土壤微生物综合实验报告

广州大学综合设计性实验报告课程：微生物实验------------学资学习-------供考研资料------

实验课题：土壤中产粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定学院：生命科学学院姓名：徐嘉宽学号：班级：生技142小组成员：要本次实验通采用5点采方法在校园采取处土壤样，运用梯度稀释的方法分离培养出不同生形态的细，镜检后选几个菌落进行纯培养，用淀粉培基鉴定其否产淀粉酶，通单染色、孢染色、兰氏染色确定菌株的形态及革兰氏阳性，再过各株菌株其中株为蜡状孢杆菌。2种生化验鉴定菌株的特性，确了我们所离的．------------学资学习-------供考研资料------

的1.掌握从土壤等复杂的微生物环境中分离纯化技术2.掌握培养基的配置方法及常用的微生物培养方法3.掌握常用的微生物形态学鉴定方法、生理生化鉴定方法4.了解微生物的16SrRNA序列鉴定方法、免疫学鉴定方法5.掌握淀粉酶活力测定的原理及方法6.掌握菌种保藏技术7.培养数据统计、分析能力8.培养团队协作精神，增强沟通合作能力9.与其他小组交流合作、数据共享，进行更深入的探讨10.学会查找、收集、整理资料理芽孢杆菌(BaciUus)是一类好氧或兼性厌氧、产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。这类细菌多数为腐生菌,主要分布于土壤、植物体表面及水体中,由于它们能够产生对热、紫外线、电磁辖射和某些化学药品有很强抗性的芽孢因此能忍受多种不良环境。土壤中蕴含着丰富的微生物资源,芽孢杆菌是其中具有重要应用价值的微生物类群。有些菌种可以分泌多种酶,可应用于工业生产有些菌种能产生对昆虫毒性较强的蛋白,可生产微生物农药;有些菌种可作为多种分泌蛋白基因表达受体,在基因工程领域中有较高的应用价值。土壤具有微生物进行生长繁殖和生命活动中所需的各种条件，是微生物生活最适宜的环境。其中的微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10cm～30cm的土层中菌数最多，随土层加深，菌的数量减少。淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称,是用于酿酒、食品、医药、纺织、饲料等具有商业价值的重要酶类。广州大学城四面环江，地处南亚热带,其气候属南亚热带典型的季风海洋气候。芽孢杆菌资源非常丰富。本方案在广州大学城预定区域釆集土壤样品采用纯培养的方法,分离获得芽孢杆菌。对菌株进行形态学观察及生理生化分析以挑选出可产淀粉酶的菌株------------学资学习-------供考研资料------

四实验材料试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、葡萄糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水等工具:取样：铁锹、尺子、塑料袋等培养：接种环（针培养皿、试管、试管架、锥形瓶、塞子、标签纸、打火机、酒精灯、报纸、橡皮筋、无菌棉签、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、精密pH试纸、吸水纸、培养基平板，无菌水，试管架，酒精灯，酒精瓶，记号笔，废物缸，牙签等；其他工具：无菌操作台、恒温振荡培养箱、恒温培养箱配方：1)牛肉膏蛋白胨培养基：营养琼脂3.3%、蒸馏水100mL、pH7.2-7.4。2)营养肉汤:牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl0.5%、蒸馏水100ml、pH（5.7、7.2→对照3)半固体培养基(运动性试验）:琼脂0.5%、牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl0.5%、蒸馏水100ml、pH7.2-7.4。4)酪素水解培养基（酪素水解试验):取5g脱脂奶粉与一号三角瓶中，加入50ml蒸馏水，110℃灭菌。另称1.5g琼脂置于含50mL蒸馏水的二号三角瓶中,120灭菌,待冷至45-50°C时,将两液混匀倒成平板,即为牛奶平板。将平板倒置过夜使表面水分干燥。5)淀粉水解培养基:营养琼脂3.3%、可溶性淀粉2%、蒸馏水100ml、PH7.2-7.46)卵黄反应培养基：无菌条件下去卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取5ml加入到融化的约50-55℃的100ml的营养琼脂中（内含1g葡萄糖)，混匀后倒入培养皿内。制成的卵黄平板过夜后即可使用。7)硝酸盐还原实验培养基:胰蛋白胨1.0%,酵母浸粉0.5%,NaCl1.0%,KN030.1%,蒸馏水1OOmL,调节pH7.0。8)发酵培养基:玉米粉2%、黄豆饼粉1.5%、CaCl20.02%、MgSO40.02%、NaCl0.25%、K2HPO40.2%、柠檬酸钠0.2%、硫酸氨0.075%(溶解后加)、Na2HPO40.2%,pH值7.0。9)明胶培养基：------------学资学习-------供考研资料------

