临床病理知识及病理学常用新技术

大纲要求掌握临床病理检查的种类及目的；掌握临床病理检查的的流程及注意事项；.熟悉病理学常用新技术的原理及应用基本内容.基本概念活体组织检查(biopsy)：简称“活检”从活体身上的病变或可疑病变处采取小块组织作病理检查，以明确病变的性质。冰冻切片快速诊断(frozensextion)：用不经固定的新鲜标本，快速冷冻至T8度以下，进行切片、HE染色，一般在20〜30min内完成定性诊断。细胞学检查(cytology)：通过对患者病变部位脱落、刮取和穿刺抽取的细胞进行病理形态学的观察，并作出定性诊断。目前主要用于肿瘤的诊断，判断有无肿瘤细胞，是良性或恶性。也用于某些内部器官炎症性疾病的诊断和激素水平的判定等。苏木素一伊红染色(HE染色)：被称为常规染色方法，能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学。而且HE切片可较长时间保存，因而是生物学和医学领域中最基本也是应用最广泛的染色方法。染色结果：细胞核呈蓝色，胞质、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和微生物也可染成蓝色或蓝紫色组织化学技术(histochemistrytechnique)：又称特殊染色，其基本原理是利用病变组织内某些物质的化学特性，用特殊染料将它们显示出来，从而协助鉴别HE染片内不易区别的病变或物质。免疫组织化学(immunohistochemistry)：根据抗原抗体特异性结合的免疫学原理，将预先制备的特异性抗体加在组织切片上，使之与相应的抗原结合。特异性抗体通过某种方式连结辣根过氧化酶或碱性磷酸酶。显色剂在酶的作用下氧化沉淀，将抗体所检测的抗原在组织切片上显示出来。生物芯片技术(biochiptechnique):是将大量具有生物识别功能的分子或生物样品有序的点阵排列在支持物上并与标记的检测分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的新技术。&基因芯片(genechip):是指采用原位合成或显微打印方法，将大量DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、高效的检测。组织芯片(tissuechip)：又称组织微列阵(tissuemicroarray),是将数十个、数百个乃至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体(通常是载玻片)而成的微缩组织片。荧光原位分子杂交染色体分析技术(FISH)：是应用荧光标记物标记已知碱基序列的核酸分子作为探针，与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体，从而对组织、细胞中待测的核酸进行定性、定位和相对定量分析的一种研究方法。应用不同的探针可显示某一种物种的全部基因、某一染色体染色片段及单拷贝序列，结合共聚焦激光显微镜可对间期核及染色体进行三维结构研究。比较基因组杂交技术(CGH)：基本原理用不同的荧光染料分别标记正常人基因组DNA与肿瘤细胞DNA，然后与正常人中期染色体杂交，通过检测染色体上两种荧光(红、绿)的相对强度比率，两种DNA相异部分会显出颜色偏移，可计算出DNA的缺失与放大，从而了解肿瘤组织DNA拷贝数的改变，并能同时在染色体上定位。流式细胞技术(FCM)：是一种单细胞定量分析和分选的技术，可对单个细胞逐个地进行高速准确的定量分析和分类。原代培养(primaryculture)：由体内直接取出组织或细胞进行培养。