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文档简介

海藻凝集素提取工艺材 料：孔石莼争论方法：正交试验法具体步骤：一、样品处理采集、洗净〔过滤海水、并把水吸干冷冻100ºC、110ºC研磨成粉〔未使用时冷冻〕二、凝集素粗提取液1.6g2. 按〔质量体积比〕1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30溶于含缓冲溶液1：0.15mol/LNaCl的PBS〔0.015mol/L，Na2

HPO—4NaHPO，PH7.2〕2 43. 在缓冲溶液浸泡5101525354ºC〕4. 离心〔4ºC，7000r/min，30min〕5. 200ml三、凝集素提取的单因素试验分别检测烘干温度、液料比、缓冲溶液、浸泡时间等对凝血效价的影响。因素温度因素温度缓冲液时间水平液料比123因素温度因素温度缓冲液时间试验号1液料比效果23456789101112131415161718192021222324252627其次阶段试验四、MNL硫酸铵分级范围确实定1、在冰水浴条件下，取320ml粗提液平均分成1616210%、1520%、2530%、35%、4045505560657580859016个硫酸铵分级范围进展盐析3、离心〔4℃，7000rmin-1，30min，得到的沉淀物溶于适量的生理盐水中，用生理盐水透析至无 集活性。

，测4

和凝280nm4.选择纯化倍数最高的盐析范围作为硫酸铵分级范围。对生理盐水充分透析。五、DEAE-52DEAE-52纤维素经处理后装柱，层析柱为1.6cm×30cm，用pH7.0.01molL-1Tris-HCl2ml70上柱，用pH7.5，0.01mol·L-1Tris-HClA

<0.01，280nm然后，梯度洗脱〔A300mlB300ml0.8molL-1NaCl的平衡液，流速为18m·h-1,每管3ml,A 测定280nm蛋白含量，对蒸馏水透析至无Cl-，用0.9%的NaCl的PBS(0.015mol·L-1，Na

，pH7.2)缓冲液反透析，用兔红细胞检测2 4 2 4活性，收集有活性局部，透析、冻干得凝集素离子交换层析样品。六、SephadexG-200分子筛凝胶层析ephadexG-2001.6cm×90cm，所上的样品为经过浓缩的离子交换层析得到的活力峰局部，洗脱液为含0.02%0.9%的NaCl的PBS(0.015mol·L-1，-NaHPOpH7.218ml·h

-13ml。用

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