法医生物物证检验

#/12（四）杂合子基因型频率是2倍一对等位基因频率的乘积。四、表型频率表型频率是基因型频率的数学和，亦是各种表型占总调查人数的百分数。五、Hardy-Wernberg平衡定律Hardy-Wemberg平衡定律亦称遗传学平衡定律，是指在一个大的随机交配的群体里，在没有迁移、突变和选择的条件下，基因频率和基因型频率世代相传不变，处于平衡状态。（一）基因频率和基因型频率的恒定。（二）复等位基因的遗传平衡Hardy-Wemberg公式适用于复等位基因遗传，根据平衡定律推算复等位基因的基因频率。第六节遗传多态性一、遗传多态性同一群体中，同一基因座存在2个或2个以上等位基因的现象。通常以等位基因频率大于0.01为标准。二、遗传多态性形成机制人类个体千差万别，其物质基础在于基因组DNA的差异。基因一般表现为极为稳定的实体，表现为它的保守性，即子代同于亲代的特征。但基因也会发生突变和重排，结果出现一个在功能上与原来不同的新单位或等位基因，即基因变异。结果以新的形式进行复制，使子代不同于亲代，变异的积累引起生物多态性和进化，生物得以发展。人们对于这些差异的认识始于基因表达产物的差异，在群体中表现为该蛋白质的多态性。如经抗体识别结构的差异（ABO、MN血型），同工酶迁移率的差异（酶型）。三、如何衡量多态性水平多态性的水平常以一些计算数据衡量，如群体遗传学中的杂合率、个人识另识别机率。第三章电泳技术学习目的和要求：了解一般的电泳知识，掌握常用的凝胶电泳技术。第一节电泳的概念一、电泳的定义带电颗粒在电场的作用下，向着与其所带电荷相反电极移动，称为电泳。二、电泳分类以不同的根据，分类不同。如：（一）根据分离原理分1．区带电泳；2．等电聚焦电泳；3．移界电泳；4．等速电泳等。（二）根据支持介质分1．聚丙烯酰胺凝胶电泳；2．琼脂糖凝胶电泳；3．淀粉凝腹电泳；4．膜电泳；5．纸电泳等。（三）根据电泳方式分1．水平板电泳；2．垂直板电泳；3．圆盘电泳等。第二节电泳一、电泳装置组成（一）电源提供稳定的直流电，控制电流、电压和功率的输出。（二）电泳槽，包括：1．电极；2．缓冲液槽；3．电泳支持介质的支架；4．连有冷却水管的冷却板；5．槽盖。（三）低温浴槽为冷却系统，不断地把冷水通过橡皮管灌人冷却板中二、影响电泳迁移率的因素（一）样品1．电荷量；2．分子大小；3．分子形状。（二）电场1．电流；2．电压；3．电阻。（三）缓冲液的pH值，离子强度（四）支持介质对介质的选择取决于所分析样品的类型，不同的介质有不同的效应。1．吸附；2．电渗；3．分子筛。第三节凝胶电泳用凝胶作支持介质的电泳称为凝胶电泳。目前法医常用的凝胶电泳有以下二种。一、琼脂糖凝胶电泳（一）用途主要用于分离，鉴定和纯化DNA片段。用溴化乙啶（EB）染色，在紫外灯下,凝胶中1ng的DNA即能直接观察到。2.分离鉴定同功酶。（二）优点简单、条件易具备；大小分子均可很好地分离；3.有较高的分辨能力。二、聚丙烯酰胺凝胶电泳（一）目前用于法医的电泳种类1.聚丙烯酰胺凝胶平板电泳；聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳；3.聚丙烯酰胺凝胶毛细管电泳。（二）用途DNA片段分析。同功酶的亚型分析及血清蛋白型分析。（三）凝胶形成和影响孔径因素形成：聚丙烯酰胺凝胶是通过单体丙烯酰胺（acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合而成。决定凝胶孔径的因素：凝胶溶液中单体和交联剂的浓度，以及聚合程度和交联度，决定凝胶的浓度、孔径、弹性和机械强度。凝胶浓度可以用T和C来定义。凝胶浓度T：代表100ml凝胶溶液中含有的单体和交联剂的总克数T=X100%T越大、孔径越小凝胶交联度C：C代表凝胶溶液中，交联剂占单体和交联剂总量的百分数C=X100%当T值不变时，bis的浓度在5%时孔径最小.(四)聚丙烯酰胺凝胶作区带电泳的优点1.样品不易扩散；可按需要制成不同孔径、浓度的凝胶；把分子筛效应和电荷效应结合在一起使分辨能力更高；4.化学上惰性较强，电泳时不产生电渗；5．在一定浓度范围内透明度好，机械强度好，有弹性；6．重复性好。三、毛细管凝胶电泳毛细胞凝胶电泳(CGE)技术是蛋白质、多肽、寡核苷酸和DNA等生物大分子分离，分析的有力工具，特别是与激光诱导荧光检测技术结合，成为DNA快速序列分析的优选方法。(一)电泳介质1.凝胶：聚丙烯酰胺凝胶(PAG)。聚合型：由丙烯酰胺(acr)和双丙烯酰胺(bis)交联而成。线型：只有丙稀酰胺。在催化剂的作用下聚合而成，适合于大分子蛋白、核酸的分离。2．其他筛分介质：琼脂糖，甲基纤维素及其衍生物，葡聚糖，聚乙二醇等。(二)一般工作步骤1．毛细管内表处理。取熔硅毛细管，相继用碱、酸、甲醇清洗；充入双功能试剂(MAPS)，室温放置3h以上再冲洗；双功能团中的一功能团与管内壁反应，进行硅化处理，另一端(烯基端)双链在胶形成其间与丙烯酰胺共聚合，使凝胶键接在管壁上，以增加胶的稳定性。2．胶液组成。(1)丙烯酰胺(acr)、双丙烯酰胺(bis)、四甲基乙二胺(TEMED)、过硫酸胺(ASP)。化学聚合(2)丙烯酰胺(act)、双丙烯酰胺(bis)、四甲基乙二胺(TEMED)，核黄素。光聚合3．灌胶。(1)用注射器导人。(2)靠虹吸导人。目前用于DNA分析的PE公司ABL310毛细管电泳仪分离介质为，进口凝胶。（三）毛细管电泳的优点及不足1．分辨率高；2．灵敏度高；3．检材用量微；4．容易自动化；5.目前用于法医DNA分析的胶、毛细管都需进口。四、等电聚焦电泳（一）聚焦电泳的应用对象1．蛋白质生物大分子。2．二性分子。（二）原理是利用蛋白质或其他二性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性的PH梯度中进行蛋白的分离和分析。（三）电泳过程蛋白质是代有电荷的二性生物高分子，其正、负电荷的数量是随分子所在环境的酸、碱度的变化而变化的。在电场存在下的一定pH缓冲液中，带正电的蛋白质将向负极移动，带负电的蛋白质将向正极移动。当移动到蛋白质分子净电荷为O时便可停止移动，即聚焦在蛋白