临床生理学课堂笔记

临床生理学心房纳尿肽——王维国概述：1、名称：心纳素2、 发现：1956kicsh1979bold生化：1、 结构、活性：126各氨基酸残基，两个环外肽键发挥作用：利尿，扩血管2、 形式分布：小分子心房、血液3、 受体效应4、释放调节①物理因素：心房被动扩张机体na浓度血流动力学：心动过速神经调节激素：醛固酮ADH作用1、 利尿①作用迅速②效容强③钙依赖性④生命性调节物2、 降压效应3、 抗衡扩容关于临床1、 高血压：ANP升高2、 心脏病：心功能不全心房过度充盈3、 肾脏：ANP升高4、 肺：肺水肿ANP升高5、 脑：脑水肿ANP升高应激与临床——王学瑞定义：指机体在受到内外环境因素及社会、心理因素刺激时，所出现的全身性、菲特异性适应反应。机制：1、应急反应：蓝斑—肾上腺—髓质系统。威胁生命激活。2、应激反应：HPA系统，下丘脑一垂体一肾上腺皮质系统室旁核：CHR促肾上腺皮质激素释放激素通过门脉系统作用腺垂体。ACTH促肾上腺皮质激素释放通过血液作用肾上腺皮质。C反应蛋白升高提示应激。基本过程：全身适应综合症：①警觉期②抵抗期③衰竭期。睡眠与睡眠异常一睡眠：机体活动状态的变化。由清醒状态向视、听、嗅暂时消失、骨骼肌放松、副交感神经兴奋的一种状态1、 调节代谢：能量、物质、新陈代谢2、 调节神经—内分泌轴3、 调节神经内分泌免疫轴4、 调节机体内环境

5、 影响学习、记忆、思维、决策、判断。二睡眠的发生1、CNS中有睡眠中枢：脑干（低位）中缝核、蓝斑核、孤束核、背核、疑核较高级中枢：下丘脑弓状核、室周核高级中枢：大脑皮层、海马、梨状叶2、 神经递质：ACH、NE、多巴胺、5—羟色胺3、 肽类物质：内源性阿片样肽卩一内啡肽、强啡肽5肽三睡眠研究指标1、 脑电图：大脑皮质大椎体细胞顶树突突触后电位的综合a波8~13次/分20〜50yV枕叶（睡眠状态）卩14~30次/分5~10gV额叶（清醒状态）04〜7次/分50~100gV睡眠慢波50.5~3次/分70~200gV深睡眠期2、肌电图：骨骼肌活动的电活动。看幅度3、 眼球运动电活动4、 核团放电：外侧膝状体五睡眠异常1、 入睡困难：2、 入睡不安3、 各阶段比例是否正常4、 总睡眠时间缩短癫痫的基础与临床实验研究癫痫是一种神经系统的常见病、多发病，在我国有癫痫患者650万人，每年新增患者45万，严重危害人民的身体健康。一、癫痫的定义癫痫是由先天或后天不同的病因所引起的慢性脑部疾病，其特征是由于大脑神经细胞群的突然反复超同步放电所引起的发作性、突然性、短暂性脑功能紊乱。二、癫痫的病因：1．祖国医学对癫痫病因学的认识：病因多为积痰、郁火、惊恐和先天性因素，痰可由气郁化火，火郁炼液而成，惊则心神失守，而与先天因素的关系则是由于肝肾阴血不足，心肝之气易于受损，致使肝气逆乱，神不守舍而发昏仆、抽搐。2.现代医学对癫痫病因学的认识：（1） 原发性癫痫：指无脑部器质性或代谢性疾病表现、致病原因尚不明确的一类痫病，又称真性癫痫。（2） 继发性癫痫：或称症状性癫痫，由多种脑部器质性病损或代谢障碍所致。①先天性畸形损伤③高热惊厥后遗①先天性畸形损伤③高热惊厥后遗感染⑦颅内肿瘤⑨营养、代谢性疾病三、癫痫部位的判断②产前或产时损伤④颅脑损伤中毒⑧脑血管疾病⑩变性疾病1.癫痫灶（epileptogenicfocus）：是神经生理学概念，指在脑电图上出现癫痫性放电中最明显的一个或一个以上的部位。癫痫病灶(epileptogeniclesion)：是神经病理学概念，指能确认的脑部构造异常，相信此种病理变化会导致脑电图的癫痫放电和临床的癫痫症状产生。