传代培养（subculture）:把细胞自原代培养的培养瓶中分离、稀释，而移至另一新的培养瓶中的操作程序，即为传代或再培养，以便持续培养，得到大量同种细胞或建成细胞株，维持细胞种延续。蛋白质组（proteome）:指基因组表达的全部蛋白质及其存在方式。蛋白质组学（proteomics）：蛋白质组学旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式。其内容包括鉴定蛋白质的表达、存在方式（修饰方式）、结构、功能和相互作用等。（二） .临床病理基本知识1活体组织检查要注意：①取准病灶；②不能过分挤压组织；③避免送检坏死组织；④活检不能用电灼取材。2活检的分类及目的：活检分三类：⑴术前活检：在治疗性手术前或其它治疗（如放疗或化疗）前所作的活检。常规甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，需3〜7天才能发报告。⑵术中活检：在治疗性手术或探查性手术进行中所作的活检。用不固定的新鲜标本快速冷冻切片，20〜30min内完成定性诊断，以便指导手术的进行。其准确率仅在80%左右，不及石蜡切片。其目的：①确定病变的性质，以便确定手术方案；②了解病变的情况，以便确定手术的范围；③确定所取的标本是否含有预定的组织器官或病变。⑶术后活检：对治疗性手术切除的组织器官进行较全面的病理学检查。常规甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，需3〜7天才能发报告。3淋巴结活检要注意：①有多组淋巴结肿大，避免取腹股沟淋巴结，因为这组淋巴结的慢性非特异性炎症和纤维化最常见，形态背景复杂，不利于特异性病变的诊断；②同一个区域有多个淋巴结肿大，避免取最小的淋巴结；③要将淋巴结完整摘除，切忌将其切成多个不规则碎块；④淋巴结用10%福尔马林固定，勿用酒精；⑤固定前要将淋巴结切开。4取材原则：①组织块的厚度0.2〜0.3cm,面积1〜1.5cm2；用于免疫组织化学的以1cmx1cmx0.2cm为好，以免浪费试剂；②对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细条，较长时可卷成同心圆状；③骨组织需先经过脱钙处理；④组织块如有血液、粘液、粪便等污物，先用水冲洗干净再取材；⑤肿瘤标本取材，应选肿瘤主体、肿瘤邻近组织及肿瘤两端的切缘（若管道器官）分别取材，应注意切取肿瘤与正常组织交界处；⑥新鲜组织需保存时，应用锡箔纸包好，迅速过液氮，于一70。保存。标本固定：⑴.常用固定液及配制方法：1）单纯固定液：①甲醛，也称福尔马林，一般作为固定液使用的是10%的福尔马林。配制方法为10ml的原液加90ml的水，此液中甲醛的实际浓度为4%。②中性甲醛，是以pH7.2〜7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的甲醛溶液。配制方法与浓度见单纯固定液甲醛项下。③酒精，作为固定剂使用以80%〜95%浓度为好。酒精作为固定剂不利于染色质的固定，要证明细胞内的脂肪、类脂质及色素存在的标本不能用酒精固定。混合固定液：①A-F液：②Bouin液：③Zenker液：④Carnoy液⑵.特殊检查须用相应的固定液：电镜标本用4%戊二醛固定，糖原染色用无水酒精或carnoy固定液等。⑶.细胞涂片、刷片应在数分钟内固定于95%酒精。⑷.固定液的量应为标本体积的4倍以上。肿瘤和器官的切开方法：⑴肿块：沿最大径线切第一刀，勿完全切断，以保持标本的完整性。若肿块较大，可相间1cm作多个平行切面。⑵甲状腺：沿标本的最大直径作第一个切面。