黄龙尾药材薄层色谱鉴别

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材料

FA1104型0.1mg电子分析天平（上海上平仪器公司）;JP250YHE型超声波清洗器（南京垒君达超声电子设备有限公司）;硅胶G板（青岛海洋化工厂）。正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿均为分析纯，水为灭菌注射用水;三批黄龙尾试验样品分别采自昆明谷律（A20220801），大理清碧溪（B20220818）、楚雄罗茨（C20220709），经云南中医药大学杨树德教授鉴定为黄龙尾。

2方法与结果

2.1.1系统预试验文献报道，黄龙尾（AgrimoniapilosaLedeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.）主要含有黄酮，鞣质和酚类成分，黄酮类有槲皮素、芦丁、儿茶素等;鞣质类有鞣花酸-4-O-β-D-吡喃木糖苷，鞣花酸等;酚类有仙鹤草酚等。此外，还有三萜皂苷，酯类成分。根据化学成分研究报道再通过化学成分系统预测验，结果显示鞣质、酚性成分和黄酮是黄龙尾主要的化学成分[3-7]。

2.1.2薄层色谱开展系统筛选根据文献资料和预试验结果，按黄龙尾药材所含鞣质以及酚性成分研究制定薄层色谱鉴别方法。小极性片面开展系统优选：环己烷-乙酸乙酯（10：1;5：1;3：1），环己烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-甲醇（20：1;15：1;10：1），三氯甲烷-甲醇-甲酸（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-水（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（20：1：0.1：0.1）上行开展;大极性片面开展系统优选：三氯甲烷-甲醇（3：1;2：1;1：1），三氯甲烷-丙酮（1：1），正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上层），三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10，下层），三氯甲烷-乙醇（（3：1;2：1;1：1），上行开展。

2.1.3供试品提取方法优化供试品溶液制备分别采用了以下8种方法举行筛选和优化。方法1：取本品粉末1g，加乙醇20mL，回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液;方法2：取本品粉末1g，加乙醇20mL，回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液;方法3：取本品粉末1g，加乙醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液;方法4：取本品粉末1g，加乙醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液;方法5：取本品粉末1g，加乙酸乙酯20mL，回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液;方法6：取本品粉末1g，加乙酸乙酯20mL，回流提取1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液;方法7：取本品粉末1g，加乙酸乙酯20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液;方法8：取本品粉末1g，加乙酸乙酯20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。

对照物质的选用目前尚无鉴别该药材专属性对照品，故鉴别工程中选择对照药材为对照物质，照供试品溶液的制备方法制备对照药材溶液。

对照药材溶液制备：小极性片面：取黄龙尾对照药材1g，加乙酸乙酯20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为对照药材溶液。

大极性片面：取黄龙尾对照药材1g，加乙醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.4检视方法选择喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点明显;喷以三氯化铁试液，置日光下检视，置紫外光灯（254nm+365nm）下检视结果见表1。

2.1.5方法耐用性考察

2.1.5.1不同厂牌的薄层板硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）;硅胶G薄层板（青岛美高化工有限公司）;硅胶G薄层板（烟台信德化工有限公司）。

2.1.5.2点样方式点样量点样方式为接触点样;点样量为1μL、2μL、3μL、4μL、5μL、8μL。

2.1.5.3温度及相对湿度的影响按照试验所得薄层色谱条件，考察本品在温度10～30℃、相对湿度为35%～80%开展时，对薄层色谱结果的影响。结果说明，在上述温度、相对湿度范围内对该薄层色谱结果无明显影响。

2.1.5.4预平衡的影响按照试验所得薄层色谱条件，考察未平衡、平衡10min、平衡20min及平衡30min开展，对薄层色谱结果的影响。结果说明，未平衡、平衡10min、平衡20min及平衡30min开展，所得斑点的分开度均较好，因此，为了简化操作程序，采用未平衡开展。

2.1.5.5重复性不同产地的3批样品的检测结果说明，该方法具有重复性。

2.2结果试验说明，小极性片面：采用方法8制备供试品溶液，硅胶G薄层板，点样量2μL，以三氯甲烷-甲醇（20：1）为开展剂，喷以含有10%硫酸乙醇试液，在105℃烘烤至斑点明显.

大极性片面：试验说明，采用方法3制备供试品溶液，硅胶G薄层板，点样量2μl，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上层）为开展剂，喷以三氯化铁试液后置日光下检视，所得薄层色谱斑点明显，分开较好。

3议