药物的杂质检查专家讲座

第二章生物药品杂质检验药物的杂质检查专家讲座第1页药品纯度要求

指药品纯净程度，反应了药品质量优劣，含有杂质是影响药品纯度主要原因。

药物的杂质检查专家讲座第2页杂质是指：1.有毒副作用物质2.本身无毒副作用，但影响药品稳定性和疗效物质3.本身无毒副作用，也不影响药品稳定性和疗效，但影响药品科学管理物质药物的杂质检查专家讲座第3页一、杂质起源与种类

（一）杂质起源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物

（2）试剂、溶剂、催化剂类

（3）生产中所用金属器皿、装置以及其它不耐酸、碱金属工具所带来杂质药物的杂质检查专家讲座第4页例：阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得++乙酰化不完全水杨酸(杂质)药物的杂质检查专家讲座第5页制剂过程中可能产生新物质如：

制备过程中加热灭菌盐酸普鲁卡因注射剂

深入脱羧转化对氨基苯甲酸苯胺引发毒性反应药物的杂质检查专家讲座第6页1．在药品生产过程中引入杂质路径为

A.原料不纯或部分未反应完全原料造成B.合成过程中产生中间体或副产物分离不净造成C.需加入各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.因为操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入杂质药物的杂质检查专家讲座第7页2.贮藏过程中产生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等

药物的杂质检查专家讲座第8页易发生水解反应结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等药物的杂质检查专家讲座第9页（二）杂质种类

药品中杂质按起源分为

1.普通杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。普通杂质其检验方法收载在中国药典附录中。

药物的杂质检查专家讲座第10页2.特殊杂质：指某一个或某一类药品生产或贮藏过程中引入杂质，如阿司匹林中游离水杨酸、异烟肼中游离肼、甾体激素中其它甾体。特殊杂质检验方法收载在中国药典正文各药品质量标准中。药物的杂质检查专家讲座第11页（三）药品纯度与化学试剂纯度

药品纯度考虑杂质生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。药物的杂质检查专家讲座第12页例.临床所用药品纯度与化学品及试剂纯度主要区分是A.所含杂质生理效应不一样B.所含有效成份量不一样C.所含杂质绝对量不一样D.化学性质及化学反应速度不一样E.所含有效成份生理效应不一样药物的杂质检查专家讲座第13页二、杂质限量检验指药品中允许杂质存在最大量，通惯用百分之几或百万分之几来表示。砷-----10ppm重金属-----50ppm药物的杂质检查专家讲座第14页杂质量≤杂质限量＜杂质量药品合格药品不合格药物的杂质检查专家讲座第15页

（一）药品杂质检验法

1.对照法限量检验法（LimitTest）

特点：不需知道杂质准确含量灵敏度法对照法比较法药物的杂质检查专家讲座第16页操作:平行试验比较两比色管颜色或浊度,判断杂质限量是否符合要求.管2（对照管）管1（样品管）

取程度量待检杂质对照品配成对照溶液,与一定量供试品配成供试品溶液在相同条件下处理,比较反应结果,判断供试液中所含杂质程度是否符合要求.标准对照法药物的杂质检查专家讲座第17页2.灵敏度法

系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。

特点：不需对照品

药物的杂质检查专家讲座第18页3.比较法与空白比较：含量测定法：测定杂质绝对含量，如测定吸收度、pH值等。

特点：不需对照品

药物的杂质检查专家讲座第19页药物的杂质检查专家讲座第20页（二）杂质限量计算药物的杂质检查专家讲座第21页药物的杂质检查专家讲座第22页1．检验某药品中砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1gAs）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001％，应取供试品量为A.0.20gB.2.0gC．0.020gD.1.0gE.0.10g药物的杂质检查专家讲座第23页已知：c＝1g/ml＝1×106g/mlV＝2mlL＝0.0001%药物的杂质检查专家讲座第24页2．检验维生素C中重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸收标准铅溶液（每1ml＝0.01mgPb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC．2mlD.1mlE.20ml药物的杂质检查专家讲座第25页药物的杂质检查专家讲座第26页药物的杂质检查专家讲座第27页药物的杂质检查专家讲座第28页药物的杂质检查专家讲座第29页药物的杂质检查专家讲座第30页第三节杂质检验原理药物的杂质检查专家讲座第31页检验方法：一、利用药品和杂质在物理性质上差异二、利用药品和杂质在化学性质上差异药物的杂质检查专家讲座第32页一、利用药品和杂质在物理性质上差异

