考点加强课6 随堂真题演练

22随堂·真题演练1.(2012·全国新课标，40)据基因工程的有关知识，回答下列问题。(1)限制性内切酶割

分子后产生的片段，其末端类型有

________和________。(2)质粒运载体用RⅠ切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的除可用Ⅰ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是___________________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA接酶。(4)反转录作用的模板是，产物是若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外，_________可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_。解析

此题考查基因工程应用的相关知识。(1)DNA分子经限制酶切割产生的段末端通常有黏性末端和平末端两种类型。(2)使运载体与目的基因相连使二者被切割后产生的末端相同用另一种限制酶切割产生的末端必须与EcoⅠ切割产生的末端相同根据酶的来源不同接酶分为Ecoli连接酶和T连接酶。(4)RNA为模板，合成的过程称为逆转4录，若要体外获得大量DNA分子，可以使用技术。在基因工程中，通常利用质粒作为运载体，另外噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。(6)肠杆菌作为受体细胞时用之成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。答案黏性末端

平末端

切割产生的DNA段末端与Eco切割产生的相同(他合理答案也行)(3)大杆菌(Ecoli)T4

(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)(5)噬菌体

动植物病毒(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力弱

2.(2015·江苏卷，32)胰岛素A、分别表达法是生产胰岛素的方法之一。1是该方法所用的基因表达载体表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示β半乳糖苷酶与胰岛素A、链融合的蛋白)。请回答下列问题：(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是_。(2)图中启动子是_______酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是____________________________________。(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有___________________。(4)β半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于_。(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为_______________________________________________________________________(6)根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是________，理由是______________________________________解析

基因表达载体包含启动子、终止子、目的基因和标记基因等。启动子是RNA聚合酶的识别和结合位点。氨苄青霉素抗性基因可作为标记基因。基因工程使用的工具酶包括限制酶和DNA连接酶素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏起来无法被蛋白酶所识别止被水解化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，若经溴化氰处理相应融合蛋白能获得完整的A和B链，表明胰岛素A链B链并无溴化氰作用位点，不能将其切断；同理β－半乳糖苷酶

能被切成“多个肽段”，表明其具有多个切(“甲硫氨酸”)胰岛素分子含有两条链，至少有个游离氨基分别位于2肽链的一端，并且R基团中可能也含有游离的氨基。答案终止子聚合

作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来(3)限制酶和DNA接酶(4)防止胰岛素的A、链被菌体内蛋白酶降解(5)－半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、链中不含甲硫氨酸(6)至少2个

两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸基团中可能还含有游离的氨基3.(2014·天津理综节选嗜热土壤芽孢杆菌产生的β葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：Ⅰ.用大肠杆菌表达酶(1)PCR增bgl基因时，选用_因组作模板(2)如图为质粒限制酶酶切图谱。B基因不含图中限制酶识别序列。为使扩增的B基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入_和________不同限制酶的识别序列。注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同。(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为__________________________________________________________________________________________________________________解析

bglB基因存在于嗜热土壤芽孢杆菌基因组中，故应以该菌的基因组模板进行基因扩增。目的基因与质粒进行重组时，需将目的基因插入到启动子和终止子之间，结合示意图可知，应在扩增的bglB基因两端分别引