癫痫区域(epileptogenicregion/zone)：是指脑某一范围，通常包括癫痫灶和病灶，其存在导致病人反复的习惯性癫痫发作。四、 癫痫的神经电生理检查癫痫的脑电图诊断脑电图(EEG)：应用电子技术引导、放大、记录的大脑皮层神经细胞的电位变化。癫痫发作时或间期，脑电图上出现突发性的高波幅放电，称为痫样放电(epilepformdischarge),其常见波形有：棘波(spikewave)：时程在70ms以下，幅度50〜150pV,波的升支及降支极为陡峭，可有单相、双相或三相。癫痫样放电最具特征性的表现之一。尖波(sharpwave)：意义同棘波，都是大脑皮质神经元高度同步放电的结果。时程为70〜200ms，幅度100〜200》V。波顶较钝.。棘-慢综合波(spikeandslowwavecomplex):即在棘波之后紧随一个慢波，或次序相反，慢波时程达200〜500ms，幅度100〜200》V。多棘慢综合波(polyspikeandslowwave)：多个棘波后紧随一个慢波，棘波波幅高低不一，但一般不超过慢波。尖慢综合波(sharpandslowwave):尖波后跟一个慢波。一般为1.5〜2.5Hz尖慢综合波，也常见4〜6Hz尖慢综合波。脑磁图(magnetoencephalogram，MEG):是测定神经元兴奋时产生电流所伴随的磁场变化的一种无侵袭性测定脑电活动的方法。其原理是脑组织内某一小部分的神经元兴奋时产生一种精细的细胞内电流，该电流又产生一个磁场，环绕该电流的磁力线将穿出头皮后再回到脑中。脑磁图就是测定这个磁场。利用脑磁图可以进行癫痫灶的精确定位。脑电地形图(brainelectricalactivitymapping，EAM):是从头颅全部记录电极提取一定时间内的脑电信号，通过模数转换和付立叶转换，将脑电信号转换为数字信号，处理成为脑电功率谱，依功率的多少分级，最终使脑电信号转换成一种能够定量的二维脑波图像，此种图象能客观地反映各部电位变化的空间分布状态，其定量标志可以用数字或颜色表示。此图是脑膜瘤引起的继发性癫痫脑电地形图，显示以左中央区(C3)为中心，向左后额区(F3)和左顶区(P3)发放的双侧棘波，峰值电压＞127》V。提示左中央区脑膜瘤引起的继发性癫痫存在。五、 癫痫的神经显影的检查：X线电子计算机断层扫描(computerizedtomography，CT)：是利用X线断层扫描、电光子探测器接收，并把信号转化为数字输入电子计算机，再由计算机转化为图象。磁共振成像(magneticresonancetomography，MRI)：是通过体外高频磁场作用，由体内物质向周围环境辐射能量产生信号实现的，成像过程与图象重建和CT相近，只是MRI既不靠外界的辐射、吸收与反射，也不靠放射性物质在体内的Y辐射，而是利用外磁场和物体的相互作用来成像。六、 痫样放电的发生机制痫性活动的发生：单个神经元的放电各有其自身的节律，当一群神经元中多数细胞倾向于共同活动而产生大致相同的放电节律时，即称为同步化，而当这种共同活动达到极端，即出现所谓超同步化。痫性活动的原因：兴奋过程的过盛，抑制过程的衰减，及／或神经膜本身的病理变化。在症状性癫痫灶和实验性癫痫灶中，可见下列变化：形态结构改变：（1） 癫痫灶内抑制性神经元，主要是GABA能神经元（如海马齿状回的蓝状细胞）的选择性减少。（2） 癫痫灶内神经元（如锥体细胞）上抑制性突触数减少，与非癫痫灶相比，相差约50%。（3） 脑内星形胶质细胞增生。