（一）臭味及挥发性差异（二）颜色差异（三）溶解行为差异（四）旋光性质差异（五）对光吸收性质差异（六）吸附或分配性质差异药物的杂质检查专家讲座第33页（一）臭味及挥发性差异

药品（尤其是挥发性药品）中如存在含有特殊气味杂质，能够由气味判断该杂质存在。

乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、浓过氧化氢如麻醉乙醚异臭检验，控制原料乙醇中引入杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方法为：取供试品10ml，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完成后，不得有异臭。药物的杂质检查专家讲座第34页（二）颜色差异

一些药品本身无色，但从生产中引入了有色相关物质，或其分解产物有颜色。(维生素C）（三）溶解行为差异

有药品可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药品不溶。葡萄糖（中间产物-糊精）溶于热乙醇，糊精不溶药物的杂质检查专家讲座第35页（四）旋光性质差异

测定旋光度能够用来区分不一样药品，检验杂质含量。利用是供试品与其特殊杂质在比旋度上差异。

举例：维生素C溶液（0.10g/ml)+20.5°_+21.5°本身没有旋光性药品，杂质有，则能够经过限定药品溶液旋光度值来控制对应杂质量药物的杂质检查专家讲座第36页

旋光度α：光学活性物质液体或溶液使平面偏振光振动面旋转角度。以“+”表示右旋；以“-”表示左旋。

比旋度[α]tλ:偏振光透过长1dm且1ml中含有1g旋光物质溶液，在一定波长与温度下测得旋光度。α=[α]tλcl/100中国药典要求使用钠光谱D线（589.3nm）测定药品在特定溶液中旋光度。药物的杂质检查专家讲座第37页（五）对光吸收性质差异

药品和杂质结构不一样，因而对光吸收性质往往有差异。分光光度法优点：灵敏度高，简便，仪器已较普及，所以在药品杂质检验中应用日益广泛。

1.紫外分光光度法

2.原子吸收分光光度法

3.红外分光光度法4.荧光分析法药物的杂质检查专家讲座第38页1.紫外分光光度法

当杂质在某一波优点有最大吸收，而药品在此无吸收时，能够经过控制供试品溶液在此波优点吸收度来控制杂质量。举例：要求葡萄糖注射液在284nm波优点吸收度不得过0.32，即可控制其杂质5-羟甲基糠醛量。头孢噻吩在237nm处要求吸收度范围0.65-0.72，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。

药物的杂质检查专家讲座第39页.例:肾上腺素中肾上腺酮检验药物的杂质检查专家讲座第40页若药品在紫外区有显著吸收，而杂质吸收很弱或没有吸收，能够依据吸收度大小限制杂质量。要求供试品吸收度上下限幅度，可在一定程度上控制产品纯度。头孢噻吩在237nm处要求吸收范围0.65-0.72，237nm吸收特征是噻吩乙酰基产生，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。药物的杂质检查专家讲座第41页3.红外分光光度法

在杂质检验中主要用于药品中无效或低效晶型检验。甲硝咪唑C晶型在662cm-1处有较强吸收，其无效A晶型在640cm-1处有较强吸收。当供试品中含有A晶型时，在上述二波数处吸收度比值将发生改变。药物的杂质检查专家讲座第42页R’=D1’/D2’R=D1/D2<药物的杂质检查专家讲座第43页（六）吸附或分配性质差异

1.薄层色谱法2.纸色谱法3.高效液相色谱法4.气相色谱法简便、快速，灵敏度高药物的杂质检查专家讲座第44页1、薄层相色谱法（TLC)设备简单，操作简便，分离速度快，灵敏度和分辩率较高．１）杂质对照品法２）本身对照法３）杂质对照品法与本身对照法联用４）对照药品法

5）灵敏度法（不允许有杂质斑点）药物的杂质检查专家讲座第45页（1）杂质对照品法

适合用于已知杂质并能制备杂质对照品情况。要求供试品与所检杂质对显色剂所显颜色应相同，显色灵敏度也应相同或相近。方法：依据限量，取供试品溶液和程度量杂质对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，展开、定位、检验，供试品中所含杂质斑点，不得超出对应杂质对照斑点。药物的杂质检查专家讲座第46页药物的杂质检查专家讲座第47页（2）供试品本身对照法

