正相色谱柱的使用

正相色谱柱的使用第一页，共十七页，2022年，8月28日样品溶于有机溶剂溶于水溶于四氢呋喃非离子化离子化溶于有机溶剂溶于水溶于正己烷溶于甲醇或甲醇/水或乙腈或乙腈/水用硅胶的正相模式用键合相的正相模式用键合相的反相模式用键合相的反相模式低分子凝胶渗透色谱用键合相的反相模式抑制电离反相键合相色谱离子对键合相的反相模式用硅胶的正相模式离子交换模式凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱大孔填料的离子交换模式用大孔填料的反相模式分子量>2000分子量<2000分离模式的选择第二页，共十七页，2022年，8月28日正相色谱20%反相色谱80%正相吸附色谱

极性:固定相>流动相 固定相-极性 流动相(己烷,庚烷)-非极性 极性物质后出峰正相色谱第三页，共十七页，2022年，8月28日正相色谱柱的特点正相色谱比反相色谱柱压低使用的溶剂容易旋蒸除去吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有机化合物在B型球形硅胶,Diol和PEG正相液相色谱柱上的峰形。第四页，共十七页，2022年，8月28日色谱柱的分类按固定相作用性质分类高效反相液相色谱柱高效正相液相色谱柱

高效亲水液相色谱柱

高效离子交换液相色谱柱

InnovationTM高效多功能液相色谱柱

高效手性液相色谱柱

高效GPC凝胶液相色谱柱高效Hilic液相色谱柱

第五页，共十七页，2022年，8月28日色谱柱的分类按基质材料分类

硅胶基质柱聚合物柱ZrO2柱等第六页，共十七页，2022年，8月28日按柱子尺寸分类

毛细管柱

微柱

窄径柱

常规柱

制备柱

半制备柱

色谱柱的分类第七页，共十七页，2022年，8月28日正相液相色谱柱1、氨基柱2、硅胶柱4、Diol柱3、氰基柱正反相使用均可绝不可沾水正反相使用均可第八页，共十七页，2022年，8月28日正相色谱柱的活化活化注意要点：1、保存溶剂：一般正相新柱出厂是用95%的正己烷：5%乙醇或纯异丙醇或正己烷保存；例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，一些厂家就用纯甲醇封柱。2、异丙醇过渡：粘度大高柱压；小流速：0.2mL·min-1；先流路后过柱；约0.5h后换上流动相；若有缓冲盐，则应先用不含盐的同比例的流动相过柱，避免析出。第九页，共十七页，2022年，8月28日氨基柱柱效检测流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷流速：1.0mL·min-1标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯检测波长：254nm

参考(标准JB5226-91)液相色谱仪测试用标准色谱柱此方法同时适用氰基柱、硅胶柱第十页，共十七页，2022年，8月28日氨基柱使用后冲洗正相条件适用后：首先50倍柱体积异丙醇（注意低流速）其次50倍柱体积甲醇最后异丙醇过渡到正相流动相条件柱子长期不用的情况下，冲洗干净后用异丙醇或者正己烷保存。第十一页，共十七页，2022年，8月28日色谱柱再生柱子使用一定时间后：柱效下降、老化，可以用以下方法清洗柱子恢复柱性能方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相第十二页，共十七页，2022年，8月28日色谱柱再生方案2：清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：95％水/5％乙腈

THF四氢呋喃

95％乙腈/5％水再走流动相即可若反相使用后柱效下降再生冲洗方法同上过程，并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗第十三页，共十七页，2022年，8月28日色谱柱再生（除水再生）诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的改变，但是填料可能还是完好的。这是因为正相色谱固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数，大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分，柱子在长期使用后吸附的水分使柱效下降，此时应除水使柱效恢复。除水方案：用含2.5%二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和2.5%冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性第十四页，共十七页，2022年，8月28日氰基柱的使用氰基柱作反相色谱，操作和维护和C18柱完全相同，但是与氨基柱一样，反相使用时-NH2与-CN会水解。尤其pH在1.5-7.0范围以外这种极端酸性或碱性条件下柱寿命会下降很快，使用时应注意。氰基柱用于正相使用时没什么问题，当柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，可按如下清洗方法恢复柱性能。清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：氯仿、异丙醇、二氯甲烷再走流动相即可。第十五页，共十七页，2022年，8月28日附录：色谱柱柱内体积和平衡时间单次样品运行时间=分析时间+色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间=10倍柱内体积÷流速

4.6x50 0.5m5min 4.6x30 0.3mL3min 4.6x15 0.15mL1.5min 4.6x150 1.54mL15min 4.6x250 2.57mL25min 2.1x50 0.10mL5min 60sec 2.1x30 0.06mL3min 36sec 2.1x15 0.03mL1.5min 18sec

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速

(mm) (Vm)1.0mL/min

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积