NaCl0.5%、蛋白胨1.0%、牛肉膏0.3%、明胶12%、蒸馏100mL，调pH。7.2-7.4．10)西蒙斯氏柠檬酸钠盐培养液：柠檬酸钠0.2%、NaCl0.5%、磷酸二氢钾0.1%、磷酸氢氨0.1%溴麝香草酚蓝水溶液1ml、琼脂2%、蒸馏水100ml、PH7.2-7.4。11)耐盐试验培养基（2%、5%、7%营养琼脂3.3%、NaCl（0.2%、0.5%、0.7%馏水100ml7.4。12)糖发酵培养基（110℃灭菌）12-1葡萄糖发酵培养基：葡萄糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾分子0.2%（最后加入、PH7.2-7.4。12-2乳糖发酵培养基：乳糖1.5%、蛋白胨0.2%、NaCl0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾分子0.2%（最后加入、PH7.2-7.4。12-3木糖发酵培养基：木糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾分子0.2%（最后加入、PH7.2-7.4。12-4阿拉伯糖培养基：阿拉伯糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾分子0.2%（最后加入、PH7.2-7.4。12-5甘露醇发酵培养基：甘露醇1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾分子0.2%（最后加入、PH7.2-7.4。13)葡萄糖蛋白胨培养基(VP、MR试验灭菌葡萄糖0.5%、蛋白胨0.5%、NaCl0.5%、PH7.2-7.4。14)蛋白胨水培养基（吲哚试验蛋白胨1.0%、NaCl0.5%、PH7.2-7.4。15)酪氨酸培养基（酪氨酸水解试验L-酪氨酸0.5g悬浮于10ml蒸馏水中，20min110℃灭菌，与100ml无菌营养琼脂混合，即成酪氨酸水解平板。16)1%麦芽糖溶液取0.1g麦芽糖,加入蒸馏水定容至100ml。17)0.85%无菌生理盐水称取0.85gNaCl于100ml蒸馏水中，摇匀，℃灭菌。18)1%3,5-二硝基水杨酸试剂称取1二硝基水杨酸溶于20ml浓度2氢氧化钠溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g四水酒石酸钾钠(C4H4KNaO6·4H2O),待溶解后用蒸馏水定容至100ml,盖紧瓶塞,勿使CO2进入。19)2%淀粉溶液:称取2可溶性淀粉溶于100ml度0.1mol/ml值5.6柠檬酸缓冲液中。20)

生化鉴定：酸铵结晶染色液、哥氏碘液、95%乙醇、0.5%番染液、柏油、------------学资学习-------供考研资料------

萘酚溶液、基红试剂α、40%KOH二甲苯乙醚、碘液、吲哚试剂五实验步骤分别在网球场旁的草地和体育馆后面的草地采集5-20㎝深度的土壤，五点采样，依次编号“1、2、3…”样品装在无菌纸袋中。分别标记为样品一和样品二。记录采样时间、地点、环境、土壤类型、等。样品4℃保存备用。称取5土样加入45mL无菌生理盐水中,混勻，80°C水浴30min,以杀死无芽孢细菌。10倍梯度稀释10-2-10-5倍。用一支新的无菌枪头从各浓度土壤稀释液中分别吸取0.2mL涂布于已标记好稀释度的牛肉膏蛋白胨培养基上,每个浓度梯梯度取两个重复,标记日期、时间、组别，置于37℃培养箱中培养24h。观察已培养的细菌，将形态不同的菌落在皿底用记号笔编号“A01、A02、A03…”后，进行划线纯化。先在已经平板培养基的一边作第1次平行划线3~4条再转动培养皿约60°角并将接种环上剩余物烧掉待冷却后通过第1次划线部分作第2次平行划线，再用同法通过第2平行划线部分作第3次平行划线和通过第3次平行划线部分作第4次平行划线。划线完毕，在培养皿底部和顶部写上菌落编号和对应的纯化次数“、A02-1…标记日期、时间、组别后，将培养皿倒置于28~29℃恒温培养箱中培养约20h。再继续分区划线2次，以获得较纯的菌种。每次划线完毕，在培养皿底部和顶部写上菌落编号和对应的划线次数，标记日期、时间、组别。注意观察记录菌落形态、表面及边缘特征等，为“4.3、初步鉴定”提供基础。纯化三、四次后镜检，挑取纯化的菌种进行单染色，观察细菌是否为杆状，以及细菌的大小、两端形态、粗细、着色深浅等是否一致。若不全为杆状，则弃用，若个体形态不一致，且形态不一致的两种或多种细菌数量相当，则再次纯化，直至个体形态一致。------------学资学习-------供考研资料------

