中草药化学成分检出试剂配制法

中草药化学成分检出试剂配制法中草药化学成分检出试剂配制法中草药化学成分检出试剂配制法中草药化学成分检出试剂配制法常用判断试剂的配制和应用一、生物碱积淀试剂：1．碘化铋钾（Dragendorff）试剂：取次硝酸铋3g溶于30%硝酸（比重1.18）17mL中，在搅拌下慢慢加碘化钾浓水溶液（27克碘化钾溶于20mL水），静置一夜，取上层清液，加蒸馏水稀释至100mL。附：改良的碘化铋钾试剂：甲液：0.85g次硝酸铋溶于10mL冰醋酸，加水40mL。乙液：8g碘化钾溶于20mL水中。溶液甲和乙等量混杂，于棕色瓶中可以保存较长时间，可作积淀试剂用，如作层析显色剂用，则取上述混杂液1mL与醋酸2mL，混杂即得。目前市场上碘化铋钾试剂可直接供配制：7.3g碘化铋钾，冰醋酸10mL，加蒸馏水60mL。2．碘化汞钾（Mayer）试剂：氯化汞1.36g和碘化钾5g各溶于20mL水中，混杂后加水稀释至100mL。3．碘一碘化钾（Wagner）试剂：1g碘化钾液于50mL水中，加热，加2mL醋酸，再用水稀释至

100mL。4．硅钨酸试剂：

5g硅钨酸溶于

100mL水中，加

10％盐酸少量至

pH2左右。5．苦味酸试剂：

1g苦味酸溶于

100mL水中。6．鞣酸试剂：鞣酸

1g

加乙醇

1mL溶解后再加水至

10mL。7．硫酸铈——硫酸试剂：

0.1g

硫酸铈混悬于

4mL水中，加入

1g三氯醋酸，加热至沸，逐滴加入浓硫酸至澄清。8．钒酸钠－硫酸试剂：1g钒酸钠溶于100ml硫酸。9．雷氏铵盐试剂：2％硫氰化铬铵溶液（临用时配制）。10．Ehrlich试剂：1g对二甲氨基苯甲醛溶于25m136%盐酸和

75ml

甲醇混杂溶液中。二、苷类检出试剂：（一）糖的检出试剂：糖判断试剂1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2滴～3滴，混匀，沿试管壁慢慢加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。（2）斐林试剂检查还原糖。溶液I：6.93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液

II：34.6g

酒石酸钾钠、

10g氢氧化钠溶于

100ml

水中。取1ml样品热水提取液，加入

4滴～5滴用时配制的溶液

I、II

等量混杂液，在开水浴中加热数分钟，产生砖红色积淀为阳性反应。如检查多糖和苷，取

1ml

样品水提液，加入1m110%盐酸溶液，在开水浴上加热

10min，过滤，再用

10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。（3）氨性硝酸银试剂：硝酸银1g，加水20ml溶解。4）茴香醛一硫酸试剂：硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。5）苯胺一邻苯二甲酸试剂：苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。（6）1，3．二羟基萘酚一磷酸试剂：0.2％1,3-二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混杂均匀后使用。7）苯胺-二苯胺一磷酸试剂：苯胺4m1、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。8）2，3，5-三苯基氯化四氮唑（T.T.C）试剂溶液I：4％T.T.C甲醇溶液。溶液II：4％氢氧化钠溶液。临用时将溶液I和II等体积混杂。9）三氯化铁－冰醋酸（K.K）试剂检查α－去氧糖，常用于强心苷。溶液I：1％三氯化铁溶液0.5m1，加冰醋酸至100m1。溶液II：硫酸。取样品乙醇提取液1ml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁慢慢加入溶液II1m1，静置分层，上层渐显蓝色，基层显红色或棕色为阳性反应（其颜色随苷元羟基和双键的地址和个数不同样而不同样）。（10）咕吨氢醇冰醋酸（Xanthydrol）试剂检查α-去氧糖（常用于强心苷）。10mg咕吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入1ml硫酸混杂。取1ml样品，加入试剂1ml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。11）Gregg-G1svold试剂检查2,6-去氧糖。溶液I：10％三氯化铁溶液。溶液II:1％盐酸甲醇溶液（97.2ml甲醇中含2.8ml盐酸）。0.5ml溶液I与100ml溶液II混杂。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混杂试剂，110℃加热5min，显蓝色为阳性反应。（12）3，5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂检查2-去氧糖。3，5-二氨基苯甲酸二盐酸盐