适合用于杂质结构不能确定，或无杂质对照品情况。方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开、定位、检验。供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色。药物的杂质检查专家讲座第48页药物的杂质检查专家讲座第49页药物的杂质检查专家讲座第50页（4）对照药品法

当无适合杂质对照品，尤其是供试品显示杂质斑点颜色与主成份斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同药品作为对照品，此对照物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。药物的杂质检查专家讲座第51页药物的杂质检查专家讲座第52页另外，少数药品还利用试验条件下显色剂对杂质检测限来控制其限量。盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫酸显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得显其它斑点。药物的杂质检查专家讲座第53页药物的杂质检查专家讲座第54页2.纸色谱法

用于极性较大物质分离、分析。有时也用于检验放射性药品注射液中放射化学杂质。方法：类似于薄层色谱法中供试品本身对照法。药物的杂质检查专家讲座第55页3、高效液相色谱法分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，可准确测量各组分峰面积．１）内标法２）外标法３）不加校正因子主成份本身对照法４）加校正因子主成份本身对照法５）峰面积归一化法药物的杂质检查专家讲座第56页1.内标法：内标法测定供试品中某个杂质或主成份含量。先以杂质对照品测定其校正因子，然后测定供试品中杂质含量。药物的杂质检查专家讲座第57页药物的杂质检查专家讲座第58页药物的杂质检查专家讲座第59页2.外标法：测定供试品中某个杂质或主成份含量，用于有杂质对照品或杂质对照品易制备情况。药物的杂质检查专家讲座第60页药物的杂质检查专家讲座第61页3.不加校正因子主成份本身对照法将供试溶液稀释成一定浓度，作为对照液。分别取供试品溶液和对照品溶液进样，将供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照液主成份峰面积比较，以控制供试品中杂质量。

特点：1）简单方便，无须对照品。2）适合用于杂质与主成份峰面积相差悬殊时杂质检验3）忽略了各杂质与主成份响应值可能不一样。

药物的杂质检查专家讲座第62页药物的杂质检查专家讲座第63页4.加校正因子主成份本身对照法：精密称取杂质对照品和待测成份对照品各适量，配制测定杂质校正因子溶液，进样，统计色谱图，计算杂质校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文，用于校正杂质实测峰面积，准确计算杂质含量。药物的杂质检查专家讲座第64页药物的杂质检查专家讲座第65页药物的杂质检查专家讲座第66页药物的杂质检查专家讲座第67页5.峰面积归一化法：测量各杂质峰面积和色谱图上除溶剂峰以外各色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积百分率，粗略测量供试品中杂质含量。

特点：1）不需对照品，简便易行。2）统计图谱时间应为主峰保留时间整数倍。3）通常只能粗略考查供试品杂质含量。药物的杂质检查专家讲座第68页药物的杂质检查专家讲座第69页药物的杂质检查专家讲座第70页4、气相色谱法１）峰面积归一化法２）内标法3）外标法药物的杂质检查专家讲座第71页（二）化学法

利用药品和杂质在化学性质上差异（一）酸碱性差异（二）氧化还原性差异（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（四）杂质与一定试剂反应产生颜色（五）杂质与一定试剂反应产生气体（六）药品经有机破坏后检验杂质药物的杂质检查专家讲座第72页二、利用药品和杂质在化学性质上差异

（一）酸碱性差异利用杂质酸、碱性。要求消耗滴定液体积、要求PH值范围、指示剂法（二）氧化还原性差异利用药品与杂质之间氧化还原电位差异进行检验。（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀

