红细胞不规则抗体检测

血型抗体筛选与鉴定的前期工作•发现途径•方案设计•合格血样发现途径方案设计合格血样病历资料有多重要抗体鉴定中常用的方法•直接离心法检测抗体•抗人球法•凝聚胺法•酶法实验•微柱卡法直接离心法检测IgM抗体红细胞之间因静电作用保持一定距离蓝色表示红细胞表

面的负电荷层In绍

14一飞

红细胞之间保持24nm的距离lgM抗体可以在盐水介质中凝集红细胞的跨度可达34nmj

青

岛

市

中

叫站Robert

Royston

Amos

(Robin）

ζoombsImmunolog

ist

who

invented

the

antiglobu

li

ntest

that

allows

detection

of

anti-rhesusantibodies.

Born

on

Jan

9,

1921,

in

L。ndon,UK,

he

died,

on

Jan

25,

2006,

aged

85years.According

to

a

tale

that

has

become

something

of

a·----

--•-

-•

I

I

牛＿

J

n_L•

,.

‘＿I

I

-•--

_J

..L慈

血

真

传Coombs

明s

bom

in

London

and

grew

up

in

South

Africa,陀turning

to

the

UK

to

attend

Edinbu

rgh

Universitywhere

he

qualified

in

veterinary

medicine

in

1943.

He

went

on

toζambridge

University

as

a

PhD

student

in

the

Department

ofPathology

where

he

would

remain

until

his

『etirement

in

1988.

He

gained

his

PhD

in

1947

and

was

soon

appointed

assistant

director

of

research.

In

1966,

he

became

QuickProfe圭sor

of

Biology.The

developmentof

the

antiglobulin

test

had

ramifications

that

extended

fa『

beyond

the

ability

to

detect

anti-rhesus

antibodies,

notes

Herman

Waldmann,

a

PhD

student

of

Coombs’

in

the

1970s

and

now

professor

of

pathology

at

the

University

of

Oxford.

YetWaldmann

remembers

hismentoras

a

se协e仔acing

man

who

didn’t

seek

fame.

"He

was

never

a

Time

mag缸ine

hero.He

never

wanted

to

be."Coombs’

『esearch

interests

on

the

properties

ofantibodiesled

to

the

development

of

several

tests

for

antibodi巴

andantigens

with

clinical

appliαtions.

He

was

also

fascinatedA

NEW

TEST

FOR

THE

DETECTION

OF

WEAK

AND

“

INCOMPLETE

”RH

AGGLUTININS

.R.

R.

A.

COOMBS,*

A.

E.

MOURANT

AND

R.

R.

RACE.Fro例

如

Depαrtment

of

Pathology,

Univers句

of

Ca＇＂！＇»＇创仰，and

伽

Med

化dResearch

CouncilEmergemy

Bkx.对

Tra叫fw,ion

Service.Received

for

publication

July

9,

1945.IN

this

paper

·the

de饵ils

w诅

be

pre肥n协d

of

a

method

which

has

been

developed

to

amplify

the

effect

of

weak

(or

subliminal)

Rh

agglutinins

and

“

incomple饵

”

an也i­bodies,

by

也he

ac也ion,

on

the

sensitized

cells,

of

a

rabbit

anti-human-globulin

肥rum.The

旬的was

originally

intended

嗣an

instrument

of

·r倒earch

;

but

it

promises

to

be

ofpractical

u腑

since

i也

has

de协cted

Rh

immunization

迦

some

c拥倒

whre

the

usual

tests

have

failed

to

.do

so.

A

brief

account

of

this

method

has

already

been

published

(Coombs,

Mourant

and

Race,

1945).It

must

be

common

experience,

and

no也

only

our

own，也hat

numerous

..ca盹S

ofsuspec伽d

haemolytic

disease·

ofthe

newborn,

and

<?f

reactiop.

to

blood

transfusion,?ccur wch

山histo叹

al!-d

h

arran事e冉ent

stroly

su路倒

也hat

immunization抗人球试验(Coombstest)原理：盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞凝集，加入抗球蛋白试剂后，抗球蛋白分子的Fab端与包被在红细胞膜上的抗体Fc端结合，通过抗球蛋白分子的搭桥使红细胞凝集。lgG抗体不能在盐水介质中直接凝集红细胞跨度仅为’4nmlgM和lgG

