微生物的选择培养和计数课件高二下学期生物人教版选择性必修3

项目类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台消毒和灭菌的比较微生物的基本培养技术及应用第2节

第一章

发酵工程

第2课时微生物的选择培养和计数一、选择培养基PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年，科学家在美国黄石国家公园的热泉中筛选出耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。1.科学实例：

水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。耐高温的酶耐高温生物体耐高温环境（热泉、火山口）寻找寻找寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(1)筛选原因：(2)启示：一、选择培养基耐寒微生物耐热微生物石油分解菌2.实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。温泉冰川油田一、选择培养基3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。类型条件分离得到的菌种（1）改变培养条件（2）添加某种化学物质

（3）营养缺陷70～80℃的高温水生栖热菌加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高浓度食盐金黄色葡萄球菌不加碳源不加氮源自养型微生物固氮菌(青霉素能杀死细菌、放线菌)石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物拓展：1、选择培养基配制的三种方法（1）利用营养缺陷进行选择培养

*营养缺陷的微生物不能正常生长（2）利用添加某种化学物质进行选择培养

*添加杀伤性物质，有抗性的可以生长，无抗性的死亡（3）利用改变培养条件进行选择培养

*调节温度、pH等生长条件，只有适应的可以生长2.实例（1）目的：分离酵母菌、霉菌等真菌，防止细菌生长

原理：青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用

配制：使用

__________的培养基（2）目的：分离固氮菌

原理：固氮微生物能利用空气中的氮气

配制：使用

___________________的培养基（3）目的：分离自养型微生物

原理：自养型微生物能利用无机碳源

配制：使用_

______________________的培养基（4）目的：分离耐酸菌

原理：耐酸菌能在pH为酸性的条件下生长

配制：使用

___________的培养基加入青霉素不加氮源（以N2为氮源）不加有机碳源（以CO2为碳源）将pH调至酸性思考▪讨论选择培养基配方的设计

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。讨论1：如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌该进行什么操作：1、方法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。第一步：分离纯化第二步：计数稀释涂布平板法还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。2、实验的具体操作：

2）土壤取样：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌1）制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。KH2PO4和Na2HPO4的作用是：①提供无机盐；②调节pH。

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1mL1mL1mL1mL1mL1mL90mL无菌水10g注意：在火焰旁操作3）样品梯度稀释1×101×1021×1031×1041×1051×1061×1076支试管，分别加入9ml无菌水③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。5）待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入恒温箱培养。观察并计算菌落数量4）涂布：5）培养与观察：稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照恒温培养箱待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。资料1：培养不同微生物往往需要不同培养温度和培养时间。细菌：30～37℃，1～2d放线菌：25～28℃，5～7d霉菌：25～28℃，3～4d。资料2常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。思考：培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，为什么？未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键，如果无菌落生长，说明了什么？培养未接种的培养基的作用是对照。未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。思考讨论菌落的计数

在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样做的目的是什么？(1)无菌操作:

(2)做好标记:

(3)规划时间:

本实验耗时较长，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。①取土样的用具在使用前都需要

。②实验操作均应在

进行。4.操作提示灭菌酒精灯火焰旁本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的

等。稀释度操作示范视频：注意事项：1.对土壤中分解尿素细菌的分离与计数是否要对照组，如果要该如何设置，所起的作用是？不涂布稀释液的选择培养基➯用以验证培养基中是否含有杂菌、2.对土壤中分解尿素细菌的分离与计数时如果要判断选择培养基是否具有选择作用，该如何设置实验？接种到牛肉膏蛋白胨培养基在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。3.得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？不一定，还需要进一步的鉴定因为有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。1.用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？不能。平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。2.与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌类的密度，再通过计算可以得知原液的菌落数。比较平板划线法稀释涂布平板法工具接种环涂布器原理通过接种环在琼脂固体培养基的表面_________操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。将菌液进行一系列的_________，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开（可计数），但操作复杂平板示图共同点使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落连续划线梯度稀释两种分离纯化细菌方法的比较①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。选择30-300个菌落的平板进行计数；至少取3个平板取其平均值统计的菌落往往比活菌的实际数目

；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。（一般选用104、105、106稀释液）②计数原则:1.稀释涂布平板法--间接计数法——活菌计数法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照少1.请计算：4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为

个。1.1×108核心探讨每g样品中的菌落数＝(C÷V)×MM--稀释倍数C--稀释后平板上生长的平均菌落数V--涂布平板时所取的稀释液体积(mL)例题1：某同学将10g土样稀释倍数为106

的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B3.计算：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×MM--稀释倍数C--稀释后平板上生长的平均菌落数V--涂布平板时所取的稀释液体积(mL)统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。三、微生物的数量测定是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定容积里样品中微生物的数量。2.计数板计数法--直接计数法——显微镜直接计数不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察……缺点：统计结果一般活菌数和死菌的总和，故统计的结果比实际值偏大。每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数微生物的计数方法比较内容显微镜直接计数法稀释涂布平板法主要用具显微镜、细菌计数板或血细胞计数板涂布器计数依据细菌个数培养基上菌落数优点计数方便、操作简单计数的是活菌缺点不能区分死菌与活菌操作较复杂且有一定误差计算公式每毫升原液含菌株数＝400×1000×每小格平均菌株数×稀释倍数每毫升原液含菌株数＝平均菌落数/所用涂布液体积×稀释倍数实验结果：Ⅰ延滞期Ⅱ对数期Ⅲ稳定期Ⅳ衰退期【结果分析与评价】◆如果未接种的培养基上没有菌落生长，说明没有被杂菌污染。◆如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。如果得到了两个或多个菌落数为30-300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。2.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？【结果分析与评价】◆如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。◆如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？【结果分析与评价】4.甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。①甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。该同学的统计结果