药物的杂质检查专家讲座第73页（四）杂质与一定试剂反应产生颜色

依据限量要求，要求：一定反应条件下不得产生某种颜色；供试品在相同条件下展现颜色不得超出杂质对照品对应颜色；供试品在一定条件下吸收度不得过一定值。（五）杂质与一定试剂反应产生气体砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物药物的杂质检查专家讲座第74页（六）药品经有机破坏后检验杂质含环状结构有机药品中磷、硫、卤素及硒等杂质；不溶药品等。药物的杂质检查专家讲座第75页氧瓶燃烧法（Oxygenflaskcombustionmethod）将药品放入充满氧气密闭燃烧瓶中燃烧，使待测元素从有机结合状态转变成无机离子，被事先装在瓶内吸收液吸收，成为稳定溶液状态，然后采取适当方法进行测定用于含卤素、硫、氮、硒等元素有机药品判别、检验和含量测定药物的杂质检查专家讲座第76页仪器装置铂金丝硬质玻璃燃烧瓶样品药物的杂质检查专家讲座第77页操作方法：称样——将样品直接置无灰滤纸上称量。吸收液水-NaOH（含碘、氯药品）例盐酸胺碘酮、甲状腺粉、甲状腺片水-NaOH-H2O2（含溴、含硫药品）水（含氟药品）硝酸溶液（含硒药品）燃烧分解操作（通O21～2min，燃烧）药物的杂质检查专家讲座第78页注意防爆，燃烧瓶应洗涤洁净氧气要充分，燃烧应完全测定含氟药品应用石英燃烧瓶药物的杂质检查专家讲座第79页药物的杂质检查专家讲座第80页药物的杂质检查专家讲座第81页药物的杂质检查专家讲座第82页普通杂质检验药物的杂质检查专家讲座第83页第四节、普通杂质检验方法一）、普通杂质检验规则

《药品检验操作标准》要求：1.遵照平行操作标准药物的杂质检查专家讲座第84页（1）仪器配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超出2mm，砷盐检验时导气管长度及孔大小要一致（2）对照品与供试品同时操作药物的杂质检查专家讲座第85页2.正确取样及供试品称量范围1g不超出±2%，＞1g不超出±1%3.正确比色、比浊方法4.检验结果不符合要求或在程度边缘时应对供试管和对照管各复查二份药物的杂质检查专家讲座第86页1、原理：中国药典对氯化物检验是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同条件下生成氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。Cl-AgCl（微量时浑浊）

稀HNO3AgNO3二）、氯化物检验法药物的杂质检查专家讲座第87页对照法

药物的杂质检查专家讲座第88页A、取一定量供试品产生AgCl(浑浊）

依法处理稀HNO3AgNO3同上处理B、取一定量标准NaCI液同上

（标准NaCI

浓度C=0.01mgCI-/ml）

（如A浊度比B小则本项合格）。药物的杂质检查专家讲座第89页供试品稀HNO310mlH2OAgNO31ml标准溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗处放置5min(防止AgCl分解)药物的杂质检查专家讲座第90页（二）检验方法

药典附录除另有要求外，取各药品项下要求量供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml药物的杂质检查专家讲座第91页纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下要求量标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。药物的杂质检查专家讲座第92页于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。药物的杂质检查专家讲座第93页结果观察方法

暗处放置5min(防止AgCl分解)黑色背景上自上而下观察药物的杂质检查专家讲座第94页（三）测定条件

1.标准NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含50～80gCl所显浑浊梯度显著，相当于标准NaCl溶液5～8ml。

2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。

药物的杂质检查专家讲座第95页A、AgCI不溶于HNO3可在HNO3中产生最好乳化浑浊；B、加速AgCI产生；C、预防产生Ag20，Ag3PO4,Ag2CO3因为这些溶于HNO3这么就能够预防CO32-OH-，PO43-干扰。药物的杂质检查专家讲座第96页

3.试剂：硝酸银

5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。

4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。

药物的杂质检查专家讲座第97页

6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。

7.平行操作标准。药物的杂质检查专家讲座第98页（四）干扰及排除

1.若供试品有色，需经处理后方可检验。

（1）内消色法：倍量法，即先去除被测物，再加入标准溶液，使成对照，这么对照液与供试液颜色相同。

（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物检验，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检验。

药物的杂质检查专家讲座第99页A、如：（有色）取两分等量供试品：a、一份做供试液（A管）———依法检验

b、另一份AgCI

滤液（B管加入要求量标准NaCI溶液作为对照管）。

加稀HNO3过滤B、用滤纸过滤时，滤纸中如含有氯化物，可预先用含有硝酸水溶液洗净后使用。

AgNO3药物的杂质检查专家讲座第100页2.当有其它干扰物质存在时，必需在检验前除去（1）碘中氯化物检验

（2）碘化物中氯化物检验（3）溴化物中氯化物检验

药物的杂质检查专家讲座第101页

3.不溶于水有机药品

（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检验。

（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检验。

（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检验。

药物的杂质检查专家讲座第102页

4.有机药品中有机氯杂质检验，详细情况，详细分析。

方法：必须使结状态氯变为游离状态氯。有机破坏方法：药物的杂质检查专家讲座第103页.药品中氯化物杂质检验，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用稀酸是（）A.硫酸B.硝酸C.盐酸D.醋酸E.磷酸