用接种沾取纯化的菌落分别点种到含淀粉培养基的无菌平板上，并标记菌落编号、日期、时间、组别，放置在37℃恒温培养箱中培养48h。取出平板滴加路哥氏碘液，缓慢摇晃至碘液将平板覆盖均匀，静置，产生透明圈的菌株初步定为淀粉酶产生菌株!同时，测定产生透明圈的宽度，选择比较大的且菌落形态不同的两株菌株进行芽孢染色和革兰氏染色。从试管中沾取备份菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，℃培养12h进行革兰氏染色，培养24h进行芽孢染色。若未观察到芽孢，挑取与之前挑取位置不同位置的菌落再次染色观察。若仍未观察到芽孢，从试管中挑取形态与选取的．菌株不同的菌株进行活化、染色。1、涂片：用1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜。2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。4、染色：待玻片冷却后加结晶紫（或者石炭酸复红）滴于涂片上，覆盖涂面染色1-2分钟。5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止（注：勿冲去菌体6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。7、镜检：油镜观察并绘图。将纯化得到的单菌落分为两份，其中一部分接种于试管斜面培养基37℃培养24h后，于4℃保存备用，每个菌株做两个重复备份，将菌株的原有编号中的A替换为B，添加重复序号后编号，如“、B01-3-2、B02-3-1另一部分用来做产淀粉酶的芽孢杆菌筛选。1、涂片、干燥及固定2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加热至冒蒸汽维持5分钟。3、水洗将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为止。4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水洗，直接用吸水纸吸去余水。5、镜检：用油镜观察。记录结果。------------学资学习-------供考研资料------

1.涂片、干燥及固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察记录染色结果。能7.用接种沾取已初步鉴定的菌株分别点种到含淀粉培养基的无菌平板上，并．标记菌落编号、日期、时间、组别，放置在37℃恒温培养箱中培养48h。取出平板滴加路哥氏碘液，缓慢摇晃至碘液将平板覆盖均匀，静置，产生透明圈的菌株初步定为淀粉酶产生菌株!同时，测定产生透明圈的宽度，选择比较大的且菌落。从试管中取产淀粉酶性能较优的若干菌株用以下方法长期保存。改进的甘油菌种保存法：取上述典型菌落接种肉汤管37℃恒温振荡培养箱培养4h(亦可置于普通温箱培养6～8h)然后按5份培养液加入2份保存液的比例加入已灭菌的保存液,分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中,标记每株细菌保存2支,置-20℃冰箱保存。前面的实验选出了可淀粉酶的孢杆菌，分离出阴性菌和阳性菌并别培养。（1）接触酶试验：用接种环挑取适量菌苔插入装有H2O2的试管中，观察是否有大量气泡产生，将接种环灼烧、冷却后插入H2O2中作空白对照。（2）糖发酵试验：用接种环将两种杆菌分别接种于葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇的发酵管内，每种发酵管做两个平行，标记，并设置不接种菌的相同发酵管做空白对照37℃培养24h。观察记录，与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴------------学资学习-------供考研资料------