生化改变：除反映神经元缺失的蛋白质、磷脂、RNA等减少，和反映胶质增生的碳酸脱水酶、DNA、水分等增加外，有关的变化为谷氨酸脱羧酶的减少，从而阻遏GABA的合成。发作时先有细胞外钙离子的减少，继以细胞外钾离子的增加。电位改变：各种癫痫灶的神经元在发作期间可出现一种特殊电现象，即神经元的放电形式由单个动作电位转变为一群动作电位，在动作电位发生以后，不是恢复平静而是持续去极化状态，称为阵发性去极化飘移（PDS），历时数十以至数百毫秒后方转入超极化状态。（二） 痫性活动的传播痫灶细胞群的高频重复放电，使其轴突所直接联系的神经元产生较大的兴奋性突触后电位（强直后易化作用），从而连续传播。（三） 痫性发作的停止主要由于各梯层的抑制作用，包括痫灶周围抑制性神经细胞的活动，胶质细胞对兴奋性物质的回收，以及皮质外抑制机构的参与。七、脑片技术在癫痫研究中的应用脑片是指从哺乳动物脑区制备的厚约100〜700“m、能在体外存活一定时间的薄片。（一）脑片电生理研究的原理及特点脑片兼有在体的脑和离体细胞培养二者的某些特点，在某种程度上结合了二者的优点:在离体情况下，脑薄片的机械稳定性好。不必维持麻醉，消除了麻醉药的干扰。组织结构的可见性，能在解剖显微镜直视下，将数个记录电极和刺激电极插到脑片的预定部位，没有立体定位技术问题。不存在血-脑屏障，加入到灌流液中的各种物质可直接进入脑组织。灌流给药能控制组织内药物浓度，建立量效关系。能灵活改变细胞外液的离子成分，分析药物效应的离子机制。容易控制环境和限定独立变化的因素，进行温度、渗透压、pH值等环境因素对大脑的影响的研究，作用机制稳定。8．能和生化、形态学研究配合，开展综合性研究。离体脑片虽然有很多优点，也有一定的缺点和局限：1．脑片没有正常的传入和传出通路;失去和周围组织的联系，可能改变脑薄片内神经元的电特性。看不到机能或行为的结果；组织的兴奋性水平主要取决于灌流液中的离子浓度以及在制备过程中有损伤。3．代谢的研究发现脑薄片的能量代谢偏低。ACSF和天然脑脊液的成分有差异，ACSF不含蛋白质、氨基酸、维生素、激素等物质，而且K+,Ca2+,Mg2+的浓度偏咼。然而，电生理研究已经证明，脑薄片的实验结果是可靠有效的，脑薄片神经元的电学特性类似于、甚至优于整体动物提供的相应的数据。当然，实验者应考虑到以上的不可靠因素，尽量采取措施以得到准确可靠的结果。脑片技术在神经生理学、神经药理学等领域中得到广泛应用，现己发展为包括新皮层、嗅皮层、视皮层、海马、小脑、新纹状体、丘脑、下丘脑、脚间核、外侧膝状体等20多个脑区域核团的薄片以及脊髓薄片。脑片比较适用于在如上部位的细胞和分子水平上研究哺乳动物中枢神经系统的电生理学和药理学特性，包括神经元膜的电特性、简单突触回路、化学传递、突触可塑性、神经元发育和衰老、癫病等神经系统疾病的发病机理等。海马脑片结构及神经回路海马是一个结构相对独立、边界十分清楚的神经组织；它是边缘系统中最显著的一个结构，具有多方面的生理功能。它具有非常理想的分层结构，其主要细胞分布及纤维去向非常清晰，且其内源性和外源性纤维及锥体细胞和颗粒细胞均按层状排列，非常适于制备脑片，且易于安放电极进行电学记录。在海马的横切片上，海马神经元排列成“C”形，齿状回的神经元则形成另一个反方向且与之相交锁的“C”形。细胞体紧密地排列在一起，其顶端树突平行排列，形成一个清晰的分层。海马“C”的分支在下托和嗅内皮层弥散开来。CAl区：海马水平部的背内侧部分和垂直部的后内侧部分；CA2区:海马水平部的背外侧部分和垂直都的前外侧部分；CA3区:海马水平部的腹外侧部分和垂直部的前内侧部分CA4区:齿状回的多形细胞层。