药物的杂质检查专家讲座第104页例1.中国药典（年版）要求，检验氯化物杂质时，普通取用标准氯化钠溶液（10µgCl－/ml）5～8ml原因是（）A.使检验反应完全B.药品中含氯化物量均在此范围C.加速反应D.所产生浊度梯度显著E.防止干扰

药物的杂质检查专家讲座第105页例2.采取硝酸银试液检验氯化物时，加入硝酸使溶液酸化目标是（）A．加速生成氯化银浑浊反应B．消除一些弱酸盐干扰C．消除碳酸盐干扰D．消除磷酸盐干扰E．防止氧化银沉淀生成药物的杂质检查专家讲座第106页例3.当采取比浊法检验氯化物杂质时，若药品本身有颜色而干扰检验话，应该选取处理方法为（）A．内消色法B．外消色法C．比色法D．差示比浊法E．差示可见分光法

药物的杂质检查专家讲座第107页例4.若要进行高锰酸钾中氯化物检验，最正确方法是（）A.加入一定量氯仿提取后测定B.氧瓶燃烧C.倍量法D.加入一定量乙醇E.以上都不对药物的杂质检查专家讲座第108页例5.以下哪些条件为药品中氯化物检验必要条件（）A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分钟D.用硝酸银标准溶液做对照E.在白色背景下观察

药物的杂质检查专家讲座第109页三）、硫酸盐检验法（一）原理

对照法药品中存在微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件生成浑浊比较，浊度不得更大。药物的杂质检查专家讲座第110页（二）测定条件

1.标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.1～0.5mg所显浑浊梯度显著，相当于标准K2SO4溶液1～5ml。

2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。

药物的杂质检查专家讲座第111页

3.试剂：氯化钡

5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。

4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。药物的杂质检查专家讲座第112页

若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。

（三）干扰及排除药物的杂质检查专家讲座第113页例：药品中硫酸盐检验时，所用标准对照液是（）A.标准氯化钡B.标准醋酸铅溶液C.标准硝酸银溶液D.标准硫酸钾溶液E.以上都不对

药物的杂质检查专家讲座第114页三、铁盐检验法1.原理

对照法（一）硫氰酸盐法

ChP（）、USP（24）铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈颜色比较，颜色不得更深。药物的杂质检查专家讲座第115页药物的杂质检查专家讲座第116页药物的杂质检查专家讲座第117页

2.检验方法

药典附录

除另有要求外，取各药品项下要求量供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成

药物的杂质检查专家讲座第118页35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，马上与标准铁溶液一定量制成对照溶液（取各药品项下要求量标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，

药物的杂质检查专家讲座第119页加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。药物的杂质检查专家讲座第120页

3.测定条件

（1）用FeNH4(SO4)2·12H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸预防Fe3+水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10gFe3+/ml，50ml溶液中含10～50gFe3+显色梯度显著，普通取标准铁溶液1.0～5.0ml

药物的杂质检查专家讲座第121页

（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。

（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行。（4）检验Fe2+和Fe3+。药物的杂质检查专家讲座第122页

（5）铁盐检验时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可预防光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+。药物的杂质检查专家讲座第123页（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。

药物的杂质检查专家讲座第124页4.干扰及排除

（1）为了提升灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。

（2）具环状结构有机药品，需经700～800℃炽灼破坏处理后再依法检验。

（3）干扰离子影响（阴离子）。药物的杂质检查专家讲座第125页（二）巯基醋酸法

BP（1998）原理

硫氰醋酸还原Fe3＋为Fe2＋，在氨碱性溶液中深入与Fe2＋作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生颜色进行比较，以限制铁量。药物的杂质检查专家讲座第126页对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵药物的杂质检查专家讲座第127页例1.中国药典（年版）要求铁盐检验方法为（A）A.硫氰酸盐法B.巯基醋酸法C.普鲁士蓝法D邻二氮菲法E.水杨酸显色法药物的杂质检查专家讲座第128页例2.中国药典（年版）要求，硫氰酸铵法检验铁盐时，加入过硫酸按目标是（AB）A.使药品中铁盐都转变为Fe3+B.预防光线使硫氰酸铁还原或分解褪色C.使产生红色产物颜色更深D．预防干扰E．便于观察、比较