性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“-”表示，若培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“”表示。培养液的杜氏小管内气泡明显增大为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸产气，记录用“+”表示，如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“”表示。（3）V.P试验：取葡萄糖蛋白胨培养液的试管，编号，以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24h，培养完后，取出上述试管充分震荡2min每管分别加入40%NaOH溶液10~20滴，并加ɑ—萘酚，振荡试管，置37℃温箱中保温15-30min后，若培养基呈红色，记录为V.P试验阳性反应（+）表示，若不呈红色，记录为V.P试验阴性反应（用“-示。（4）MR试验：取葡萄糖蛋白胨培养液的试管，编号，以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24h，培养完后，取出上述试管，加入甲基红试剂2滴，变红色则呈阳性（+色为阴性（-）吲哚试验：5（．取装有蛋白胨水培养液的试管编号，以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，并做空白对照，置37℃培养箱中24h，在培养液中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰红色，说明吲哚试验为阳性反应，否则为阴性反应。（6）耐盐试验：将分离获得的菌种分别接种在含盐2%、5%、7%、10%的培养基中，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃下培养，观察生长状况，并做记录。记录方式如下：不生长：-，生长差：，生长一般：++，生长良好：+++；（7）柠檬酸盐利用试验:取若干装有西蒙斯柠檬酸盐培养基的试管，将菌种接入试管，置于37℃恒温箱中培养24~48h。若培养基为蓝色，则表明能利用柠檬酸盐作为碳源生长，以“+”表示。若培养基为绿色则为阴性，以“—”表示。(8)明胶试验:挑取菌种，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时，应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性，以“”表示。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。(9)硝酸盐还原试验:接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养1-4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1mL）加入培养基内，立观察结果。结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少------------学资学习-------供考研资料------

许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一杜氏小管，如有气泡产生，表示有氮气生成。(10）酪素水解试验：取牛奶平板，将菌种划线接在平板上，每皿1株菌。设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃恒温箱培养，若菌落周围和下面酪素已被分解而呈透明则为阳性。（11）酪氨酸水解试验：取酪氨酸平板，将测试菌接种于划线接于培养基上，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃恒温箱培养，若酪氨酸结晶被水解而变透明则为阳性。（12）运动性试验：使用半固体营养琼脂试管,将接种针从培养基中央自上而下直刺到试管底1-1.5cm处，沿穿刺线拔出接种针，置于37℃培养箱中培养24小时观察。观察是否为树根状生长，若有，则菌株有鞭毛，若直立生长，则菌株无鞭毛（13）温度试验：使用牛肉膏蛋白胨培养基，将菌株接种到平板上，分别在5℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50、55℃、60℃条件下培养24小时，观察细菌是否生长。(14)PH试验：将菌株分别接种到不同PH为5.7和7.2的营养肉汤中，置于37℃培养24小时，观察是否长菌，比较生长情况。（15）卵黄反应试验：取18-24小时的斜面或培养液中的菌体，点种在卵黄反应培养基中，点的直径约为2-3mm，置于37℃培养箱中培养18-24小时，观察，如菌落四周形成乳白色的浑浊环，表示卵磷脂分解生成脂肪，说明有卵磷脂酶。（16）0.001%溶菌酶试验：将菌种制成菌悬液，涂布在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，将干净的小滤纸片充分浸在溶菌酶试剂中，贴在平板上，置于37℃培养箱中培养24小时后观察，若出现抑菌圈，则为阳性反应，无则为为阴性反应。定10.查阅伯杰氏册，判断离的菌种据以上测定果，------------学资学习-------供考研资料------

------------学资学习-------供考研资料------

项1称药用的牛角匙要混用，完药品应时盖紧瓶盖。调pH时要小心操作，避免回调。不同培基各有配特点，要意具体操作。2革兰染色时注意色的时间控制，过或过短都会影响实验结果。3现有株细菌宽度显大于大杆菌的粗杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你应如何确保你的色结果的确性。4进行色鉴定时，应有已知对照菌种同等条件下染色，然后进行对比记录结果。5在芽染色中，应意温度的制，避免料在玻片上蒸腾，否则影响实验结果。6配制檬酸盐培养时要控制，要过碱，配出的培养基以浅绿色为。7在测MR试验的结果，甲基红示剂不可加太多，以免出现假阳性应。8实验用到的试管培养皿等器要贴明签，在接种或者使用时必须仔细核对菌名和培养基，以弄错。9配制哚试验用的白胨水培基，宜选色氨酸含量高的蛋白胨（用胰蛋白酶水解酪素得到的蛋胨，色氨含量较高则影响产吲哚的阳性率。10、株较多，务必注意标记的准确性。、务必保证始记录准、详细。、全程拍照录，务必确记录照信息，避免出现“有照片，却忘记片记录的什．------------学资学习-------供考研资料------