⑶肺叶：通过病灶或肿块作冠状切面。⑷食管：沿病灶对侧纵行剪开管壁。若整个周径为病变累及，则沿最薄处剪开。⑸胃：沿胃大弯自贲门侧剪开，因为病变多位于胃小弯。若病变位于胃大弯，则沿胃小弯剪开。⑹肠：沿病灶对侧剪开肠壁。若不能确定病灶位置，则沿肠系膜附着缘剪开。⑺子宫：沿宫颈前正中线切至宫体中心部，再向两侧输卵管口作Y字形切开。⑻膀胱：自膀胱颈沿前正中线剪开至膀胱体中央，再向膀胱底两侧作T字形剪开。⑼肾：通过肾门作冠状切面。脾：通过脾门与脾长轴垂直切第一刀，然后相距1－2cm作多个平行切面。乳腺：将皮面向下，通过肿块中点与乳头连线切第一刀。若肿块较大，可相距1cm作多个平行切面。勿切断皮肤，以保持标本的完整性。淋巴结：通过淋巴结门作冠状切面。若淋巴结最大径线超过2cm，则沿着最大径线垂直方向在该径线中点切第一刀，必要时相距0.5cm平行切第二刀。勿完全切断，以保持标本的完整性。肝：沿病灶最大径线切第一刀。若病灶较大，则相距1〜2cm作多个平行切面。勿完全切断，以保持标本的完整性。(14)胰腺：无论标本大小如何，均沿胰腺纵轴的垂直方向作横切面。常用特殊染色方法及应用：⑴结缔组织染色：胶原纤维染色：Masson三色染色法染胶原纤维，结果是胶原纤维呈蓝色，肌纤维和红细胞呈红色，细胞核为蓝褐色。其次也可VG染色，纤维组织呈红色，肌纤维呈黄色。网状纤维染色用氨性银溶液浸染能使网状纤维变成黑色，又称为嗜银染色。其在肿瘤病理诊断中有鉴别诊断的作用：①区别上皮性和非上皮性肿瘤，在恶性上皮性肿瘤的癌巢周围可见网状纤维，在肉瘤则是银染阳性的物质分隔单个瘤细胞；②判断原位癌与早期浸润癌，前者基地膜完整，后者基底膜断裂崩解。弹力纤维染色常用于皮肤组织的增殖变化、老年性肺气肿显示纤维断裂、变性或萎缩、高血压病时小动脉管壁弹力纤维的异常增生等，对弹力纤维瘤的诊断有决定作用。(2)糖类染色：糖原染色组织需新鲜用Carnoy液或无水乙醇固定。常规用PAS方法染色。在明确细胞内空泡的性质、糖原贮积病的诊断及某些透明细胞肿瘤的鉴别诊断有重要作用。粘液物质染色可用爱先蓝(AB染色)和PAS方法染色，主要用于粘液性上皮肿瘤的鉴别和证明细胞内是否含有粘液，如鉴别粘液瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、胃肠道低分化腺癌等。粘液物质，AB染色呈蓝色，PAS染色呈紫红色颗粒。(3)组织中脂类的显示法脂质的理想固定液是甲醛钙或中性缓冲甲醛，脂肪染色用冰冻切片或炭蜡包埋切片。常用苏丹III染色。其应用主要为鉴别细胞内空泡的性质，对肾透明细胞癌与肾上腺肿瘤、卵巢纤维瘤与卵泡膜细胞瘤、皮脂腺癌与鳞状细胞癌的鉴别诊断有意义。但对脂肪肉瘤的诊断无明显价值。4）用刚果红或甲基紫显示淀粉样物质；普鲁士蓝反应可显示含铁的色素。冰冻切片检查的原则：临床需根据病理报告来决定手术的方式或范围时才送标本作冰冻检查。剖腹探查仅仅为了活检时，不能在取出小块组织后就匆忙关腹，须待冰冻报告见到病变组织才能关腹。9免疫组织化学检测的作用：①显示组织切片内是否存在某种抗原；②显示该抗原存在于组织或细胞什么部位；③在同等染色条件下，通过比较阳性细胞的数量或强度，可作半定量分析。10电子显微镜技术：电子显微镜简称电镜，包括透射式电镜和扫描式电镜两种基本类型。透射式电镜主要用于观察细胞内部的细微结构，检查组织要求超薄切片，即切片的厚度应在50nm左右，不能超过lOOnm。扫描电镜不需要超薄切片。透射电镜技术可以观察细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化，在病理诊断中主要用于肾脏的细针穿刺活检标本，来进行肾小球肾炎的分型和肿瘤细胞分化的方向及细胞器的变化。