在刺激突触前纤维时，可同时用两个电极分别放在突触区及胞体区记录突触后电位及胞体的电活动。通过刺激不同的突触纤维，可以记录得到不同的场电位，主要有以下几种:突触前传入纤维排放PV(Presynapticfibervolley)突触处场EPSP(fieldexcitatorypostsynapticpotential)锥体细胞内记录的锋电位(spike)或锥体细胞外记录的群体锋电位PS(Populationspike)常用的海马组织电生理研究的一种方法是采用电脉冲刺激神经突触的传入纤维，检测和记录海马锥体细胞或齿状回颗粒细胞的胞外诱发场电位，该电位主要由兴奋性突触后电位(theexcitatorypostsynapticpotential,EPSP)和群体峰电位(thepopulationspike,PS)组成。生理盐水对致痫海马脑片CA1区诱发场电位的影响：在10例海马脑片的诱发场电位的记录中，滴注生理盐水前后，其幅度(amplitude)无明显变化，PD0.05，无统计显著性。这说明，脑片表面微量滴注生理盐水后，对诱发场电位无明显影响。abeforephysiologicalsalinebafterphysiologicalsaline柴胡对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：本实验观察了15例海马脑片在滴加柴胡提取液前、后，其诱发场电位的变化。实验结果见表1。1g/m1浓度的柴胡使致痫海马脑片诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低20.41%,平均6.86分钟恢复，经统计学检验，pDO.Ol，具有非常显著意义。cbeforebupleurumrootdafterbupleurumroot郁金对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：实验观察了10例海马脑片在滴加郁金提取液前、后，其诱发场电位的变化。1g/ml浓度的郁金使海马脑片诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低26.44%，平均9.7分钟恢复，经统计学检验，0.01口卩口0.05,有非常显著意义。ebeforecurcumarootfaftercurcumaroot桂枝对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：实验观察了10例海马脑片在滴加桂枝提取液前、后，其诱发场电位的变化。实验结果见表1°1g/m1浓度的桂枝使海马脑片诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低28.79%，平均16.8分钟恢复，经统计学检验，p口0.01，有显著意义。gbeforecassiatwighaftercassiatwig钩藤对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：实验观察了14例海马脑片在滴加钩藤提取液前、后，其诱发场电位的变化。1g/m1浓度的钩藤使诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低27.64%，平均8.71分钟恢复，经统计学检验，P口0.01，有非常显著意义。ibeforeuncariajafteruncariauncaria离体海马脑片细胞内记录的工作表明:（1） 锥体细胞膜的特性，如膜的时间常数、膜电阻、膜静息电位及动作电位水平；（2） 锥体细胞及齿状回颗粒细胞的EPSP;（3） 顺向刺激与逆向刺激引起的返回性IPSP均与整体内的研究结果相同。