么内容”这尴尬。13、意记录菌株所对应的土壤样品编号14、芽孢杆菌菌龄较小，可能会出现革氏阴性反。15、保证最后获得的菌株是从土壤中分出来的，取样开始要注意无菌操作。七实验结果与分析1.土壤样品土壤

采集地采集时间点

天气温度

土壤颜色

土壤气味

土壤湿序号

度1

广大体2015-12-2育27℃

偏红褐

土腥味

干燥场后10:34a.m.草地

色2

广大网2015-12-球27℃

黄色

土腥味

干燥场附2210:52a.m近.2.稀释涂布生长情况土壤序号稀梯度10-210-3）10-3（2）10-4------------学资学习-------供考研资料------

1

多菌落，有

有一片白色

一大片白色

一个白色光的

菌5种不的菌

致密的菌苔光菌落一个黄色光滑的菌落还有4个连在一起的白色半透明菌落2

较多菌落，

一个放射状

无菌

两个白色光菌绒毛白色菌落和一个较小白色菌落

落------------学资学习-------供考研资料------

经过讨论，们选取了个10-3梯进行稀释经过后，我们挑生长出的菌进行培，划线分2次后进行镜检。3.检a.染色观察菌种A：显微镜在10*100的放大倍数下行观察，以观察到色的链状排列的杆菌，同时还有其他不同粗细杆菌，不纯菌种B：用显微镜在10*100的放大倍下进行观，有染成红色的粗杆状细菌。菌种：用微镜在10*100的放大倍数进行观察有染成红色的粗杆状细菌，且细菌部有着色或无色的推测应为芽。菌种：用显微镜10*100的大倍数下进行观察，有染成红色的状细菌，菌相对其较小和短，视野中个有芽孢。菌种：用显微镜在10*100的放大倍下进行观，有染成红色的粗杆状细菌，视野出现较多孢，且菌较较粗。菌种：显微镜在的放倍数下进行观察，有染红色的杆细菌。菌种G：用显微镜10*100的大倍数下进行观察，观到被染成色的链状菌。菌种：用显微镜10*100的放大倍数下进行观察，有染成红的杆状细，视野中现芽孢，一般在杆状菌中菌种I：用显微镜10*100的放大倍下进行观察，有染成红色的杆状细，视野中个别芽孢菌种：显微镜在10*100的放大数下进行察，观察到被染成红色的链状杆菌菌种K：显微镜在10*100的放倍数下进行察，观察被染成红的球状菌。菌种L：显微镜在放大倍数下行观察，野中观察红色的球状菌和红色的杆状菌。菌种M：用微镜在的放大倍数下进行观察，可以观察红色的链排列的杆，同时还其他不同粗细杆菌，不纯菌种：用显微镜10*100的大倍数下进行观察，视野中观察到色的球状。经单色镜，们定使E、G、H这四个菌。次分离划后，进行淀粉酶检测和兰氏染色及芽孢染。b.兰氏染色察：菌种：用显微镜在10*100的放大倍下观察，状细菌被染成紫色，证明该菌为革氏阳性菌菌种：用显微镜在10*100的放大倍数观察，杆细菌被染紫色，证明该菌为革兰氏阳性菌------------学资学习-------供考研资料------

菌种：用微镜在10*100的放大倍下观察，杆状细菌被染成红色，证明该菌为革兰氏阴性菌菌种G：显微镜在10*100的放倍数下观察杆状细菌染成红花，证明该菌为革兰氏阴性。c.芽孢染色观察：菌种：用显微镜在10*100的放大倍下观察，状细菌被染成紫红色，细菌中部被染成绿色，该菌芽孢芽孢较多菌种：用显微镜在10*100的放大倍数观察，杆细菌被染紫红色，细菌中部被染成绿色，该菌芽孢芽孢较多菌种：用微镜在10*100的放大倍下观察，杆状细菌被染成紫红色，细菌中部被染成绿色，该菌芽孢芽孢较少菌种G：显微镜在10*100的放倍数下观察杆状细菌染成紫红，细菌中部被染成绿色，该菌芽孢芽孢较少4.选能产淀酶的菌菌种编号EHJG