的电镜照片-idi才＇.喝．？可t吃间接抗人球法(IAT)+直接抗人球法(DAT)试管法♣经典IAT♣LISS-IAT♣PEG-IAT“LISS(LIM)的原理：PEG原理争夺红细胞表面的水化膜，PEG在吸收了大量水分后，抗体分子更易和红细胞结合，达到增强红细胞表面抗原和不完全抗体反应的目的。敏感度大幅提高，特异性好注意：• 在高蛋白血样中使用会出现蛋白质沉淀• PEG可能有假阳性出现• 只能结合抗球蛋白方法使用凝聚胶

（

Polybrene

）

试验Lalezari

1931年生于伊朗，在医学院毕业后

于1956

年来到美国。他最初的研究方向是

白细胞抗体。在改良了抗体检测技术后，

他发现如同新生儿溶血病以及新生儿血小

板减少症一样，母婴之间粒细胞的不配合

也可以导致新生儿粒细胞减少症。• 1959年，一种肝素中和药物

（Polybrεn巳）

被用于心脏手术术后治疗。Lalezar

i发现，

作为季肢聚合物，Polybrenε

可以和红细胞

表面的唾液酸反应，造成红细胞的凝集。

稍后他使用Polybr巳ne

去中和红细胞表面的

负电荷，使lgG

分子可以凝集红细胞。聚凝胺试验(Polybrene法)3注意事项》按比例加样》致敏时间》观察非特异性凝集》观察结果》关于冷凝集1特点》简便快速》对Rh抗体敏感》不适合于Kell系统抗体检测2临床应用抗体筛选和鉴定、配血、效价测定聚凝胺试验(Polybrene法)聚凝胺原理“

LIM，降低溶液的离子强度，加速IgG型抗体与红细胞之间反应速度“

聚凝胺作为一种碱性分子可以和红细胞表面的酸性糖分

子结合，在离心力的作用下聚凝胺使红细胞相互靠近，

使得已经结合在红细胞表面的IgG抗体分子可以在不同的红细胞之间搭桥。“

然后加入重悬液，使得聚凝胺的作用被消除。但已经被IgG抗体分子搭桥连接起来的红细胞不会散开，以此检测血清或血浆中存在的血型抗体。www.s血清混合液红细胞加入LIMPolybrene受体IgG

抗

体

迅速致敏血型抗原经典聚凝胺法www.sPolybrene

分

子

连接到红细胞上加入Polybrene经典聚凝胺法www.s离心必须注意观察非特异性凝集Polybrene拉近

红细胞间的距

离并造成凝集1个IgG分子同

时连接两

个红细胞经典聚凝胺法加入重悬液减弱了Polybrene的作用加重悬液经典聚凝胺法www.s已被血型抗体

致敏的红细胞

1’内不会散开阳性结果阴性对照经典聚凝胺法www.s未被血型抗

体

致敏

的

红细胞

1’

内很快散开阴性结果经典聚凝胺法酶法技术酶技术原理：•

破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体作用下，红细胞便出现凝集。• 促进某些系统（RH和KIDD）的抗原抗体反应；• 但会改变其它系统（尤其是MNS，DUFFY）抗原的构型而破坏其抗原性。酶法检测lgG抗体的原理酶破坏红细胞表面的唾液酸减弱了红细胞之间的静电作用p缩短了红细胞之间的距离微柱凝胶检测卡示意图正面反

应

室试剂凝胶，·．咱AHG AHG AHG

I

AHGAHG AHGaZE四”吗1·商

......

.

.画＿

画

画

画

画

画

画

画

噩噩噩噩噩噩噩圄

.侧面哇．‘’陆m

AHG

AHG

AHG

Allb

AHG．．，．．．”····4 j 2凝胶法试验原理Principle

of

the

Gel

TestGelmatrbc＋＋＋＋微柱凝胶卡抗球蛋白试验www.s凝胶法示意图结果判读• 抗体鉴定谱• 可靠性• 结果与阳性、阴性反应• 自身