基因工程的补充

基因工程的补充第1页/共15页补充第2页/共15页载体DNA用BamHⅠ切割同一限制酶切位点连接

GGATCCCCTAGGBamHⅠ切割反应+目的基因用BamHⅠ切割载体DNA用BamHⅠ切割GCCTAGGATCC

G载体DNA用BamHⅠ切割目的基因用BamHⅠ切割T4DNA连接酶15ºC重组体载体自连目的基因自连第3页/共15页议一议2、能否用SARS病毒作为基因载体？3、作为载体，若没有切割位点将怎样？4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞，如何鉴定？5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制，将怎样？1、从化学本质来看，载体应该是什么？双链DNA不能不能进行DNA的重组载体上应有标记基因可能造成基因丢失第4页/共15页

“λ噬菌体的衍生物”的解释由于野生型λ噬菌体DNA对大多数目前在分子克隆中常用的限制酶有多个切点，而且有些位点恰巧定位于与噬菌体生长繁殖关系密切的必需基因之中，这些位点的剪切重组必然严重影响噬菌体的繁殖。因此野生型λDNA不能直接用作载体而需经过改造才能成为有价值的克隆载体。天然λ噬菌体载体改造的关键是去除或改变其基因组必需区段内多余的限制酶切位点。改造方法包括点突变、基因组的置换和缺失。由天然λ噬菌体改建获得的就是λ噬菌体的衍生物。第5页/共15页p7思考与讨论：1。提示：不能。因为一般基因有上千个碱基对2.提示：可能是剪切位点或连接位点选得不对（也可能是其他原因）第6页/共15页补：原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。

转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。

转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。第7页/共15页①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子第8页/共15页补：真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子

外显子

能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：第9页/共15页真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA

聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游第10页/共15页2.基因文库的构建方法供体细胞中的DNA许多DNA片段运载体限制酶与载体连接载入受体细胞产生特定性状导入外源DNA扩增目的基因分离(一)从基因文库中获取目的基因一、目的基因的获取基因工程的基本操作程序①鸟枪法(直接分离法)第11页/共15页

以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA反转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)2.基因文库的构建方法(一)从基因文库中获取目的基因一、目的基因的获取基因工程的基本操作程序②反转录法第12页/共15页③根据已知的氨基酸序列合成DNA法

根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成(一)从基因文库中获取目的基因一、目的基因的获取基因工程的基本操作程序第13页/共15页上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？优点缺点鸟枪法反转录法根据已知氨基酸合成DNA法操作简便广泛使用工作量