临床血液学检验：实验10 PT APTT 血小板功能

实验十血小板功能检测（示教）PTAPTT目的要求掌握PT、APTT测定的原理、方法、注意事项、临床意义掌握试管法熟悉血凝仪法熟悉血小板聚集仪血小板功能检验血小板黏附试验血小板聚集试验全血的PLT不能小于50×109/L血小板黏附试验原理在体内血小板具有粘附于被暴露的胶原组织和相互之间粘附的机能，在体外血小板可粘附于带负电荷的非生理性表面（如金属、玻璃）的机能，同时也反应血小板的聚集功能。血小板黏附试验一定量的血液一定时间之后，一定量的血小板粘附在容器内表面利用粘附前后的血小板之差，计算粘附率0.7ml，粘附15min用硅化试管采集1：9枸橼酸钠抗凝血7.2ml用硅化移液管吸取0.8ml混匀的抗凝血至小粘附瓶内将粘附瓶内的抗凝血用血球计数仪计数粘附前血小板数目将粘附瓶塞入粘附仪器内的橡皮塞，并做平衡打开粘附仪电源，按START键,仪器进入旋转粘附测试完毕，取出粘附瓶,再同前计数粘附后的血小板数目计算粘附率,记录结果操作步骤注意事项采血过程必须顺利，避免产生气泡，溶血和凝块器材必须标准化，使用的试管，滴管必须硅化处理，或用塑料制品。检测前1周，禁止服用阿司匹林类可以影响血小板的药物血小板的计数要准确，宜作2-3次取平均值。参考范围53.9%-71.1%临床意义：粘附率增高：见于高凝状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，动脉硬化，口服避孕药等。粘附率减低：见于vWD、巨大血小板综合征，血小板无力症，肝硬化等。血小板聚集试验原理：在体内，血管壁受损后血小板立即粘附于受损血管壁创面处，继而发生聚集反应形成白色血栓。在体外，将血小板聚集诱导剂加入富含血小板的血浆中通过血小板聚集仪观察血小板聚集反应，称血小板聚集功能试验。PRP（plateletrichplasm)800-1000rpm,10minPPP（plateletpoorplasm)3000rpm,15min

以PPP调零，在PRP中加入血小板聚集诱导剂后，用一涂硅小磁棒粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，透光度增加，通过记录仪描绘出血小板聚集的曲线，分析血小板的聚集能力。开启血小板凝聚仪，将诱聚剂放入仪器预热槽内进行温浴用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反应杯中，并加入磁棒用普通移液管准确吸0.3mlPPP加入聚集反应杯中，不加入磁棒将PPP管放入反应通道内，选择血小板聚集试验，按ENTER进行调零,调零结束后取出PPP管将PRP放入刚才的反应通道内，按ENTER，仪器读取PRP的浊度当屏幕显示ADP时，准确加入30ul诱聚剂，同时按ENTER,仪器进行血小板聚集的测试测试结束，屏幕将显示最大聚集率%操作步骤注意事项⑴采血时应一针见血，并避免产生气泡和溶血。止血带不得扎时间过长⑵采血当天应禁食牛奶、豆浆类脂肪性食物。⑶实验在采血后3小时内完成。⑷采血前1周内不应服用抑制血小板聚集的药物：如阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等⑸所用器具均必须硅化处理⑹PRP调至血小板数目为220×109/L，PPP调至血小板数目为20×109/L以下参考范围ADP--------62.7±16.1 Adr--------67.8±17.8胶原--------71.7±19.3瑞斯托酶素-----87.5±11.4临床意义增高：反映血小板聚集功能增强，见于血栓前状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，糖尿病，脑血管病变减低：反应血小板聚集功能减低，见于血小板无力症，巨大血小板综合征，尿毒症，肝硬化，低（无）纤维蛋白原症等PTAPTTTTFIB凝血四项ⅫaⅪaⅨaⅧ,PF3,Ca2+ⅢⅦaCa2+ⅩaⅤ,PF3,Ca2+凝血酶原(Ⅱ)凝血酶(Ⅱa)纤维蛋白原(Ⅰ)纤维蛋白(Ⅰa)APTT凝血活酶生成期PT