1g

溶于

80％磷酸

25ml，加水稀释至

60m1。（13）对硝基苯胺－过碘酸试剂

检查去氧糖。溶液

I：饱和偏高碘酸溶液

1份加水

2份混匀。溶液

II:1

％对硝基苯胺乙醇溶液

4份与盐酸

1份混杂。先喷溶液I，放置10min，再喷溶液II，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。（二）酚类1．三氯化铁试剂：5%三氯化铁的水溶液或醇溶液。2．三氯化铁-铁氰化钾试剂：甲液：2%三氯化铁水溶液乙液：1%铁氰化钾水溶液应用时甲液、乙液等体积混杂或分别滴加。3．4-氨基氨替比林-铁氰化钾（Emerscn）试剂：甲液：2%4-氨基安替比林乙醇液乙液：3%铁氰化钾水溶液，（或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液）。4．重氮化试剂：本试剂系由对硝基苯胺和亚硝酸钠在强酸下经重氮化作用而成，由于重氮盐不牢固很易分解，所本试剂应临用时配制。甲液：对硝基苯胺0.35g，溶于浓盐酸5mL，加水至50mL。乙液：亚硝酸钠5g，加水至50mL应用时取甲、乙液等量在冰水浴中混杂后，方可使用。5．Gibbs’试剂：甲液：0.5%2，6-二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇溶液。乙液：硼酸-氯化钾-氢氧化钾缓冲液（pH9.4）。6．铁氰化钾-三氯化铁试剂：溶液I：1％铁氰化钾溶液。溶液II：2％三氯化铁溶液。临用前等体积混杂。（三）内酯、香豆素类1．异羟肟酸铁试剂甲液：新鲜配制的7％羟胺盐酸盐的甲醇液。乙液：10％氢氧化钾的甲醇液丙液：1％氯化铁甲醇溶液。应用时甲、乙、丙三液体按次次滴加，或甲、乙两液混杂滴加后再加丙液。2．4-氨基安替比林-铁氰化钾试剂（见二-（二）-3）。3．重氮化试剂：（见二-（二）-4）。进行2、3试验时样品应先加3%碳酸钠溶液加热办理，再分别滴加试剂。4．开环一闭环试剂甲液：1%氢氧化钠溶液。乙液：2%盐酸溶液。（四）黄酮类：1．盐酸-镁粉试剂：浓盐酸和镁粉2．三氯化铝试剂：2%三氯化铝甲醇溶液3．醋酸镁试剂：1%醋酸镁甲醇溶液4．碱式醋酸铅试剂：饱和碱式醋酸铅（或饱和醋酸铅）水溶液。5．氢氧化钾试剂：

10%氢氧化钾水溶液。6．氧氯化锆试剂：

10%氧氯化锆甲醇溶液。7．锆一枸橼酸试剂：甲液：2%氧氯化锆甲醇液。乙液：2%枸橼酸甲醇液。8．硼氢化钾试剂：

2％四氢硼钾的甲醇溶液。（五）蒽醌类：1．氢氧化钾试剂：

10%氢氧化钾水溶液。2．醋酸镁试剂：

10%醋酸镁甲醇溶液。3．1%硼酸试剂：

1%硼酸水溶液。4．浓硫酸试剂：浓硫酸。5．碱式醋酸铅试剂：（见二一（四）一

4）。（六）强心苷类1．3，5-二硝基苯甲酸（Kedde）试剂。甲液：2%3，5-二硝基苯甲酸甲醇液。乙液：1N氢氧化钾甲醇溶液：应用前甲、乙两液等量混杂。2．碱性苦味酸（Baljet）试剂：甲液：1%苦味酸水溶液。乙液：10%氢氧化钠溶液。3．亚硝基铁氰化钠一氢氧化钠的（Legal）试剂：甲液：吡啶乙液：0.5%亚硝基铁氰化钠溶液。丙液：10%氢氧化钠溶液（七）皂苷类：1．溶血试验：2%血球生理盐水混悬液：新鲜兔血（由心脏或耳静脉取血）

