加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定

加味香连丸的定性鉴别及黄连生物碱的含量测定第1页/共28页一、仪器与药品1）层析缸2）三用紫外分析仪3）喷雾瓶

4）吹风机5）紫外分光光度计6）小层析柱：高13cm,内径8mm，2个

7）中性Al2O3(150—200目)8）滴管9）加味香连丸样品

10）盐酸小檗碱对照品、黄连、木香对照药材11）95%乙醇第2页/共28页1、定量用样品的净化1）定容：将索氏提取样品定容到25mL。2）净化A、装柱：取2个高13cm、内径8mm的Al2O3柱，平行装柱。分别垫上少许棉花，装入中性氧化铝，高度1.5cm左右。1个作空白，另1个加入样品。B、加样与洗脱：将两根小柱下分别接上10mL容量瓶，样品用小柱中精密加入样品液0.5mL，待样品完全被填料吸收后，加入95%EtOH至洗脱完全。空白用小柱中的填料直接用95%乙醇平行洗脱。接近10mL时停止洗脱，分别定容到10mL。C、含量测定：采用外标一点法于350nm测定含量供试品紫外测定：空白采用自制空白对照品紫外测定：空白采用95%乙醇，对照品浓度：0.06mg/mLD、计算（100g干品中含有多少克总生物碱）二、实验步骤A供/A标

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C供/C标约0.1g25mL0.5mL10mL含量(%)=C供×Dm×

100%第3页/共28页1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别1）黄连的鉴别取本品60mg，研细，加乙醇5ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液补加乙醇使成5ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.04mg的溶液。用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8：2：2：1：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。二、实验步骤

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O×××小檗碱样品黄连对照药材例1.5cm圆形点样饱和10min第4页/共28页1、加味香连丸中黄连和木香的薄层鉴别2）木香的鉴别取本品0.5g，研细，加乙醚5ml，放置2小时，时时振摇，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.2g，加乙醚5ml，同法制成对照药材溶液，用点样用毛细管分别取1.5cm左右，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：丙酮（10：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。二、实验步骤

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×加味香连丸针对木香提取液木香对照药材例第5页/共28页光度计模式操作教程开机自检通过后，经过15分钟的预热，系统自动进入主菜单。第6页/共28页波长：546.0nm09：21：19取消下翻选取D2W系统主菜单①光度计模式②定量测量③光谱扫描④动力学测量⑤DNA/蛋白质测量MAPADA测试波长当前时间氘灯点亮显示钨灯点亮显示第7页/共28页波长：546.0nm09:21:19取消下翻选取D2W系统主菜单①光度计模式②定量测量③光谱扫描④动力学测量⑤DNA/蛋白质测量MAPADA点击“选取”功能键，或点，进入光度计模式。ENTER第8页/共28页波长：546.0nmI:1966909:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0.000Abs首先选择测量所需要的波长。点进入。GOTOλ第9页/共28页波长：546.0nmI:1966909:21:19D2W0.000Abs

请输入波长：546.0_使用数字键和小数点输入所需要的波长。第10页/共28页波长：546.0nmI:1966909：21：19D2W0.000Abs请输入波长：350.0_输入完毕后，点击进行确认。ENTER输入的测量波长第11页/共28页波长：350.0nmI：1966909:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0.000Abs波长将自动调节到所设置的波长，系统将自动校零。波长已调整第12页/共28页波长：350.0nmI:1966909:21:19设置单位模式因子标样测量D2W样品浓度单位设定键0.000Abs使用四个方向键来选择设置单位模式，选择完毕后，点确认。ENTER第13页/共28页波长：350.0nmI：1966909：21：19D2W0.000mg/L

请输入含量单位：mg/L使用四个方向键来选择浓度单位，选择完毕后，点确认。ENTER第14页/共28页波长：450.0nmI:1966909:21:19设置单位模式因子标样测量D2W0.000Abs设定测量模式：吸光度模式、透过率模式、浓度模式。点击“模式”功能键进入。“模式”功能键第15页/共28页吸光度模式：显示样品的吸光度；透过率模式：显示样品的透过率；含量模式：根据系数法C=KA，直接显示试样浓度。波长：350.0nmI:1966909:21:19D2W0.000Abs请输入模式：吸光度使用四个方向键来选择测量模式，选择完毕后，点确认。ENTER第16页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0.000mg/L模式已变为浓度模式第17页/共28页浓度测定的原理是公式C=KA。C——浓度A——吸光度K——吸收系数K值设定有两种方法：一是选择“因子”功能键直接输入K值；二是选择“标样测量”，测定吸光度，输入浓度，求出K值第18页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0.000mg/L选择“因子”模式，直接输入K值。吸收系数设定键第19页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19D2W0.000mg/L

请输入F因子：1.000_使用数字键和小数点输入所需要的K值。K值来源：以前实验所做、查询相关文献。第20页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19D2W0.000mg/L

请输入F因子：3.000_输入完毕后，点击进行确认。ENTER输入的吸收系数K第21页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0.000mg/LF因子3.000设定的吸收系数K第22页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19设置单位模式因子标样测量D2W0.000mg/LF因子3.000测量浓度已知样品的浓度，输入浓度，由机器自动求出K值。选择“标样测量”功能键。进入浓度法求K值第23页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19D2W0.000mg/L

请输入标样含量：1.000_将标样放入光路中，使用数字键和小数点输入标样的浓度。第24页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19D2W0.000mg/L

请输入标样含量：4.000_输入完毕后，点击进行确认。ENTER输入的标样浓度第25页/共28页波长：450.0nmI：1966909：21：19设置单位模式因子标样测量D2W4.0