组织因子(兔脑、胎盘、肺组织浸液)Ca2+

血浆[参考值]QUIK法：11-13s

血浆凝血酶原时间

（Prothrombintime,PT）【原理】PrincipleofPT

inBlood

inPlasmaPTReagentFibrinIIIExtrinsicSystemMeasureClottingTimewithoutTissueFactorCalcium(Ca2+)withoutwithoutNormalRange10-14secIX37度Ca2+,PLCa2+,PLXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIVIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIVIIIIIXVIIIBloodSamplingTrisodiumCitrate操作1.枸橼酸钠1:9抗凝血2ml2.3000转/分离心15分钟3.PT试剂取出进行37℃温浴4.将血浆100ul加入试管内温浴1分钟5.加入200ul已温浴的PT试剂，同时启动秒表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间6.重复2次取均值报告[意义]外源性凝血系统的筛选试验比正常参考值延长或缩短3秒以上有临床意义。（1）延长：

1．因子II、V、VII、X单独或联合缺乏

2．严重纤维蛋白原降低（尤其<1g/L时）

3．Vitk缺乏症、严重肝病

4．纤溶亢进（如DIC后期）

5．循环中抗凝物质增加，如SLE

（2）缩短：

高凝状态（hypercoagulationstate）血栓性疾病口服避孕药

（3）口服抗凝剂的首选监测指标：

INR2-3PT的报告方式时间（S）PT比值（PTR）=国际标准化比值（INR）=PTRISI待测血浆PT正常血浆PTInternationalNormalizedRatioInternationalSensitivityIndex注意事项⑴抗凝比例要准确，血量±不得超过0.2ml⑵离心速度及时间必须到位，以除去血小板的干扰⑶采血后2小时内完成⑷标本不得有溶血(5)手工操作时，凝血酶原时间的终点计算以出现混浊的初期凝固为准。(6)测定温度36.5~38.5℃，过低或过高均使PT延长。(7)如遇标本结果异常应密切联系临床[原理]

XII因子活化剂

Ca2+、磷脂（替代PF3）血浆

[参考值]

（37±3.3）秒

>正常对照10s以上者延长

<正常对照5s以上者缩短活化部分凝血活酶时间（activatedpartialthromboplastin

time,APTT）PrincipleofAPTT

inBlood

inPlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIAPTTReagentActivatorPLIntrinsicSystemMeasureClottingTimeEllagicacid,silicaetc.Calcium(Ca2+)NormalRange20-40secCaCl2IVPhospholipidFibrin37度XIIIXXIVIIIXVIIICa2+,PLCa2+,PLBloodSamplingTrisodiumCitrate操作1.枸橼酸钠1:9抗凝血2ml

2.3000转/分离心15分钟3.氯化钙试剂取出进行37℃温浴，APTT试剂常温放置4.将血浆100ul加入试管内温浴1分钟5.加入100ulAPTT试剂，同时启动秒表，激活3分钟6.加入100ul氯化钙（20mmol/L），同时启动秒表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间，重复2次取均值（1）延长：

1.主要检测内源性途径的凝血因子缺陷（如Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ/血友病甲、乙）

2.其次检测第二、三阶段因子，如凝血酶原、纤维蛋白原

3.严重肝病、DIC.4.循环中抗凝物质增多

[意义]

（2）缩短：高凝状态(hypercoagulationstate)（脑血栓、心梗、DIC高凝期）（3）普通肝素应用的首选监测指标

1.5-3.0倍注意事项不同的部分凝血活酶、不同的活化剂和不同的激活时间，对各种因子缺陷、对肝素和狼疮抗凝物质的敏感性差异很大，应根据不同的检测目的选择相应敏感的凝血活酶或活化剂。通