应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析

应用高效液相色谱法进行

血红蛋白分析血液室颜慕霞1应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析1/46地中海贫血及异常血红蛋白病知识介绍一、地中海贫血综合征（地贫）是指因遗传缺点，血红蛋白中一个或几个珠蛋白肽链合成受到抑制，但珠蛋白肽链分子结构并无异常一个单基因遗传病。2应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析2/46二、异常血红蛋白病异常血红蛋白则是指那些因为遗传上缺点，造成珠蛋白分子结构异常血红蛋白。因为异常血红蛋白造成溶血性贫血等临床表现，叫做异常血红蛋白病。异常血红蛋白病与地贫常并存于同一个患者称为异常血红蛋白病合并地贫。3应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析3/46血红蛋白组成由一个珠蛋白分子和四个亚铁血红素结合而成。每一个珠蛋白分子皆有两种不一样珠蛋白肽链双结合组成一个Hb类型。人类主要有以下四种珠蛋白肽链：α、β、δ和γ

4应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析4/46地贫和异常血红蛋白病发生当控制珠蛋白链合成珠蛋白基因发生突变或缺失，就使对应珠蛋白链合成降低或完全不能合成，造成Hb合成异常，就出现了异常Hb病或地贫。5应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析5/46正常三种血红蛋白HbA:α2β2

HbA2:α2δ2HbF:α2γ2

6应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析6/46正常三种血红蛋白珠蛋白肽链组成

α2β2

δ2γ2HbAHbA2HbF(α2β2)(α2δ2)(α2γ2)7应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析7/46地贫类型依据所缺乏珠蛋白肽链进行分类，α链，β链或δ链合成缺乏或迟缓者，分别被称为α地贫，β地贫，或δ地贫。β和δ或β和γ链合成都降低或迟缓者分别称为βδ或βγ地贫。8应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析8/46α地贫轻型：静止型标准型可见HbBart’s（γ4）中间型：血红蛋白H病（β4）重型：血红蛋白Bart’s病9应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析9/46α链结构异常产生血红蛋白血红蛋白ConstantSpring（HbCS)α链羧基端后多出31个氨基酸血红蛋白QS碱基突变非缺失型HbH病血红蛋白Q(74天AA变组AA)

10应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析10/46β地贫轻型：重型：中间型：当控制β链基因发生突变或缺失时，β链降低，多出α链将与δ、γ链形成HbA2和HbF，所以β地贫时HbA2和HbF都有不一样程度增高。11应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析11/46β链结构异常产生血红蛋白HbE（α2β226谷赖）HbS（α2β26谷颉）HbC（α2β26谷赖）12应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析12/46惯用检测地贫及异常血红蛋白病方法血常规是检测地贫及异常血红蛋白病最基本试验之一。血红蛋白电泳是检验地贫与异常血红蛋白病最主要及最惯用试验诊疗方法。高效液相色谱法。地贫基因诊疗。13应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析13/46血常规6个基本参数：RBC，Hb，HCT，MCV，MCH，MCHC。MCV显著降低是地贫首选筛查指标，通常MCV<80fl，MCH<25pg。红细胞形态：小细胞低色素改变为主，异形性显著14应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析14/46

正常红细胞：圆盘状，双面凹陷。15应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析15/46红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。16应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析16/46红细胞形态异常：可见靶形红细胞，泪滴形红细胞，环形红细胞，盔形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。17应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析17/46红细胞形态异常：可见环形红细胞，棘形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。18应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析18/46红细胞形态异常：可见半岛形红细胞，锯齿形红细胞，环形红细胞，红细胞碎片，红细胞大小不等。19应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析19/46红细胞形态异常：可见棘形红细胞，泪滴形红细胞，靶形红细胞，环形红细胞，半岛形红细胞，红细胞大小不等。20应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析20/46中性粒细胞：中幼粒、分叶核细胞。21应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析21/46早幼粒细胞及中性杆状细胞。22应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析22/46血红蛋白分析电泳：血红蛋白电泳是检验地贫与异常血红蛋白病最主要及最惯用试验诊疗方法。

