓶能用5次左右，上机前保证没有气泡；标本量最少不低于200ul（看该标本所做项目来定）；标本离心时尽可能时间长点，确保血清内无血丝等影响结果的因素；2、定标时，容易忘记的是根据说明书输入浓度和在试剂界面选择试剂条码处点击定标；3、SP加样仪可以加样完成后，即可关机，而HT原则上是24小时上不关机；4、无论是SP、HT报故障，进行处理后都在SP面板、HT面板里进行复位；操作注意校正液、校准品、质控品上机前注意是否有气泡，若有把气泡弄走。每一瓶校正液可用到５至６次，故上机前检查下校正液的量不少于300ul（已包含死体积）。保证血清上机前没有血丝、血块漂浮在血清中。血清体积应不少于300ul。容器类型：厂家的校正液、校准品、质控品选择1类容器；医院的采血管、日立杯等选择0类容器。SP三块微孔板的位置是从上到下，HT是从左到右。放试剂到托盘时，要卡位卡好，且保证试剂A和试剂B中都没有气泡。样本的位置放置勿放错。启动加样前，进入SP面板进行复位动作。更换通用液时，通用液瓶上的字正对自己，平行按下去，有落空感觉即可。每隔一个星期查看下清洗液Ｉ是否已空。10、SP完成后，拿出试剂盒，盖上盖子，把整个托盘放回冰箱。倒掉废吸头抽屉里废吸头，关电。HT结果出来后，点击HT面板上的重置微孔板，拿出用掉的废微孔板丢掉，把废液槽上的废液倒掉。回到HT面板上，用清洗液冲洗液路一次。12、SP用完即可关闭机器，而HT二十四小时不关机，在特殊情况（如五一、十一、春节等长假）较长时间不用时，把通用液排空，即可关闭电源（电源按钮在仪器背面的左侧）。13、常见的一般故障处理：HT报温控系统不稳定时，稍等一两分钟，待其温控系统稳定下来再启动读数；SP报未复位时或设备忙时，过一两分钟点击SP复位。14、试剂定标时间过期、试剂批号更换时要重新定标；试剂开瓶稳定期过了，实验可以做，但是得到的结果会有标识。仪器的常见故障以及处理方法1.故障涉及到软件与仪器连接，处理方法：重新开关机及软件即可2.故障涉及到HT分析仪“温度不稳”，处理方法：待仪器温度稳定即可3.故障涉及到“机械走位（如X/Y/Z）失步”，处理方法：复位仪器即可4.故障涉及到SP加样仪取吸头失败，处理方法：检查是否已经放置足够的吸头5.故障涉及到SP加样仪取液失败（如：检测到有气泡、检测到有血凝块），处理方法：将气泡、血凝块、纤维蛋白丝去除，复位机器即可6.故障涉及到SP加样仪试剂余量不够，处理方法：开一瓶新的试剂，用移液枪吸取相关份数液体量至报警试剂盒中即可7.故障涉及到HT分析仪通用液已经用尽，处理方法：重新灌入一瓶新的通用液并启动更换通用液即可实验前准备工作？标本编号，平衡校正液及质控并混匀，目测校正质控的余量以及是否有气泡，查看感光液及清洗液余量，放置吸头架和板架。养成一个好的习惯，实验前准备严格规范的实验，保证实验的连续性，都是为了获得较好的实验结果。实验结束后收尾工作注意哪些？SP一旦完成加样转板之后就可以撤下试剂、校正液和质控品，存入冰箱，这样做的目的是保证组份的生物学活性，毕竟长时间暴露在室温下多少会影响其性能。HT结束后，需要清理板架，废吸头。对结果的分析，哪些标本需要复测？出现不常见配型结果，发报告时需结合该患者以前的检验报告、HBV-DNA及生化肝功结果，询问一下临床医生患者的情况。并复测一下该标本，如有条件应重新抽取患者的一份血复测。这样做的目的是对患者负责，对科室及个人的保护。过了开瓶有效期的试剂还能做实验？不建议使用。但是如果保存得当（封口膜封存，2-8摄氏度储存）过期时间不是太久的试剂也可以使用。需要注意观察此次实验结果。加样到一半提示液体量不足，如何处理？标本不足，试剂不足或有气泡，都会导致实验中断。在补齐相关的液体剔除气泡，后再点击“继续加样”。（有时候会多出来几个灰色废弃的孔位，说明软件已重新分配任务）定标不通过都有哪些因素？定标有可能会不通过，因此我们建议在定标日，定标时就别带待测和质控了，避免定标不通过造成试剂浪费，应先定标后测试。校正液偏差较大的原因是什么？如何修正？校正液量不足，吸液有气泡，用前未混匀室温平衡，或开瓶放置过久都有可能造成测值偏差较大。可以通过前后次的发光值对其修正。质控失控的原因是什么？同校正液一样：质控液量不足，吸液有气泡，用前未混匀室温平衡，或开瓶放置过久都有可能造成测值偏差较大。重新开一瓶。哪些物质会影响或干扰我们的实验结果血浆，RF，溶血性标本，腹水标本都不是我们的测试对象，建议用血清（红盖或黄盖采血管）。性能评价技术参数优势方法学光激化学发光标记物两种纳米微粒包被方式微粒包被（单板可检测多个不同项目）反应方式均相反应（抗原/抗体自由碰撞）未结合标记物免清洗/分离检测速度No.1（500测试/小时4