（三） 离体脑片实验系统的要求（四） 海马脑片的制备和维持1.海马脑片的制备活的脑片的切制方法大致可分为机械切制法和震动切制法以及手动切制法。机械切制法:将动物（豚鼠或大鼠）用乙醚麻醉（或猛击脊柱）后断头，迅速将全脑取出并分为左右两半，小心剥出海马，放在切片台上，从脑室面上可看出海马槽纤维方向，沿该纤维平行方向将海马切成500“m厚的切片，每切一片用小毛笔将脑片移至预先用氧饱和的人工脑脊液中，然后用宽口径玻璃吸管轻轻移至浴槽内。从动物断头至脑片放入浴槽内一般在2.5~5.Omin内完成。通常，在制备过程中尽量保持在较低温度。震动切制法:取出断头动物的脑，用刀片将一侧脑切两个矢状切口，小心移去中间部分组织块的新皮层和小脑，用胶将剩下的组织块外侧面牢牢地贴在一黄铜块上，再将黄铜块卡在震动切片器的夹盘上，使海马的脑室面对着刀刃，组织和刀均浸浴在37°C、持续充以95%02和5%C02的人工脑脊液中，进行震动切制。从断头到脑片切成放在记录浴槽中的时间，一般不超过15min。切片方向海马切片的厚度：脑片厚度决定三个主要因素：可见性，生存能力和神经元环路的保存。温度：脑片实验中温度变化对结果的影响是一个不容忽视的因素，在脑片孵育过程中温度保持在31〜34oC为宜。温度过低时脑片活性不好，温度过高将使脑片软化失活。脑片不能存活的几个原因：ACSF配方不准、浑浊、失效。脑片缺氧。在对海马脑片进行分离和切片的时间太长，超过7〜8分钟(分离脑组织的时间太长，超过三分钟)。在组织准备过程中，对海马组织过多的机械损伤和挤压。记录槽、输液管长菌。海马脑片的切片角度不正确。2.浴槽综上所述，与离体培养细胞相比，脑片神经环路较完整，可研究原有神经环路不同神经元之间的相互作用。已有实验证明，脑片标本能重复出整体动物大多数电生理现象。与整体动物相比，脑片排除了血脑屏障;可在解剖显微镜直视下将电极插到特定部位，不需立体定位;可改变灌流人工脑脊液或气体成分，即可实现对标本环境的控制、调节或改变神经元兴奋性;有较高的机械稳定性，有利于长时间记录观察。八、癫痫的发病机制的实验研究(一)癫痫模型的制备1、癫痫动物模型的建立方法：急性实验性癫痫动物模型：1)电刺激：⑴最大电休克发作实验(MEStest)系常用方法之一，一般采用角膜电极或者耳电极给予5〜6倍惊厥阀值强度的交流电，刺激动物发作。电刺激强度可用电流量(mA)或伏特(V)计算，例如幼年小白鼠可用50mA，大鼠则为150mA，家兔为300mA,猫为400mA。刺激时间为0.2〜0.3s。最小电休克发作阈值实验(MET)：MET多采用大鼠或小鼠，实验开始前，先测定每只动物的最小发作阀值。然后，以60Hz交流电通过角膜或耳电极刺激0.2秒，从最小电流开始，每6〜8小时重复一次，每次增加电流量10%，直至MET建立。低钠电休克发作阈值实验(HEST)：hest是另一种小发作模型，又称为水合电休克发作阈值实验。实验采用体重为200〜300g大鼠，给予大量饮水，引起细胞水肿和低钠，从而降低发作阈值。方法有:①向大鼠腹腔注射5%等渗葡萄糖液(10ml/100g体重)大约4小时后绝大部分动物的电休克阈值下降至44士2.6%。②给予大鼠蒸馏水灌胃(5m1/100g体重)，每间隔1.5小时一次，共4次，效果同葡萄糖。若抗惊厥药物能使上述降低的电体克阈值再恢复，并且使电流增加达56%(以50%计算)时为有效。2)化学药物⑴戊四唑发作实验戊四唑是中枢神经系统兴奋药，可引起阵挛和强直发作。