甲醛滴定法测定氨基氮

实验二甲醛滴定法测定氨基氮一、 目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。二、 原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：R-CH-COO::~~、R-CH-COO"+H1品3 晶2-NH3是弱酸，完全解离时pH为11〜12或更高，若用碱滴定-NH3所释放的H+来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10,很难准确指示滴定终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚欧的变色域内pH9.0左右)。因此可用酚欧作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。RCIICOO-III+ ｝中和kl.血HUHURCI]C00"INHCH.口HR-CH-COO-N(CIIz0II)2如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。三、仪器、试剂、材料仪器25mL锥形瓶；碱式滴定管；吸管。试剂0.1mol/L标准甘氨酸溶液准确称取7.5g甘氨酸，溶解后定容至1000mL。0.02mol/L标准氢氧化钠溶液酚欧指示剂(0.5%酚欧乙醇溶液)：取0.5g酚欧，用95%乙醇溶解，并稀释至100mL，无需加水。400mL中性甲醛溶液在50mL36〜37%分析纯甲醛溶液中加入1mL0.5%酚欧乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。四、操作方法氢氧化钠溶液标定

（1） 准确称取0.08g邻苯二甲酸氢钾；（2） 用量筒准确量取50mL纯净水，溶解完全；（3） 加入2滴酚酞指示剂，（4） 用氢氧化钠溶液滴定，记录体积；平行做2次。（5） 求消耗氢氧化钠溶液平均值，用公式计算氢氧化钠溶液浓度。取3个25mL的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2mL和水5mL，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。取未知浓度的甘氨酸溶液2mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。五、结果处理CNaOH=m/CNaOH=m/（G邻*V）注解：m：g；G邻：204.2；V：ml回收率计算：甘氨酸氨基氮回收率％=实际测得量加入理论量甘氨酸氨基氮回收率％=实际测得量加入理论量X100公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。氨基氮计算：氨基氮（毫克/毫升）= （V未一V对）XNNaOHX14.008公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V对为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。六、注意事项标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。中性甲醛溶液在临用前配制，若已放置一段时间，则使用前需要重新中和。本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行