我院检验科血液室自从80年代初即开展以醋酸纤维素为介质血红蛋白电泳试验诊疗地贫与异常血红蛋白病。23应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析23/46血红蛋白电泳仪于1998年购入一台美国海伦娜企业REP全自动凝胶电泳仪取代手工电泳进行地贫与异常血红蛋白检测，使电泳结果愈加准确，很好地支持了临床医生对此二种疾病诊疗。

24应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析24/46血红蛋白电泳仪不过电泳价值受到一定限制，因为有一些异常血红蛋白电荷改变极微或没有改变，在电泳时它们不能被查出，会造成临床上漏诊，同时因为电泳对各种血红蛋白成份定量不够标准化，经常会给结果判断造成困难25应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析25/46地贫基因诊疗

α地贫基因诊疗试剂盒可同时检测中国人中常见三种缺失型α地贫，即东南亚缺失型（－－SEA），左侧缺失型（－α4.2），右侧缺失型（－α3.7）。而且还可检出临床上无症状静止型α地贫。26应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析26/46地贫基因诊疗β地贫基因诊疗试剂盒可对17个常见β珠蛋白基因突变位点行检测，结果易于判定。27应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析27/46地贫基因诊疗但地贫基因分析不能检测异常血红蛋白病，对临床上异常血红蛋白病有漏诊情况发生，而且价格昂贵，不适于大量大面积筛查。28应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析28/46高效液相色谱法检验科血液室购入一台美国伯乐企业出产VARIANⅡ高效液相色谱仪。高效液相色谱法是国际上公认HbA2与HbF定量标准方法。是一个灵敏、特异性强、重复性高电泳替换方法。

29应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析29/46VARIANTTMⅡ血红蛋白测试仪30应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析30/46高效液相色谱法原理色谱法是一个以物理化学原理为主分离分析方法，色谱法分离率高，能够把理化性质相差不大混合物经过简单分离技术，使微小差异各组成份经过几百次甚至几千次重复累积为大差异而到达分离。在分离同时，依据出峰位置能够定性，依据峰面积能够定量。灵敏度高，选择性高，尤其适合用于生物大分子如各种血红蛋白组分分离。31应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析31/46HPLC在医院临床中应用治疗药品监测和药代动力学临床诊疗：血红蛋白分析32应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析32/46高效液相色谱法血红蛋白分析操作静脉血2ml，EDTA-K2抗凝经定标、质控，标本直接上机，经过电脑操作，便能实现Hb析出、检测、定量过程。33应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析33/46高效液相色谱法优点快速高效：6min自动化程度高：直接上机，无需前处理。方便、节约：可单份样本，亦可大批量高稳定性和高精密度：批内与批间变异系数小准确率高检测结果易于判断：数据和图形34应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析34/46检测结果可对血红蛋白组分中HbA2、HbF准确定量，对β地贫作出比电泳更为准确诊疗。同时还可检测到HbBart′s以及HbH，提醒患儿有α地贫。色谱仪可对地贫基因分析无法查出各种异常血红蛋白病作出诊疗。35应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析35/46正常样本36应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析36/46ß-地中海贫血（轻型）37应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析37/46缺失型HbH病(HbH出峰时间0.47分钟，峰值13.5%。HbF出峰时间1.08分钟，峰值0.3%。HbA出峰时间2.54分钟，峰值81.9%。HbA2出峰时间3.60分钟，峰值1.8%。)38应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析38/46HbCS复合HbH病

(HbH出峰时间0.47分钟，峰值13.5%。HbF出峰时间1.12分钟，峰值1.4%。HbA出峰时间2.48分钟，峰值82.1%.HbA2出峰时间3.61分钟，峰值0.9%。HbCS出峰时间5.03分钟，峰值0.9%。)

39应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析39/4640应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析40/46HbS峰，镰形红细胞贫血病

41应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析41/46血红蛋白E峰,HbE病42应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析42/46血红蛋白C病43应用高效液相色谱法进行血红蛋白分析43/46总结全球约1.5亿人携带地贫基因，已发觉