①戊四唑发作阈值实验(MST):常采用大鼠和小鼠皮下注射戊四唑进行，大鼠为75mg/kg，小鼠为85mg/kg，一般可使97%的动物产生阵挛性发作(CD97)。室温为22〜24°C时，绝大部分小鼠在用药后5〜15分发作，大鼠在15〜30分钟内发作。②戊四唑最大发作实验(MMS):MMS的性质近似MES，也是一种大发作模型，常用18〜25g的雄小鼠，实验前给予自由饮食，实验时应禁食，然后由尾静脉迅速注入0.5%戊四唑生理盐水液(38mg/kg),可使97%的小鼠产生强直性发作(CD97)。4秒内注射完，否则不会产生强直性发作。以后肢强直为观察指标，药物如能防止其出现则为有效。印防已毒发作实验(PST)：实验用小鼠，印防已毒5mg/kgS.C、可使97%的动物产生惊厥，给药后15〜30分钟以后发作。每次发作可维持5〜15秒钟，而后反复发作。每次发作维持时间越来越长，发作间期愈来愈短，甚至进入惊撅状态而死亡。多数动物在发作2〜4小时后自行缓解。药物如能防止以上阵挛性发作出现为有效。士的宁发作实验(SST)给小鼠士的宁1.5mg/kgS.C、可使100%的小鼠在给药后15-30分内引起强直性惊厥。发作后约95%以上的动物死亡。以此药能否防止惊厥出现或使其出现时间延长及防止动物死亡为指标。(4)脑室注射谷氨酸或筒箭毒碱发作实验实验用200〜250g大鼠，尤其以声源性发作大鼠为佳。暴露颅骨，找到冠状缝和矢状缝，以两者的交点为标记，在冠状缝后2mm,旁开1〜2mm用微钻头钻一给药小孔，用长4mm的细针头将氯化筒箭毒碱(9pg/只)或谷氨酸钠生理盐水液(6mg/kg)容量为10〜20pl,3〜5分钟内缓慢注入侧脑室。注射后立即引起97%的动物产生奔跑型惊厥(奔跑、旋转、嘶叫、跳跃、翻滚)。以药物能否防止奔跑为指标。(5)其它注射用致痫物质2)慢性癫痫动物模型(1)声源性实验癫痫模型(AS)实验用150〜250g的成年AS敏感大鼠，将其放入直径为30cm，高40cm的圆柱型有机玻璃声源发作仪中，以电铃声(115〜120dB)刺激60秒，可以引起发作，主要表现为奔跑或惊厥(阵挛或强直)，每日下午3〜6点钟以相同条件刺激一次，连续3〜5日，反应恒定后用于实验。大鼠在声刺激约15秒时出现第一次奔跑，然后是约5秒钟的静止期，大约在20〜30秒左有时出现第二次狂奔，数秒后继之出现狂跳、尖叫、全身抽搐、失去平衡倒地等表现。(2)氢氧化铝性实验癫痫模型：主要用恒河猴作实验，在无菌及麻醉条件下开颅。切开硬脑膜，用微量注射器将4%灭菌氢氧化铝乳剂0.1〜0.2m1注射到前脑和后脑的皮质感觉运动区之皮质内，以刚见到一小隆起为宜，注射2〜5点。大约在35〜60天后才出现自发性临床发作。(3)金属钴金属钴引起的慢性癫痫样发作与铝不同，灵长类对其不敏感，故常用猫、大鼠等。将大鼠以戊巴比妥钠(30〜4Omg/kgI、P)麻醉，固定在立体定位仪上，在消毒灭菌的条件下，从前囟开始剪开长约1.5cm的皮肤切口，分离肌肉、骨膜，在距前囟后3mm正中线右侧1〜2mm处，以颅骨钻切除直径为8mm的颅骨，切开硬脑膜，将市售灭菌纯钻粉(200筛孔)约30〜1OOmg置于皮层运动区，安好记录电极，缝合皮肤，每日注射卡那霉素(注射剂)0.5ml/只，连用三日。(4)脑内注射硫酸亚铁剪去家兔头顶的毛发，消毒局麻后，由头顶中央切开约3Omm的皮肤切口，剥离肌肉和骨膜，用酒精棉球擦净颅骨面，以冠状缝和矢状缝交点为起点，剪开13mm,在旁开2mm处