，合适，用洁净小毛刷迅速搅拌，除去纤维蛋白并用生理盐水屡次离心冲洗至上清液无色后，

量取沉降红血球用生理盐水配成

2%混悬液，贮冰箱内备用（储藏期

2-3

天）。2．醋酐

-浓硫酸（

Liebermann）试剂：甲液：醋酐。乙液：硫酸。3．浓硫酸试剂：浓硫酸。（八）含氰苷类：1．苦味酸钠试剂：合适大小的滤纸条，浸入苦味酸饱和水溶液；浸透后取出晾干，再浸入10%碳酸钠水溶液内，迅速取出晾干即得。2．普鲁士兰试剂：甲液：10%氢氧化钠液。乙液：10%硫酸亚铁水溶液，用前配制。丙液：10%盐酸。丁液：5%三氯化铁液。三、萜类、甾体类检出试剂1．香草醛一浓硫酸试剂：5%香草醛浓硫酸液（或0.5g香草醛溶于100mL硫酸一乙醇（4：1）中）。2．三氯化锑（Carr-Price）试剂：25g三氯化锑溶于15g氯仿中（亦可用氯仿或四氯化碳的饱和溶液）。3．五氯化锑试剂：五氯化锑一氯仿（或四氯化碳）1：4，用前新鲜配制。4．醋酐一浓硫酸试剂：（见二一（七）一2）。5．氯仿一浓硫酸试剂：甲液：氯仿（溶解样品）。乙液：浓硫酸。6．间二硝基苯试剂：甲液：2%间二硝基苯乙醇液。乙液：14%氢氧化钾甲醇液。用前甲、乙两液等量混杂。7．三氯醋酸试剂：3.3g三氯醋酸溶于10mL氯仿，加入1-2滴过氧化氢。四、鞣质类检出试剂：1．三氯化铁试剂2．三氯化铁一铁氰化钾试剂3．4-氨基安替比林一铁氰化钾试剂4．明胶试剂：10g氯化钠，1g明胶，加水至100mL。5．醋酸铅试剂：饱和醋酸铅溶液。6．对甲基苯磺酸试剂：20%对甲基苯磺酸氯仿溶液。7．铁铵明矾试剂：硫酸铁铵结晶（NH4Fe(SO4)2·12H2O）lg，加水至100mL。五、氨基酸、多肽和蛋白质检出试剂1．双缩脲（Biuret）试剂：甲液：1%硫酸铜溶液。乙液：40%氢氧化钠液。应用前等量混杂。2．茚三酮试剂：0.3g茚三酮溶于正丁醇100mL中，加醋酸3mL（或0.2g茚三酮溶于100mL乙醇或丙酮中）。六、有机酸检出试剂1．溴麝香草酚兰试剂：0.1%溴麝香酚兰（或溴酚兰、或溴甲酚绿）乙醇液。2．吖啶试剂：0.005%吖啶乙醇液。3．芳香胺

-还原糖试剂，苯胺

5g，木糖

5g溶于

100mL乙醇溶液中。七、其他检出试剂1.碘试剂检查一般有机化合物。（1）碘蒸气起初将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间内碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的矫捷度。（2）0．5％碘的氯仿溶液

喷洒试剂，置空气中待过分的碘挥发后，喷

1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。2．硫酸试剂检查一般有机化合物5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后，置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同样化合物呈不同样颜色）。3．重铬酸钾一硫酸试剂检查一般有机化合物。5g重铬酸钾溶于100m140％硫酸中。喷该试剂后，150℃加热至斑点出现（不同样化合物呈不同样颜色）。4．磷钼酸试剂检查还原性成分。5％磷钼酸乙醇溶液。喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。5．磷钨酸试剂检查还原性成分。20％磷钨酸乙醇溶液。喷洒后，120℃烤，还原性物质呈蓝色斑点。6．硝酸银一氢氧化铵试剂检查还原性成分溶液I：0.1mol／L硝酸银溶液。溶液II：10％氢氧化铵溶液