药物的杂质检查专家讲座第129页例3.某药品（黄色）欲进行铁盐检验，应采取下面哪种方法（E）A.倍量法B.微孔滤膜过滤法C.调色法D.600～700℃炽灼残渣后测定E.以上都不对

药物的杂质检查专家讲座第130页例4.中国药典收载铁盐检验，主要是检验（D）A.FeB.Fe2+C.Fe3+D.Fe2+和Fe3+E.以上都不对

药物的杂质检查专家讲座第131页四）、重金属检验法以铅为代表中国药典（年版）共收载四法。重金属：在试验条件下能与硫代乙酰胺或者硫化钠作用显色金属杂质。银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、镍、钴、锌等等

药物的杂质检查专家讲座第132页（一）第一法硫代乙酰胺法原理硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所展现颜色比较，颜色不得更深。药物的杂质检查专家讲座第133页对照法

适合用于溶于水、稀酸和乙醇药品。

药物的杂质检查专家讲座第134页

2.测定条件

（1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸预防Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含10～20gPb2+。

药物的杂质检查专家讲座第135页

（2）本法用2mlpH3.5醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为3～3.5。

（3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂。药物的杂质检查专家讲座第136页

（1）供试品如有色，需经处理后方可检验。

A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其它无干扰有色溶液。

B.内消色法

C.改用第四法，微孔滤膜过滤法3.干扰及排除药物的杂质检查专家讲座第137页

（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.5～1.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰。药物的杂质检查专家讲座第138页（二）第二法炽灼残渣法

适合用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱有机药品。

500～600℃炽灼后残渣，经处理后，依一法检验。

1.原理对照法药物的杂质检查专家讲座第139页2.操作方法药物的杂质检查专家讲座第140页含钠及氟有机药品应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）药物的杂质检查专家讲座第141页

（三）第三法硫化钠法

适合用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀药品。如磺胺类、巴比妥类。1.原理对照法

药物的杂质检查专家讲座第142页2.测定条件

（1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠

药物的杂质检查专家讲座第143页（四）第四法微孔滤膜法

适合用于含2～5g重金属杂质及有色供试液检验。依一法检验，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。同第一法使重金属生成硫化物富集于微孔滤膜上(铅斑)提升检验灵敏度.药物的杂质检查专家讲座第144页CABFE滤器下部滤器上盖连接头辅助滤板D滤膜(直径10mm,孔径3.0µm)垫圈(外径10mm,内径6mm)药物的杂质检查专家讲座第145页．重金属检验中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最正确pH值是（）A.1.5B.3.5C．7.5D.9.5E.11.5药物的杂质检查专家讲座第146页．微孔滤膜法是用来检验（）A.氯化物B.砷盐C.重金属D.硫化物E.氰化物药物的杂质检查专家讲座第147页例1.中国药典(年版)重金属检验法中，所使用显色剂是（）A.硫化氢试液B.硫代乙酰胺试液C.硫化钠试液D.氰化钾试液E.硫氰酸铵试液药物的杂质检查专家讲座第148页例2.葡萄糖中进行重金属检验时，适宜条件是（）A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸/50ml酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下观察

药物的杂质检查专家讲座第149页五）、砷盐检验法

（一）古蔡法

ChP（）BP（1998）

金属锌与酸作用产生新生态氢与药品中微量砷盐反应生成具挥发性砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色砷斑,与同条件下一定量标准砷溶液所生成砷斑比较,判断砷盐量.标准砷溶液2ml(1g/ml)1.原理对照法

药物的杂质检查专家讲座第150页遇HgBr2试纸生成黄色～棕色砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成砷斑比较。药物的杂质检查专家讲座第151页反应式以下：黄色棕色药物的杂质检查专家讲座第152页2.操作方法（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备。（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作。药物的杂质检查专家讲座第153页

古蔡氏法检砷器8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HClZn粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体药物的杂质检查专家讲座第154页④加锌粒2g,马上将装妥导气管B密塞与A瓶,置25-40℃水浴中,反应45分钟,取出溴化汞试纸,比较砷斑.①导气管B中装入醋酸铅棉球②再于旋塞C平面上放两片溴化汞试纸③样品、对照品分别置于检砷瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加2.5%碘化钾试液5ml与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10分钟2操作药物的杂质检查专家讲座第155页1)试剂作用a.KI作用——还原剂：As5+→As3+

