动物细胞工程ppt复习课程

专题(zhuāntí)2.2动物细胞工程第一页，共57页。动物(dòngwù)细胞培养动物(dòngwù)细胞融合单克隆抗体(kàngtǐ)制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础第二页，共57页。2.2.1动物(dòngwù)细胞培养和核移植技术第三页，共57页。动物(dòngwù)细胞培养第四页，共57页。（一）、概念(gàiniàn)是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些(zhèxiē)细胞生长和增殖。（二）、原理(yuánlǐ)细胞分裂增殖第五页，共57页。（三）、过程(guòchéng)幼龄动物剪碎组织原代细胞培养取动物器官和组织细胞悬浮液传代细胞培养胰蛋白酶处理单个细胞胰蛋白酶处理单个细胞第六页，共57页。细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物(dǐwù)上才能生长繁殖.第七页，共57页。细胞(xìbāo)接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断(bùduàn)增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。第八页，共57页。有关(yǒuguān)概念原代培养：从机体(jītǐ)取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。第九页，共57页。归纳(guīnà)过程取的组织(zǔzhī)、器官细胞(xìbāo)悬浮液

酶

贴满瓶壁的细胞单个细胞加入

液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原代

培养(分装前)1-10代细胞第十页，共57页。遗传物质

改变原代细胞培养(péiyǎng)加

液40—50代细胞(xìbāo)(细胞(xìbāo)株)未遗传物质

改变无限(wúxiàn)传代（细胞系）已传代培养胰蛋白

酶

第十一页，共57页。有关(yǒuguān)概念细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有(zhǐyǒu)部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第十二页，共57页。思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄(yòulínɡ)个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散(fēnsàn)成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂(fēnliè)能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。第十三页，共57页。3、胰蛋白酶(yídànbáiméi)的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质(wùzhì)主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要(zhǔyào)成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能第十四页，共57页。6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物(dòngwù)组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替(dàitì)胰蛋白酶吗？为什么？注意(zhùyì)时间的控制

不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近第十五页，共57页。1、无菌、无毒的环境(huánjìng)

保证(bǎozhèng)细胞顺利的生长增殖添加(tiānjiā)一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。（四）、动物细胞培养的条件2、营养第十六页，共57页。3、温度(wēndù)和PH

培养(péiyǎng)室中控制,使之达到36.5±0.5℃,7.2~7.4培养箱中提供(tígōng)O2和CO2（95%空气和5%CO2）4、气体环境：第十七页，共57页。植物组织培养和动物(dòngwù)细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的

细胞培养基特有成分

、植物激素葡萄糖、培养结果植物体培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得全能性增殖(zēngzhí)蔗糖(zhètáng)动物血清细胞株、细胞系细胞,某些蛋白质第十八页，共57页。（五）、动物细胞培养技术(jìshù)的应用（3）细胞(xìbāo)的生理、药理、病理研究（1）培养(péiyǎng)健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（2）基因工程的受体细胞第十九页，共57页。前景(qiánjǐng)展望资料(zīliào)一：第二十页，共57页。培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速(kuàisù)而灵敏的有效手段。资料(zīliào)二：第二十一页，共57页。人工关节——软骨(ruǎngǔ)再生1.第一次手术:从病人关节软骨中未受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。2.分离(fēnlí)软骨细胞并经三星期的体外培养，使细胞数增加约10～20倍。3.第二次手术:清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。资料(zīliào)三：结果:经过复健一年后即可恢复正常的生活。第二十二页，共57页。动物(dòngwù)体细胞核移植技术和克隆动物(dòngwù)第二十三页，共57页。（一）、动物细胞核移植(yízhí)的概念：

动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经(yǐjing)去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物(dòngwù)：用核移植的方法得到的动物(dòngwù)。第二十四页，共57页。动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组(zhònɡzǔ)并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体第二十五页，共57页。（二）、分类(fēnlèi)：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度(chéngdù)低，恢复全能性容易

细胞分化程度(chéngdù)高，恢复全能性困难克隆动物:用核移植方法得到的动物.

克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。

第二十六页，共57页。第二十七页，共57页。第二十八页，共57页。去核卵细胞供体细胞(xìbāo)电刺激使两细胞融合重组(zhònɡzǔ)细胞重组胚胎新个体代孕母牛C胚胎移植卵细胞培养无性生殖(wúxìngshēngzhí)（三）、体细胞的核移植过程高产奶牛A供体细胞培养供卵奶牛B第二十九页，共57页。（四）、体细胞核移植技术的应用(yìngyòng)前景1、在畜牧业中可以加速(jiāsù)家畜遗传改良的进程2、保护濒危(bīnwēi)物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体第三十页，共57页。（五）、体细胞核移植技术(jìshù)存在的问题1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚(qīngchu)。2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。第三十一页，共57页。2、在动物细胞培养过程(guòchéng)中遗传物质发生改变的细胞是（）

A．获得不死性的细胞B．10代以内细胞C．原代细胞D．传代细胞1、动物细胞工程技术的基础(jīchǔ)是（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD课堂反馈(fǎnkuì)练习第三十二页，共57页。3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（）A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变发生在原代培养向传代(chuándài)培养的过渡过程中D、培养至50代后传代(chuándài)细胞遗传物质没有发生改变B第三十三页，共57页。4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足(mǎnzú)以下条件（）①无毒的环境(huánjìng)②无菌的环境(huánjìng)③培养基需要加入血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D第三十四页，共57页。5、动物细胞培养的特点(tèdiǎn)（）①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D、③④⑤⑥A第三十五页，共57页。6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般(yībān)取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。动物(dòngwù)胚胎或幼龄动物(dòngwù)剪碎胰蛋白(dànbái)使细胞与培养液充分接触，便于培养第三十六页，共57页。（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老(shuāilǎo)死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为__。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。`动物(dòngwù)血清10原代培养(péiyǎng)胰蛋白酶细胞悬浮液第三十七页，共57页。第三十八页，共57页。动物(dòngwù)细胞融合与单克隆抗体第三十九页，共57页。动物(dòngwù)细胞融合第四十页，共57页。细胞(xìbāo)A细胞(xìbāo)B杂种(zázhǒng)细胞灭活的病毒物理法化学法第四十一页，共57页。用灭活的病毒诱导(yòudǎo)动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核第四十二页，共57页。细胞融合与融合诱导(yòudǎo)细胞融合物质诱导剂：病毒、聚乙二醇

诱导细胞融合的病毒必须(bìxū)灭活。

思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？第四十三页，共57页。第四十四页，共57页。第四十五页，共57页。第四十六页，共57页。第四十七页，共57页。第四十八页，共57页。第四十九页，共57页。二、单克隆抗体(kàngtǐ)什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有(jùyǒu)免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞产生抗体。第五十页，共57页。单克隆抗体(kàngtǐ)由单个B淋巴细胞(xìbāo)经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞(xìbāo)群，这一细胞(xìbāo)群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高第五十一页，共57页。单克隆抗体制备(zhìbèi)过程

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选(shāixuǎn)杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体(kàngtǐ)的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体第五十二页，共57页。单克隆抗体(kàngtǐ)的应用与常规(chángguī)抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高。