土壤中分解尿素细菌分离与计数1新人教版选修

土壤中分解尿素细菌分离与计数1新人教版选修第1页/共18页生物技术实践普通高中课程标准实验教科书生物选修1三组制作路路大波主持第2页/共18页专题2微生物的培养与应用第3页/共18页课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数第4页/共18页课题背景

尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氮之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。尿素最初是从人的尿液中发现的。

1828年，德国化学家维勒成功地通过无机物的化学反映合成了尿素，揭开了历史上人工合成有机物的新篇章。第5页/共18页尿素第6页/共18页研究思路

筛选菌株

PCR的自动化需要耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。科学家从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶。为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来呢？因为热泉70--80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐高温的Taq细菌脱颖而出。第7页/共18页实验室微生物的筛选原理

应用筛选Taq细菌的原理，人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。第8页/共18页统计菌落数目

常用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目。样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为保证结果准确，一般选择菌落数30—300的平板计数。第9页/共18页培养基上的菌落第10页/共18页设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。第11页/共18页实验设计结合课本上给出的资料与实验流程示意图，思考有关问题，然后进行实验设计，并且些出详细的实验方案。资料一土壤取样资料二样品的稀释资料三微生物的培养与观察第12页/共18页操作提示无菌操作

1.取土样的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。

2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入烧瓶中，塞好棉塞。

3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。第13页/共18页做好标记本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好在使用前就做好标记。例如：在标记培养皿时，应注明培养基种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度。

第14页/共18页规划时间对于耗时较长的生物实验，我们需要实现规划时间，以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊。第15页/共18页结果分析与评价结合对照，分析培养物总共是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落？是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30—300的平板。在这一稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相接近？你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？第16页/共18页课题延伸本课题对能分解尿素的细菌进行了初步的筛选，这只是纯化菌种的第一步。对分离菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。我们可以通过检测培养基pH的变化来判断细菌