扫描电镜用于观察细胞表面的细微结构和相互关系。（三）.病理常用新技术1.激光共聚焦扫描显微镜（Confocallaserscanningmicroscopy）可以从组织细胞水平直接进入亚细胞水平观察，且可利用计算机及图像处理系统对组织、细胞及亚细胞结构进行断层扫描，三维立体空间结构再现，将形态学研究从平面图像水平提高到三维立体水平，图像清晰鲜艳；还可在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示活体细胞内的代谢变化等。2•组织芯片的特点：①体积小、信息含量大，可根据不同需要进行组合和设计；②既可以用于形态学观察、也可用于免疫组织化学染色、原位杂交、荧光原位分子杂交（FISH）等原位组织细胞学观察和研究，具有高效、快速、低消耗、良好的自身内对照和可比性强；③可批量制作组织芯片及其实验结果的计算机分析。显微切割技术：目前主要使用的是液压控制手动显微切割（显微操作仪）和激光捕获显微切割。用于切割的材料可以是冰冻组织切片、石蜡切片、细胞涂片、细胞铺片、细胞爬片等显微切割的应用：①细胞基因突变及微卫星变异的研究；②细胞基因拷贝数的变化和甲基化水平的检测；③定量RT—PCR；④比较基因组杂交；⑤cDNA微阵列（芯片）。FISH的应用：①基因定位与基因制图；②基因诊断；③间期细胞遗传学FISH在肿瘤生物学中的应用：①肿瘤细胞遗传学；②基因定位；③病毒基因插入基因组部分的检测；④基因的扩增与缺失。5•蛋白质组（proteome）技术的组成、蛋白质组学的研究领域的组成及蛋白质组学在肿瘤研究中的应用：（1）蛋白质组技术主要由蛋白质分离、蛋白质鉴定和生物信息学三部分组成。①用于蛋白质分离技术方面的有双向凝胶电泳（2DE）、双向“高效”柱层析等。②用于蛋白质鉴定的技术如质谱技术、凝胶图像分析、蛋白质和多肽的N端、C端测序及氨基酸组成分析等。③用于分析大量数据的生物工程信息学等。其中双向凝胶电泳（twodimensionalpolyacrylamidegels,2—DPAGE）和质谱技术（massspectrometry,MS）是蛋白质组学研究最重要的核心技术。（2） 蛋白质组学的研究领域包括以下3个方面：①蛋白质大规模鉴定和转录后修饰的微特征研究;②差异显示蛋白质组学,即对肿瘤等疾病有广泛应用前景的蛋白质表达水平的比较：③应用质谱技术和酵母双杂交体系对蛋白质间相互作用的研究。（3） 蛋白质组学在肿瘤研究中的应用：①寻找肿瘤特异标志物蛋白，建立并完善肿瘤蛋白质组数据库；②分子通路信号转导机制研究:蛋白质组技术也给细胞信号转导通路的研究带来新的思路；③无创伤与早期诊断；④分类鉴定:通过蛋白质的变化对肿瘤进行分类也是蛋白质组学的重要用途之一；⑤判断预后；⑥选择药物靶标。典型试题举例及分析（一） 选择题以下说法正确的是A沿食管病灶同侧纵行剪开管壁。若整个周径为病变累及，则沿最厚处剪开。B若病变位于胃大弯，则取材时沿胃小弯剪开。C对送检的肠组织取材，若不能确定病灶位置，则沿肠系膜附着缘的对侧剪开。D肝癌标本，沿病灶最小径线切第一刀，若病灶较大，则相距1〜2cm作多个平行切面。E以上都不是（答案：B）分析：对于食管的病变应沿病灶对侧纵行剪开管壁。若整个周径为病变累及，则沿最薄处剪开；对于肠道病变沿病灶对侧剪开肠壁，若不能确定病灶位置，则沿肠系膜附着缘剪开；对于肝脏病变沿病灶最大径线切第一刀，若病灶较大，则相距1〜2cm作多个平行切面。2．胃脏标本正确的取材方法是：A．首先沿胃小弯剪开，然后观察病灶的位置取材。沿胃脏最大长径间隔1—2cm平行切开，在病灶处取材。C．