aids初筛实验室的课件资料

aids初筛实验室的课件资料第1页/共32页一、艾滋病与艾滋病病毒第2页/共32页（有A～E多个亚型）与一种感染灰身白脸猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多个亚型）与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。第3页/共32页Cross-speciesTransmissionofSIVcpzSIVcpzHumaninAfricaChimpanzee黑猩猩SIVcpzSIVcpz重组？重组？重组？猴免疫缺陷病毒M组HIV-1N组HIV-1O组HIV-1第4页/共32页Cross-speciesTransmissionofSIVsmSIVsmHIV-2HumaninWestAfrica猴免疫缺陷病毒灰身白脸猴SootyMangabeys重组？第5页/共32页StructureofHIVVirionParticle

OrganizationoftheHIV-1Virion第6页/共32页艾滋病病毒感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧失抵御各种疾病的能力，有利于各种病原体的侵入，从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死率可达100％。第7页/共32页第8页/共32页HIV-1M组HIV-1O组HIV-2非洲中部和东部美国、欧洲、南美洲、非洲和亚洲南美洲、印度、赞比亚、中国非洲中部和东部泰国、中非、印度巴西、罗马尼亚、喀麦隆加蓬、苏联、尼日利亚、乌干达、塞内加尔、赞比亚喀麦隆、扎伊尔、中非塞浦路斯扎伊尔喀麦隆、加蓬HIV型别和亚型的分类进化与地区分布：西非、印度HIVABCDEFGHIJO1O2O3O4ABCDE第9页/共32页感染分期临床分期维持时间感染标志物传染性原发感染潜伏期潜伏期2-4周抗体阴性(窗口期)传染危险性高原发感染症状期急性HIV感染1-2周传染危险性高慢性感染潜伏期无症状HIV感染2－15年(平均8-10年)抗体阳性有传染性临床发病期艾滋病0－3年(平均1-2年)抗体阳性抗原阳性传染性强艾滋病从感染到发病的一般过程第10页/共32页筛查试验初筛复检确证试验

二、HIV检测程序第11页/共32页检验标志物检验目的检验方法HIV(1+2)抗体筛查试验金标法、硒标法快速诊断试验化学发光或免疫荧光试验

仪器酶联免疫试验（ELISA）第三代：双抗原夹心法第四代：增加检测P24抗原确证试验蛋白印迹法(WB)

手工/仪器病毒抗原早期诊断酶联免疫试验检测P24抗原病毒核酸临床诊断治疗评价定性试验

检测DNA定量试验

即病毒载量，检测RNACD4流式细胞仪法检测CD4+T淋巴细胞艾滋病实验诊断方法第12页/共32页诊断试剂窗口期特点金标法、硒标法5周35天敏感性低，容易漏检ELISA（国产第三代）3周多20～25天普及，稳定性欠佳ELISA（进口第三代）3周18～22天较为成熟，稳定性好ELISA（进口第四代）2周多16～17天假阳性率偏高核酸检测1周多10～12天不用于常规诊断各种诊断试剂特性第13页/共32页样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测阴性报告均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种原理初筛试剂选用初筛试剂阴性反应HIV抗体筛查检测流程图第14页/共32页HIV抗体确认试验筛查试验初筛复检确证试验第15页/共32页■

针对各种病毒蛋白的特异抗体■

区分ELISA真阳性与假阳性■

检测HIV-1和HIV-2HIV抗体确证试验WesternBlot免疫印迹法第16页/共32页基因名称代号功能基因产物片段HIV-1HIV-2结构基因外膜蛋白基因env合成外膜蛋白gp160gp120gp41gp140gp105

gp36

核蛋白基因

gag合成核蛋白p55p24p18

p56p26p16逆转录酶基因pol合成逆转录酶p65p51p31

p68p53p34调节基因反式激活因子tat加速病毒蛋白合成毒力蛋白表达调节基因rev促进整合的病毒选择性地产生调节蛋白或毒粒成份负调节因子nef减缓基因转录，使停止繁殖而处于潜伏状态毒粒感染性因子vif促进病毒感染另一个细胞HIV的主要基因及其产物

（HIV标志物）第17页/共32页ss-RNA第18页/共32页HIV抗体阳性诊断标准：■2条env（gp160/gp120+gp41）■1条env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆转录酶（pol）第19页/共32页HIV抗体确认实验结果a强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应abcdgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17

血清对照HIV-2特异带第20页/共32页筛查试验阳性反应样品HIV抗体确证检测流程图结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。确证试剂根据具体情况进一步检测HIV-2报告阴性出现HIV-2指示条带阴性反应不确定反应报告HIV-1阳性HIV-1阳性反应第21页/共32页HIV抗体检测的要点1、严格遵守实验室SOP。2、筛查试验阳性，须作确证实验。3、筛查试验阴性，不应做确证实验。

第22页/共32页生物安全

《全国艾滋病检测技术规范》

第二章[HIV抗体检测]中提出

“HIV抗体检测实验室应符合《实验室生物安全通用要求》对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。”第七章[艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防]中进一步指出

“艾滋病血清学检测（包括筛查和确认实验室）、免疫学和核酸检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。”

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Ⅱ级生物安全实验室设施和设备要求

u

实验室所用设施、设备和材料（含防护屏障）均应符合国家相关的标准和要求u

BSL-2实验室满足BSL-1的要求。

实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。

应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。在实验室的工作区域外应有存放个人衣物的条件。在实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，符合要求。应在实验室内配备生物安全柜(避免的危害：气溶胶和喷溅)。应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。

第24页/共32页生物安全

运输采用WHO三级包装体系①第一层容器：包装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者的姓名、种类和采集时间。在试管的周围应有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。②第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器将试管装入装用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理③第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量、收、发件人）。第25页/共32页生物安全

废弃物处置和消毒一、废弃物处置

1、废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）和《消毒技术规范（2002年版）》2、从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。第26页/共32页二、HIV常用物理消毒方法

1、高压蒸汽消毒

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