五价砷生成AsH3反应速度比三价砷速度慢,加入KI使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应,以增大AsH3生成速度.3.讨论药物的杂质检查专家讲座第156页

①还原剂(表现在2方面)Ⅰ.将五价砷还原为三价砷(As5+→As3+)b.酸性SnCl2作用药物的杂质检查专家讲座第157页

进而促进AsH3不停生成稳定络离子Ⅱ.将KI被氧化生成I2再还原为I-药物的杂质检查专家讲座第158页

c.PbAc2棉花作用

——排除硫化物干扰(1mgS2-)

药物的杂质检查专家讲座第159页2)古蔡氏法特点优点：灵敏度高(1gAs)缺点：Sb干扰对含锑药品中砷盐检验不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.白田道夫法药物的杂质检查专家讲座第160页

(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)silverdiethyldithiocarbamate

本法不但用于砷盐限量检验,而且可用作微量砷盐含量测定.药物的杂质检查专家讲座第161页

1.原理第一步：同古蔡氏法生成砷化氢第二步：砷化氢还原Ag-DDC溶液,产生红色胶态银.目视比色法仪器分析510nm药物的杂质检查专家讲座第162页

用有机碱吸收反应产生HDDC有利于反应进行。USP（24）用吡啶，ChP（）用三乙胺。

本法适合用于含Sb量小于500g供试品。药物的杂质检查专家讲座第163页2.Ag-DDC法特点

a灵敏度高0.5gAs/30mlb可仪器测定,还可定量1g10g/40mlcSb干扰小，500g锑不干扰药物的杂质检查专家讲座第164页.在药品杂质检验中，其限量普通不超出百万分之十是（）A.氯化物B.硫酸盐C.醋酸盐D.砷盐E.淀粉

药物的杂质检查专家讲座第165页.在用古蔡法检验砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花目标是（）A.除去I2

B.除去AsH3C.除去H2SD.除去HBrE.除去SbH3药物的杂质检查专家讲座第166页．砷盐检验法中，在检砷装置导气管中塞入醋酸铅棉花作用是（）A.吸收砷化氢B.吸收溴化氢C.吸收硫化氢D.吸收氯化氢E.吸收锑化氢

药物的杂质检查专家讲座第167页.古蔡氏法中，SnC12作用有（）A.使As5+→As3+

B.除去H2SC.除去I2

D.组成锌锡齐E.除去其它杂质

药物的杂质检查专家讲座第168页.Ag—DDC法检验砷盐原理为：砷化氢与Ag—DDC吡啶作用，生成物质是（）A.砷斑B.锑斑C.胶态砷D.三氧化二砷E.胶态银药物的杂质检查专家讲座第169页.中国药典（1995年版）收载古蔡法检验砷盐基本原理是（）

A.与锌、酸作用生成H2S气体B.与锌、酸作用生成AsH3气体C.产生气体遇氯化汞试纸产生砷斑D.比较供试品砷斑与标准品砷斑面积大小E.比较供试品砷斑与标准品砷斑颜色强度

药物的杂质检查专家讲座第170页例8.葡萄糖中砷盐检验，需要试剂应有（）A．Pb2+标准液B．SnCl2试液C．KI试液D．ZnE．醋酸铅棉花药物的杂质检查专家讲座第171页例9.Ag-DDC法检验砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡作用为（）A．将As5+还原为As3+B．有利于AsH3生成反应C．抑制SbH3生成D．形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气E．催化加速生成AsH3药物的杂质检查专家讲座第172页例10.古蔡氏法检砷，药典要求制备标准砷斑时，应取标准砷溶液（）A.1mlB.5mlC.2mlD.依限量大小决定E.以上都不对药物的杂质检查专家讲座第173页例11.古蔡氏法检验所用溶液是()A.强碱性溶液B.强酸性溶液C.含稀盐酸10ml/50ml溶液D.含稀硝酸10ml/50ml溶液E.含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液药物的杂质检查专家讲座第174页96：[96—100]所含待测杂质适宜检测量为A.0.002mgB.0.01～0.02mgC.0.01～0.05mgD.0.05～0.08mgE.0.1～0.5mg