一般沿胃大弯剪开，然后观察病灶的位置取材沿着胃脏的幽门或贲门随机剪开，找到病灶，然后随机取材。以上都不是（答案C）分析：因为胃的病变多位于胃小弯，所以取材时多沿胃大弯自贲门侧剪开，。若确定病变位于胃大弯，则沿胃小弯剪开。3.肝脏肿瘤标本正确的取材方法是首先分别分离左右肝叶然后随机在肿瘤中央柔软处取材。沿肝脏最大长径间隔1—2cm平行切开，在肿瘤与非肿瘤交界处取材。沿肝脏横径随机切开，将病灶随机切成多个不规则碎块，任选取其中一块即可。细针穿刺是最好的取材方法。以上都不是。（答案B）分析：肝脏病变取材原则是沿病灶最大径线切第一刀。若病灶较大，则相距1〜2cm作多个平行切面。而肿瘤标本取材原则，应选肿瘤主体、肿瘤邻近组织及肿瘤两端的切缘（若管道器官）分别取材，应注意切取肿瘤与正常组织交界处。细针穿刺穿刺到的是非常少的一点组织，不易取到病变组织，可能会导致漏诊。所以B是正确答案。用电镜检查的标本用哪种固定液A10％福尔马林B70％酒精C95％酒精D4％戊二醛Ecarnoy固定液（答案：D）分析：10%福尔马林、80%〜95%浓度是单纯固定液，它们都可以用于固定大多数做常规切片的组织，但酒精作为固定剂不利于染色质的固定，要证明细胞内的脂肪、类脂质及色素存在的标本不能用酒精固定；95%酒精用于固定细胞涂片、刷片；70%酒精不用于固定标本；carnoy固定液是混合固定液，常用于固定要作糖原染色的标本；备选答案中只有D4%戊二醛用于固定做电镜检查的标本。组织块取材的厚度以多厚为宜（答案：A）A0.2〜0.3cmB1〜1.5cmC2〜3cmD随意E按需要（答案：A）分析：取材时组织块的厚度0.2〜0.3cm,面积1〜1.5cm2较好，太厚太大都不利于脱水包埋，太小太薄则可能会漏取病灶，观察不全面；用于免疫组织化学的以1cmx1cmx0.2cm为好，以免浪费试剂。以下说法正确的是A用于免疫组织化学的切片越大越好，以便观察B对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等取材应剪成细条C即使组织块有血液等污物也不应用水冲洗，以免组织细胞特有的抗原丢失D肿瘤标本取材，主要选肿瘤主体、肿瘤邻近组织分别取材，不用取肿瘤两端的切缘E以上都不是（答案：B）分析：用于免疫组织化学的以1cmx1cmx0.2cm为好，太大不好脱水包埋，也会浪费试剂；对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细条，较长时可卷成同心圆状；取材时组织块如有血液、粘液、粪便等污物，先用水冲洗干净再取材；肿瘤标本取材，应选肿瘤主体、肿瘤邻近组织及肿瘤两端的切缘（若管道器官）分别取材，应注意切取肿瘤与正常组织交界处；Masson三色染色法用于染何种物质A胶原纤维B网状纤维C淀粉样物质D脂肪E以上都不是（答案：A）分析：Masson三色染色法用于染胶原纤维；嗜银染色染网状纤维；刚果红或甲基紫用于显示淀粉样物质；苏丹III染色染脂肪。以下哪种特殊染色有助于鉴别卵巢纤维瘤与卵泡膜细胞瘤AMasson三色染色法B嗜银染色CPAS方法染色D苏丹III染色E刚果红染色（答案：D）分析：卵泡膜细胞瘤内有黄色类脂区，瘤细胞内或瘤细胞间有类脂小滴，苏丹III染色这些类脂小滴呈橘红色；而卵巢纤维瘤则不会出现这种情况。脂肪染色的标本应如何处理A无水乙醇固定B用冰冻切片或炭蜡包埋切片C10%的福尔马林D4%戊二醛E75％酒精固定（答案B）分析：脂质的理想固定液是甲醛钙或中性缓冲甲醛，脂肪染色用冰冻切片或炭蜡包埋切片；酒精不能用于固定要证明细胞内的脂肪、类脂质及色素存在的标本；10％的福尔马林用于固定常规HE切片的标本；4％戊二醛用于固定用于电镜检查的标本。