用微钻钻一给药小孔，正好穿过颅骨为好，直径约2mm,安放好记录电极，以牙托粉固定,一周后即可供实验。由给药微孔注入硫酸亚铁（AR）300〜40Opg/kg,约5分钟注射完毕（注射针长7mm）,连续观察动物一般活动和EEG的变化。注射铁剂后，多数动物活动减少、安静。大约在4〜12小时后，85%的动物出现典型阵挛发作，甚至进入连续发作状态而死亡。（5） 脑内注射青霉素这是一种常用的致痫方法。动物在戊巴比妥浅麻醉下，手术暴露其大脑皮质，用微量注射器将青霉素400〜5OOU（浓度为4万U/ml）注入大脑皮质外侧区内。通常在20〜30分钟后脑电图上即出现局灶性棘波或面及肢体呈抽搐发作。出现的症状及程度随用药剂量和注射部位而异。将5〜10p1（200〜1000U）的青霉素注射到猴、猫和大鼠的大脑皮质下结构（海马杏仁核等）也可形成慢性癫痫实验动物模型。（6） 毛果芸香碱制备癫痫模型的研究大鼠癫痫模型的制备：选择Wistar大鼠，体重120〜150g，雌雄不限,Pilocarpine.HCL（德国GMBH公司生产）纯品加蒸馏水配制成100mg/ml浓度溶液。给予Wistar大鼠腹腔注射Pilocarpine.HCL（350mg/kg）。观察其行为变化及诱发场电位痫样放电。家兔癫痫模型的制备：海马内注射致痫：在安置脑电电极手术的同时，在立体定位仪引导下，按Jasper脑立体定位图谱在海马区埋置一直径为1mm的金属导药管，用牙托粉将导药管和各电极固定。恢复一周后制备模型。将Pilocarpine.HCL配以蒸馏水制成1g/ml溶液，按6-10pl/kg沿导药管缓慢注入海马区，给药后观察动物的躯体症状，然后用脑电图机记录脑电变化。7） 点燃效应（kindlingeffect,KE）以一定强度的刺激（阈下）和间隔时间刺激动物大脑的一定部位，开始刺激时并无临床或EEG的异常变化，随着刺激的积累，反应也逐渐加强，直至产生全身阵挛性发作，这种现象称KE（KindliyeffeCt，KE）。一且被点燃而出现癫痫，则病程可持续很久。海马或杏仁核刺激强度:大白鼠50〜40OpA,猫100〜50OpA,猴和狒狒200〜400pA。不能过强，过强不能加速形成KE。刺激时间间隔以每24小时刺激一次最好，8小时刺激一次形成较慢，10分钟一次不能形成。激频率25、60、62.5和15OHz的效果相同，以6OHz为佳，刺激持续时间1—60秒。8） 冷冻法：1.脑膜冷冻术2.皮质冷冻术癫痫的脑片诱发场电位研究理气开郁药对致痫大鼠海马脑片CA1区诱发场电位的影响材料与方法材料 动物健康Wistar大鼠50只，体重120-150克，雌雄不限。由天津市劳动卫生研究所实验动物研究中心提供。 人工脑脊液（artificialcerebrospinalfluid,ACSF）成分（单位：mmol.L-1）：NaClKH2PO4KCl124,1.2,NaClKH2PO4KCl124,1.2,3.3,NaHCO3 26,MgC12・6H2O 2.4,CaCl22.5,C6H12O6•H2O 10。PH值为7.35。3 药品：1） 盐酸毛果芸香碱（Pilocarpine・HCL,来自GMBH试剂公司），实验时，以蒸馏水配成浓度为100mg/ml的溶液，PH值调为7.4。2） 中药试剂：由南开医院急腹症研究所药物研究室采用现代医学方法提取并制成1：1（1g/ml）针剂（1g成药制成1ml提取液）。 单孔脑片实验装置： 电极：记录电极为自制玻璃微电极，内充生理盐水，阻抗为4〜10M口。刺激电极是由直径为32Dm带有绝缘层的不锈钢制成的双极电极。