(填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，应如何改进？为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。不可靠②乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理

(填“合理”或“不合理”)。◆微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应

，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。不合理分析实验过程中可能的影响因素5.某同学在三种稀释度下取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到了以下的数据，试计算1g样品的活菌数。平板稀释度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318

105的稀释度下的菌落数在30～300范围内(212＋234＋287)÷3÷0.1×105＝2.44×108(个)。①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。1.培养基的制备②配方：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。探究▪实践葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml制备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备牛肉膏蛋白胨培养基用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，用以尿素为唯一氮源的培养基做实验组，用来判断选择培养基是否具有选择作用。①提供无机盐；②调节pH。测细菌数：一般用104、105、106稀释液测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液（2）样品的稀释选择一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？思考测定土壤中细菌的数量，一般选用

倍稀释的稀释液进行平板培养，当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放

一点。1×104、1×105和1×106宽选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基图中的1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用；另外，还要有两个对照，即不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌①实验组：1、2、3组接种的选择培养基➯用以分离并计数能分解尿素的细菌第4组接种的牛肉膏蛋白胨培养基➯用以判断选择培养基是否具有选择作用②对照组：第5组不涂布稀释液的选择培养基➯用以验证培养基中是否含有杂菌第6组牛肉膏蛋白胨培养基➯用以验证培养基中是否含有杂菌实验结果：前3组实验组分离得到单菌落；

第4组得到多种菌落；

第5,6组正常情况下无菌落。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3

脲酶原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性6.进一步探究本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌，对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料，进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。酚红培养基——鉴定分解尿素的细菌【课外延伸】鉴别培养基：不影响微生物的生存①液体培养基可以直接看液体的变色情况；②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红—美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。

到生活中去测定饮水中大肠杆菌数量的方法伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色，并带绿色金属光泽。选择培养基与鉴别培养基的比较项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌，判断下列相关表述是否正确。（1）这种培养基是一种选择培养基。（）（2）利用这种石油降解菌可以降解石油，修复土壤。（）（3）相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。（）2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（）A.菌落中的细菌数目是固定的B.平板上的一个菌落就是一个细菌C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌√√√D练习与应用(P20)练习与应用二、拓展应用1.反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此从中分离能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。（1）现在要从土壤中分离纤维素分解菌，请你给出详细的实验方案。可以参考本节“探究·实践”中的设计思路进行设计。练习与应用（2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列问题。练习与应用（3）有同学说可以把滤纸埋在土壤中，经过一段时间后，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。人工设置适合纤维素分解菌生存的环境，腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物课题3分解纤维素的微生物的分离1.纤维素：纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。【课题背景】

纤维素生物燃料：

最有希望替代石油能源！

农作物秸秆：米秸、麦秸、稻草、草、木屑等富含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低。科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，转化为种类繁多的生物燃料(甚至是航空燃油)。植物每年产生的纤维素超过70亿吨，分布植物的根、茎、叶中。草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？在草食性动物等的消化道内，共生有分解纤维素的微生物，产生纤维素酶而分解纤维素。2.纤维素酶：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素3.纤维素分解菌的筛选(1)筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。刚果红染色法颜色(2)原理：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被__________分解后，红色复合物无法形成，出现以______________为中心的_______，可以通过________________来筛选纤维素分解菌。红色复合物纤维素酶纤维素分解菌

透明圈是否产生透明圈土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别培养基挑选菌落什么样的环境取样?①培养的目的?②选择培养基的特点?挑选什么样的菌落?①鉴别培养基的特点?②如何鉴别?【实验设计】1.纤维素分解菌选择培养基属于______(固体、液体)培养基，原因是_______________。【资料二】选择培养阅读有关内容回答以下几问题：液体没有添加琼脂2.该培养基对微生物_______(具有，不具有)选择作用。如果具有，其选择机制是：__________________________________________________________________。具有以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖3.若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。葡萄糖纤维素粉培养基组成提供的主要营养物质CMC-Na5~10g酵母膏1gKH2PO40.25g土豆汁100mL琼脂15g上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL(水溶性羧甲基纤维素钠)碳源碳源、氮源、生长因子无机盐碳源、生长因子凝固剂水纤维素分解菌的鉴别培养基方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法二：在倒平板时就加入刚果红。【资料三】刚果红染色法染色法优点缺点方法一

方法二

颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。操作繁琐，液体会使菌落之间发生混杂。操作简便，不存在菌落混杂问题。产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。这两种方法各有哪些优点与不足？〖思考〗挑选产生透明圈的菌落挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C~370C培养，可获得纯化培养。分离到的能够产生透明圈的微生物一定是纤维素分解菌吗？【结果分析与评价】不一定获得了分解纤维素的微生物。为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行________________实验，纤维素酶的发酵方法有______发酵和______发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________含量进行定量测定。发酵产纤维素酶

液体

固体

葡萄糖【课题延伸】分解纤维素的微生物的分离纤维素酶种类、作用、催化刚果红染色筛选原理实验设计土壤取样选择培养涂布培养纯化培养前置染色法后置染色法富含纤维素土壤增大分解菌含量染色鉴别分离出分解菌【课堂总结