淀粉圈大小+++++++0------------学资学习-------供考研资料------

注：因为接淀粉培养时采用了线的方法，不好测量淀粉水解圈的径，所以“+”号表示淀粉解圈的大+越多表淀粉水解越大。综合菌落周的淀粉圈小以及菌的生长情况，舍去不产淀粉圈的G菌和孢较少的J菌，我选用了E和H进行实验。方便记录我们把E菌标为2，H菌标为4.5生理生化鉴定a.VP试：菌种E1、E2现象大致相同，均呈浅色，为阳（+菌种H1、H2现象大致相同，均呈浅色，为阳（+空白呈黄色b.糖酵验在萄发酵：E2均呈色，无气泡，显阳性（H1，均呈黄色无气泡，呈阳性（空白:呈深紫色，气泡。；菌落在液体表面较少。呈色，无气，呈阴性（－）E2、E1发酵中：阿伯糖H1、均呈紫色无气泡，呈阴性（－落长液体表面，较少，但比E多。空白：呈深色，无气。------------学资学习-------供考研资料------

在糖酵中：E1E2呈紫，无气泡呈阴性（菌体长在体的表面，菌苔厚。H1、均呈紫色无气泡，呈阴性（－落长液体表面，苔厚。空白：均呈色，无气。在露发酵：E2均呈色，无气泡，呈阴性（－落长在液表面，菌苔厚。H1、均呈紫色无气泡，呈阴性（－落长液体表面，苔厚。------------学资学习-------供考研资料------

呈深紫色，气泡。白------------学资学习-------供考研资料------

c.接酶试验：菌种E2实验现大致相同在装有H2O2的试管中分接入菌种E1、E2，都没有气泡生，说明菌的接触实验为阴性（－菌种H1、H2实验现象致相同，在装有H2O2的管中分别接入菌种H1H2，都没有气泡生，说明菌的接触实验为阴性（－空白组，没显现象。d.MR试：菌种菌种E1与菌种E2实验现象致相同。滴加甲基后的培养基溶液，颜色由紫色变成色，说明种E在MR实中表现为性。菌种H:菌种H1与H2实验现大致相同在滴加甲红后的培养基溶液，颜色由------------学资学习-------供考研资料------

紫色变成红，说明菌H在MR实验表现为阳性。空白组：无显现象。e.吲试验：菌种菌种与菌种E2实现象大致相。在进行哚试验后培养基液体变浑浊，在液体面形成透无色环带说明菌种在吲哚试验变现为阴性。菌种H;菌H1与菌种实验现象大相同。在行吲哚试后，培养基中液体未变浑浊；液体层面成透明无环带，说明菌种H在吲哚实验中变现为阴。空白组无显变化。f.耐实验：菌种E盐浓度养基编菌落大+++12%+++25%1++7%．分析：纵向比，7%10

212

几乎不长菌几乎不长菌几乎不长菌菌种H盐浓度10

培养基编号12121212

菌落大小几乎不长菌几乎不长菌几乎不长菌------------学资学习-------供考研资料------

菌种能在含量为2%~5%的养基中长在且含盐量为生长最旺盛而H菌种也能在含盐量培养基中长，在7%乎不生长且在含盐为几乎不生长2%~52生长最旺盛------------学资学习-------供考研资料------

g.柠酸盐利用验：菌种菌种E1、实验现大致相同。柠檬酸盐培养基（试管）从一开始绿色在第二天开始慢变为蓝，到第四完全变为蓝色，说明菌种在柠檬酸盐利实验中变为阳性（+菌种H1、H2实验现象致相同。柠檬酸盐培养基试管在培养七天后色一致时绿色，明菌种H在柠檬酸利用中变为阴性（空白组：柠酸盐培养无明显变现象------------学资学习-------供考研资料------