方法癫痫模型制备：Wistar大鼠（由天津市劳动卫生研究所提供），雌雄不限，体重120〜150g，腹腔注射盐酸毛果芸香碱350mg/kg体重，观察癫痫症状，选取癫痫大发作大鼠饲养一周后进行实验。2．海马脑片制备：实验时，将大鼠在清醒状态下迅速断头，剪开头皮和颅骨，迅速取脑置于4oC的人工脑脊液中持续给95%02和5%CO2饱和，洗净血液，待脑组织冷却后迅速将脑移入用ACSF预先湿润的滤纸上，切去延髓，用刀片沿正中线垂直切下，将脑分为左右两半。迅速剥离出海马，放在脑片台上。从脑室面上可看出海马槽纤维方向，沿该纤维平行方向人工作350〜400“m厚的海马切片，每切一片用小毛刷将脑片移至预先通以95%O2和5%CO2混合气的室温的ACSF中（PH为7.35），室温孵育1〜2小时。从动物断头至脑片全部切完，一般在2〜3min内完成。安放电极：脑片孵育1〜2小时后，用广口吸管将脑片移至内浴槽的擦镜纸上。灌流液为人工脑脊液，以95%O2和5%CO2饱和，灌流速率为1.5ml/min。保持脑片上方有一薄层液体。在解剖显微镜观察下，由微操纵器将充满生理盐水的玻璃微电极（即记录电极）插入海马CA1区锥体细胞层，以引导诱发的场电位。刺激电极则置于CA1区辐射层，以激活CA1区锥体细胞的传入纤维（即CA3区锥体细胞轴突所组成的Schaffer侧支）。海马脑片刺激、给药、记录：刺激由电刺激器输出。刺激参数为：波宽为0.1ms，电压为8V，刺激频率为1Hz。实验过程中，首先记录正常的诱发场电位，待其稳定后，再进行药物实验。给药方法采用脑片旁滴注，在灌流浴槽内脑片旁轻轻滴加中药提取液，对照组则滴加生理盐水，滴量均为20口1（每滴5口1，分四次滴），并分别记录在滴药前、后的场电位图形。本实验设计了两组对照，一组为未致痫的正常大鼠；另一组为致痫大鼠海马脑片滴加生理盐水组。统计学处理：采用SPSS统计软件，对空白对照组与注射盐酸毛果芸香碱组的大鼠海马脑片诱发场电位的比较采用成组T检验；对致痫大鼠给中药滴液前、后诱发场电位幅度值采用配对T检

验，口=0.05,采用双侧T检验。结果一、 盐酸毛果芸香碱对海马脑片CA1诱发场电位的影响：本实验分别记录了10例正常大鼠海马脑片及10例盐酸毛果芸香碱致痫后的大鼠海马脑片CA1区诱发场电位，结果采用双侧t检验，pD0.01，具有非常显著性。显示盐酸毛果芸香碱使海马脑片CA1区诱发场电位的幅度增大。二、 生理盐水对致痫海马脑片CA1区诱发场电位的影响：在10例海马脑片的诱发场电位的记录中，滴注生理盐水前后，其幅度(amplitude)无明显变化，PD0.05，无统计显著性。这说明，脑片表面微量滴注生理盐水后，对诱发场电位无明显影响。abeforephysiologicalsalinebafterphysiologicalsaline三、 柴胡对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：本实验观察了15例海马脑片在滴加柴胡提取液前、后，其诱发场电位的变化。实验结果见表1。1g/ml浓度的柴胡使致痫海马脑片诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低20.41%,平均6.86分钟恢复，经统计学检验，pDO.Ol，具有非常显著意义。cbeforebupleurumrootdafterbupleurumroot四、 郁金对海马脑片CA1区诱发场电位的影响：实验观察了10例海马脑片在滴加郁金提取液前、后，其诱发场电位的变化。1g/m1浓度的郁金使海马脑片诱发场电位幅度明显下降，幅度平均降低26.44%，平均9.7分钟恢复，经