96：96.硫酸盐检验法中，50ml溶液中(E)96：97.铁盐检验法中，50ml溶液中(C)96：98.重金属检验法中，35ml溶液中(B)96：99.古蔡氏法中，反应液中(A)96：100.氯化物检验法中，50ml溶液中(D)药物的杂质检查专家讲座第175页97：[106—110]A.硝酸银试液B.氯化钡试液C.硫代乙酰胺试液D.硫化钠试液E.硫氰酸盐试液97：106．药品中铁盐检验（E）97：107．磺胺嘧啶中重金属检验（D）97：108．药品中硫酸盐检验（B）97：109．葡萄糖中重金属检验（C）97：110．药品中氯化物检验（A）药物的杂质检查专家讲座第176页例[1～5]杂质检验中所用酸是A.稀硝酸B.稀盐酸C.硝酸D.盐酸E.醋酸盐缓冲液1.氯化物检验法（A）2.硫酸盐检验法（B）3.铁盐检验法（B）4.重金属检验法（E）5.砷盐检验法（D）药物的杂质检查专家讲座第177页目标：检验药品中酸碱性杂质适用对象：

(1)在工艺中使用过酸或碱处理药品。(2)对酸碱不稳定药品,酯类、酰胺类。标准中表述：

“酸度”—pH低于7.0

“碱度”—pH高于7.0“酸碱度”—pH7.0两侧pH值六、酸碱度检验法

药物的杂质检查专家讲座第178页检验方法(1)酸碱滴定法:

用消耗滴定液体积来控制酸碱性杂质量。(2)指示剂法(3)pH值法

药物的杂质检查专家讲座第179页更准确pH测试仪器药物的杂质检查专家讲座第180页携带非常方便笔式pH计药物的杂质检查专家讲座第181页七、溶液澄清度检验法

检验药品中微量不溶性杂质，用作注射剂原料药普通应作此项检验。

1.检验方法对照法

药物的杂质检查专家讲座第182页

2.浊度标准液配制

中国药典要求用浊度标准液作为澄清度检验标准。反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。药物的杂质检查专家讲座第183页1.00％硫酸肼溶液与10％乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液浊度标准原液浊度标准液（5个级号）药物的杂质检查专家讲座第184页3.判断药典中要求“澄清”，系指供试品溶液澄清度相同于所用溶剂，或未超出0.5号浊度标准液。4.溶剂：水、酸、碱、有机溶剂有机酸碱金属盐类药品强调用“新沸过冷水”。药物的杂质检查专家讲座第185页检验方法(Ch.P)室温供试品溶液等量分别置于配正确比浊用玻璃管中浊度标准液暗室内垂直同置于伞棚灯下照度1000lx水平方向观察、比较检验药物的杂质检查专家讲座第186页浊度标准液硫酸肼乌洛托品

水*甲醛腙浊度标准液：贮备液、原液、比浊用液药物的杂质检查专家讲座第187页九、溶液颜色检验法

控制药品中有色杂质限量方法。

ChP()采取三种方法检验。

第一法目视比色法即与标准比色液比较方法，全波长范围定性观察药物的杂质检查专家讲座第188页第一法：目视比色法黄绿色黄色橙黄色橙红色棕红色比色用重铬酸钾液比色用硫酸铜液比色用氯化钴液水药物的杂质检查专家讲座第189页观察方法

药物的杂质检查专家讲座第190页标准比色液配制

药物的杂质检查专家讲座第191页第二法分光光度法单一波长定量第三法色差计法全波长范围定量本法是经过色差计直接测定溶液透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析方法。测色仪器普通为光电积分型色差计

药物的杂质检查专家讲座第192页色差值标准液供试液水第三法：色差计法:原理：药物的杂质检查专家讲座第193页十、易炭化物检验法

检验药品中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色微量有机杂质。

方法：H2SO4炭化后与对照液比较。

药物的杂质检查专家讲座第194页对照液：（1）“溶液颜色检验”项下标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按要求方法配成对照液；药物的杂质检查专家讲座第195页比色：同置白色背景前，平视观察比较。（3）高锰酸钾液药物的杂质检查专家讲座第196页检验不含金属有机药品或挥发性无机药品中混入无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。1.原理

样品炭化后+H2SO4湿润→700～800℃炽灼至恒重→炽灼残渣（硫酸灰分）限量普通为0.1%～0.2%十、炽灼残渣检验法药物的杂质检查专家讲座第197页2