用哪种特殊染色可以显示淀粉样物质A苏丹III染色B嗜银染色C普鲁士蓝反应D刚果红或甲基紫EPAS染色（答案D）分析：苏丹III染色染脂肪；嗜银染色显示网状纤维；普鲁士蓝反应显示含铁的色素；刚果红或甲基紫显示淀粉样物质；PAS染色显示糖原。鼻咽癌组织应选哪种标记ACKBVimentinCLCADCgAECD68（答案A）分析：CK为上皮性标记物，一般癌细胞会呈阳性标记：Vimentin为间叶组织标记物，一般肉瘤的瘤细胞会呈阳性：：LCA标记淋巴细胞，可用于淋巴瘤的诊断、鉴别；CgA为神经内分泌标记物，可用于神经内分泌肿瘤的辅助诊断、鉴别：CD68为组织细胞标记物，可用于与组织细胞来源相关的疾病的辅助诊断，如恶纤组等。AFP为下列哪种病的标记物A黑色素细胞瘤B乳腺癌C肝细胞癌D宫内膜癌E鼻咽癌（答案C）分析：肝细胞癌和内胚窦瘤的标记物为AFP；黑色素细胞的标记物为HMB45、S-100；乳腺癌和宫内膜癌的分化标记物为ER、PR。下列哪组选项可以区别癌和肉瘤ACK和EMABCK和VimentinCCD68和VimentinDEMA和CgAELCA和GFAP（答案B）分析：上皮性标记物：CK、EMA、CEA；间叶组织标记物：Vimentin、CD68（组织细胞标记物）、LCA（淋巴细胞标记物）；CgA为神经内分泌标记物；GFAP为神经组织标记物。下列哪一项不是上皮性标记物ACKBEMACCEADmac387ECK19（答案D）分析：CK、EMA、CEA、CK19均为上皮性标记物；mac387为组织细胞标记物。现在最常用的免疫组织化学的方法是ASP法BABC法CLSAB法DSABC法EEnVision法（答案E）分析：EnVision法是一高敏感性显色系统，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育，由于不再有二抗与三抗通过生物素结合，故整个系统不受内源性生物素的干扰，避免了非特异性阳性，减低了背景，这是与SP、ABC、LSAB、SABC相比最大的优点。有关免疫组织化学应用下列哪一项是正确的A免疫组织化学技术是鉴别良恶性肿瘤的有效方法之一免疫组织化学技术应用对肿瘤的预后没有帮助免疫组织化学技术是帮助区分组织学来源的有效方法之一免疫组织化学技术还可以确定肿瘤的临床分期以上都不是（答案C）分析：免疫组织化学主要检测细胞内或细胞间的正常或异常物质，以确定某些肿瘤的组织发生及类型，以及估价免疫损伤性疾病的性质、发病机制和预后。肿瘤的临床分期主要是根据TMN法：原位肿瘤大小、有无远处转移、有无淋巴结转移。免疫组织化学不能确定肿瘤的临床分期。透射式电镜要求切片的厚度A30－60nmB130－160nmC200nm以上D没有严格的要求E越薄越好（答案A）分析：透射式电镜主要用于观察细胞内部的细微结构，检查组织要求超薄切片，即切片的厚度应在50nm左右，不能超过100nm。以下说法不正确的是A组织芯片体积小、信息含量大，可根据不同需要进行组合和设计B蛋白质组技术主要由蛋白质分离、蛋白质鉴定和生物信息学三部分组成C显微切割技术用于切割的材料可以是冰冻组织切片、细胞涂片、细胞铺片、细胞爬片等，但不能是石蜡切片D扫描电镜不需要超薄切片，操作较透射电镜简单E激光共聚焦扫描显微镜可在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示活体细胞内的代谢变化（答案C）分析：显微切割技术用于切割的材料可以是冰冻组织切片、细胞涂片、细胞铺片、细胞爬片等，也可以是石蜡切片。