微病毒感染的检查方法与防治原则

微病毒感染的检查方法与防治原则第一页，共二十九页，2022年，8月28日目的与要求了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。第二页，共二十九页，2022年，8月28日第一节病毒感染的检查方法第三页，共二十九页，2022年，8月28日病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包涵体分离培养第四页，共二十九页，2022年，8月28日一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：

1.标本用“双抗”或两性霉素B处理

2.低温保存，尽快送检

3.血清学诊断采双份血清第五页，共二十九页，2022年，8月28日二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养

细胞培养（cell

culture）

鸡胚接种（egginoculation）

动物接种（animalinoculation）第六页，共二十九页，2022年，8月28日1.鸡胚培养

采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜

痘苗病毒、人类疱疹病毒

尿囊腔接种部位流感病毒、腮腺炎病毒

羊膜腔

流感病毒的初次分离

卵黄囊嗜神经病毒

第七页，共二十九页，2022年，8月28日第八页，共二十九页，2022年，8月28日1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂第九页，共二十九页，2022年，8月28日第十页，共二十九页，2022年，8月28日2.动物接种

应用：尚无敏感细胞的病毒培养

动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒第十一页，共二十九页，2022年，8月28日病毒的分离培养

3.细胞培养

单层细胞培养（monolayercellculture）

分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）第十二页，共二十九页，2022年，8月28日病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞第十三页，共二十九页，2022年，8月28日1．病毒增殖鉴定

(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,

CPE）

①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定

第十四页，共二十九页，2022年，8月28日①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落第十五页，共二十九页，2022年，8月28日麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)第十六页，共二十九页，2022年，8月28日③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)第十七页，共二十九页，2022年，8月28日腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋红细胞表面HA受体第十八页，共二十九页，2022年，8月28日(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)

埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)

埃可病毒(+)第十九页，共二十九页，2022年，8月28日2.病毒数量与感染性测定1.蚀斑形成试验

（plaqueformationtest）

2.50％组织细胞感染量（50％tissueculture

infectiousdose,TCID50）感染性病毒量第二十页，共二十九页，2022年，8月28日2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大第二十一页，共二十九页，2022年，8月28日3.病毒血清学鉴定

用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型

(1)血凝抑制试验--—正粘病毒型与亚型鉴定病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）

——多种病毒鉴定第二十二页，共二十九页，2022年，8月28日三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序第二十三页，共二十九页，2022年，8月28日四、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等第二十四页，共二十九页，2022年，8月28日1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体

病毒失去感染性

特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用第二十五页，共二十九页，2022年，8月28日五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）第二十六页，共二十九页，2022年，8月28日病毒的快速诊断光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交SouthernblotPCRNorthernblot第二十七页，共二十九页，2022年，8月28日第二节病毒感染的防治原则第二十八页，共二十九页，2022年，8月28日灭活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重组载体疫苗（recombinantca