h.明实验在℃培养中培养天后，在冰箱报1天。冰箱拿出来没有出现融的现象。证明两种菌胶实验均阴性，明不被菌液化。本实验证明种菌都不生明胶酶一种胞外酶，不能使明胶分解为氨酸，从而去凝固力。验需要在37℃培养日，冰箱冷藏1天，天观察，且不能震动管。i.硝盐还原实：菌种E:E1和实验现大致相同。实验反应中，培养基溶颜色由黄变为红色说明菌种能用硝酸盐其在硝酸还原实验中变现为阳性。菌种H:菌种H1、H2实验现大致相同实验反应，培养基溶液颜色由黄色变成红色。说明种能利用酸盐，其硝酸盐还原实验中表现为阳性。空白组：培基颜色始为黄色，明显实验现象。------------学资学习-------供考研资料------

j.酪水解实验菌种菌种E1和的实验象大致相同，都产生透明圈，说明菌种能生可以水解酪素的质，在酪水解实验变现为阳性。能产生可H的试验现象致相同，都产生透明圈说明菌种H2和H1；菌种H菌种以水解酪素物质，在素水解实中变现为阳性。空白组：均乳白色平培养基，明显现象。本小组采用是点解的法接种，个培养基点接次，透明大小如下菌种H

透明圈半径cm）

平均值（）0.2625------------学资学习-------供考研资料------

------------学资学习-------供考研资料------

k.酪酸解验

菌种E和H都菌生长，培基无明显化。无菌生长，明显变化;空白组两种菌不能利用酪酸。l.动实验实验现大致相同，沿着刺的路径白色菌生，边缘呈和菌种E:菌种------------学资学习-------供考研资料------

云雾状生长。菌种H:菌种H1和H2的实验象大致相，沿着穿的路径有白色菌生长，边缘呈云雾状生柱。空白：试管清，无菌长。分析：菌种E和H中能观察到边缘呈绒毛的云雾状长柱，说菌种和H菌种都具有运动力，说明E菌种和H菌种都有鞭毛。------------学资学习-------供考研资料------

------------学资学习-------供考研资料------

度验菌种5055℃60℃45℃40℃352520℃15℃105℃很少+++++0++++0+++E+++++++++++++很少0+++0H++++++++++++++++++0

空白组空白在个个梯上都无菌产生说培养基无杂污染。E分析菌种E在5℃有菌长出，但在℃条件下乎没长株。说明菌50℃，培养基没菌，应是我们接种时技术不过关，大致的耐热范围为℃。但是没能接上菌菌种H在在55℃和50条件下长菌株很少而5℃~50℃都有种长出但在大致的耐热围为：5~50℃。60℃下菌几部长，说明菌种H实：营肉(PH)时皆长菌，但为在PH5.7实验象大致相。菌种和种菌种菌种E;E1E2EE

为好氧7.2PHH长的菌比

菌种少；在

为

时，也长菌且菌都长培养液表面，明菌种菌。时皆长PH5.7和PH为7.2H菌种：菌种H1和H2实验现象大相同。菌H菌，且菌长肉汤的底部。说明其为厌氧菌。空白组：白组在各个酸碱度培养条件均无菌落生，说明培养基无杂菌污染。黄应验E菌：能生，菌落四周成乳白色浑浊环，透明圈半为E1H0.4875，比的长情况稍旺盛，表示卵磷脂分解生成脂肪，说明有卵磷酶，呈阳.）+（．------------学资学习-------供考研资料------

菌种：H1和均能生长，菌落四周形成乳白色的浊环，不明圈半径0.4cm。表示卵磷脂分解生成脂肪，说有卵磷脂，呈阳性+空白组：无菌生长，菌落四周没有形成乳白色的浑浊环。：鸡蛋的卵黄由于有卵黄膜包裹，不与外界相通，因此为无菌状态，无分析需灭菌。在吸取卵黄液前，先把蛋壳敲碎一小块，再把蛋清除去，不可弄坏乱卵黄膜，防止杂菌污染。因为我们采用点接的方法，每个培养基点4个点，每个浑浊环的大小如下：菌种

浑浊环半径

(cm)(1)

浑浊环半径（2

平均大小）（（）H

0.4875-------