以下哪项不是Confocallaserscanningmicroscopy的特点A可观察培养细胞形态结构，但不能直接显示活体细胞内的代谢变化B可在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示活体细胞内的代谢变化C形态学研究从平面图像水平提高到三维立体水平，图像清晰鲜艳D可利用计算机及图像处理系统对组织、细胞及亚细胞结构进行断层扫描，再现三维立体空间结构E以上皆不是（答案A）分析：Confocallaserscanningmicroscopy可在观察培养细胞形态结构的同时，直接显示活体细胞内的代谢变化等。FISH在肿瘤生物学中的应用A肿瘤细胞遗传学B基因定位C病毒基因插入基因组部分的检测D基因的扩增与缺失E以上都是（答案E）分析：FISH在肿瘤生物学中的应用包括：①肿瘤细胞遗传学；②基因定位；③病毒基因插入基因组部分的检测；④基因的扩增与缺失。（二）名词解释：活体组织检查冰冻切片快速诊断3比较基因组杂交技术（CGH）HE染色基因芯片6荧光原位分子杂交染色体分析技术（FISH）蛋白质组学细胞学检查名词解释答案参考基本概念（三）简答题简述淋巴结活检要注意的事项。进行冰冻切片检查的原则。简述组织取材的一般原则。最常用于固定病理活检标本的是哪种固定液？如何配制？网状纤维染色即嗜银染色在肿瘤病理诊断中的作用。简述在免疫组化染色前为何要对组织切片进行抗原修复。蛋白质组学在肿瘤研究中有何应用？简述免疫组织化学的作用。简述FISH的基本原理及其在肿瘤生物中的应用。简述组织芯片的特点。答案及分析：1•①有多组淋巴结肿大，避免取腹股沟淋巴结，因为这组淋巴结的慢性非特异性炎症和纤维化最常见，形态背景复杂，不利于特异性病变的诊断；②同一个区域有多个淋巴结肿大，避免取最小的淋巴结；③要将淋巴结完整摘除，切忌将其切成多个不规则碎块;④淋巴结用10%福尔马林固定，勿用酒精；⑤固定前要将淋巴结切开。临床需根据病理报告来决定手术的方式或范围时才送标本作冰冻检查。剖腹探查仅仅为了活检时，不能在取出小块组织后就匆忙关腹，须待冰冻报告见到病变组织才能关腹。①组织块的厚度0.2~0.3cm,面积1~1.5cm2；用于免疫组织化学的以1cmx1cmx0.2cm为好，以免浪费试剂；②对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细条，较长时可卷成同心圆状；③骨组织需先经过脱钙处理；④组织块如有血液、粘液、粪便等污物，先用水冲洗干净再取材；⑤肿瘤标本取材，应选肿瘤主体、肿瘤邻近组织及肿瘤两端的切缘分别取材，应注意切取肿瘤与正常组织交界处；⑥新鲜组织需保存时，应用锡箔纸包好，迅速过液氮，于－70O保存。答案：10％福尔马林；配制：1体积市售40％福尔马林加9体积的缓冲液或蒸馏水。①区别上皮性和非上皮性肿瘤，在恶性上皮性肿瘤的癌巢周围可见网状纤维，在肉瘤则是银染阳性的物质分隔单个瘤细胞；②判断原位癌与早期浸润癌，前者基底膜完整，后者基底膜断裂崩解。经甲醛液固定、石蜡包埋的组织，其组织中的抗原蛋白与甲醛产生交联，使组织中抗原的决定簇被封闭，抗体难以和抗原充分结合。因此需要对组织切片进行抗原修复，目的是打开组织抗原蛋白与甲醛的交联，暴露组织抗原，以提高组织抗原的检出率。①寻找肿瘤特异标志物蛋白，建立并完善肿瘤蛋白质组数据库；②分子通路信号转导机制研究:蛋白质组技术也给细胞信号转导通路的研究带来新的思路；③无创伤与早期诊断。④分类鉴定:通过蛋白质的变化对肿瘤进行分类也是蛋白质组学的重要用途之一；⑤判断预后；⑥选择药物靶标。&①显示组织切片内是否存在某种抗原；②显示该抗原存在于组织或细胞的部位；③在同等染色条件下，通过比较阳性细胞的数量或强度，可作半定量分析。原