卫生化学教学课件：第十一章 色谱分析法概论

第十一章色谱分析法概论第一节色谱法的发展与分类第二节色谱法的基本原理

第三节经典液相柱色谱法第十一章色谱分析法概论第一节色谱法的发展与分类

色谱分析法（chromatography）又叫层析法，是利用混合物中各组分在两相即固定相和流动相中物理和/或化学性质的微小差异导致分配系数K不同，当两相做相对运动时，不同组分将产生反复多次的差速迁移，而导致彼此分离，然后对各组分逐个进行定性定量分析的方法。它是目前多组分混合物最重要的分离分析方法。一、色谱法的发展概况和分类最早创立色谱法的是俄国植物学家Tswett。1906年他在研究植物叶子的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。当时Tswett把这种色带叫做“色谱”（Chromatography），在这一方法中把玻璃管叫作“色谱柱”，碳酸钙叫作“固定相”，纯净的石油醚叫作“流动相”。Tswtt所用的色谱分析仪器固定相——CaCO3颗粒流动相——石油醚

在Tswett提出色谱概念后的20多年里没有人关注这一伟大的发明。直到1931年德国的Kuhn和Lederer才重复了Tswett的某些实验，用氧化铝和碳酸钙分离了α-，β-，和γ-胡萝卜素，此后用这种方法分离了60多种这类色素。40年代，Martin和Synge在提出液液分配色谱法Liquid－LiquidPartition

Chromatography，1941年提出用气体代替液体作流动相的可能性，11年之后James和Martin发表了从理论到实践比较完整的气液色谱方法Gas－LiquidChromatography。1956年荷兰人VanDeemter创立了速率理论。在60年代末把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱，出现了高效液相色谱（HPLC）。80年代初由Jorgenson等发展起来的毛细管电泳(CE)，在90年代得到广泛的发展和应用。年代仪器分析方法

光谱法

色谱分析法

电化学法

放射分析法

经典分析法

比色法

滴定法

重量法194619551965197519851995所占比例%14.326.328.729.730.0301.42.312.026.735.0364.46.210.213.515.0161.02.06.513.817.018

23.020.015.29.22

25.622.012.65.11

8.56.53.62.0？

不同年代各种分析方法所占的比例色谱法是以其高超的分离能力为特点，它的分离效率远远高于其它分离技术如蒸馏、萃取、离心等方法。分离效率高、应用范围广。它几乎可用于所有化合物的分离和测定。样品用量少。用极少的样品就可以完成一次分离和测定。灵敏度高。GC可以分析几纳克的样品。分析速度快。一般在几分钟到几十分钟就可以完成一次复杂样品的分离和分析。分离和测定一次完成，可以和多种波谱分析仪器联用。特点和优点对未知物分析的定性专属性差。需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS)缺点分类按流动相和固定相的聚集状态分：GC、LC、SFC按操作形式分：柱色谱（填充柱和毛细管柱色谱），平面色谱（薄层色谱和纸色谱）按色谱分离原理分：吸附（固定相为固体）、分配（固定相为液体）、离子交换、尺寸排阻和亲和色谱。按色谱动力学分：冲洗法、顶替法、迎头法。

按流动相和固定相的状态分类

按使用领域不同对色谱仪的分类

色谱法的发展趋势

智能化：可推荐试验条件，优化方法并给出结果。联用技术：色谱作为分离手段，光学、质谱作为鉴定。多维色谱：将两种以上色谱联用技术。高效色谱柱：高灵敏监测器的研制。第二节色谱法的基本原理一、色谱法的基本步骤选择合适的固定相和流动相进样：将处理好的样品以一定的速度加到固定相一端。洗脱：将流动相以一定的速度运载着样品连续通过固定相。收集：收集被分离各组分进行分析。二、色谱法的基本原理

色谱分离的过程是物质分子在相对运动的两相间分配平衡的过程。当流动相携带样品经过固定相时，由于试样中各组分与固定相、流动相有不同的作用力，各组分在平衡时分配系数K就不等，流动相运载的速度也就不等，产生差速迁移而被分离。色谱分离过程流动相a＋ba，b逐渐分离a，b完全分离a组分流出bab组分流出色谱流出曲线ab浓度cV(t)保留时间或保留体积差速迁移和谱带展宽同一组分分子在差速迁移过程中会出现沿色谱柱纵向扩散的现象，称为谱带展宽。流动相进入柱子后，已被吸附在固定相的AB将重新溶解到流动相而解吸，解吸组分又遇到吸附剂而再次被吸附，随着流动相流动过程两组分不断发生吸附、解吸、再吸附的过程，两组分理论上的小差异逐渐被放大，最终被分离称为差速迁移。谱带展宽现象三、色谱法的基本参数分配系数K：一定的温度和压力下，组分在相对运动的固定相和流动相中达到分配平衡时的浓度之比。

K=Cs/Cm分配比k：容量因子一定的温度和压力下，组分在相对运动的固定相和流动相中达到分配平衡时的质量之比。

k＝CsVs/CmVm=Ms/Mmk＝K×Vs/Vm保留值：试样中各组分在色谱中滞留时间的数值。大小由热力学因素控制。在一定的实验条件下，任何组分都有恒定的保留值，因此它是色谱基本定性参数。用时间（保留时间）和流动相体积（保留体积）表示。保留时间（tR）：指从进样到组分浓度出现最大值所需时间。保留体积（VR）：从进样到出现最大值所需流动相体积。死时间（tM）：流动相流过色谱柱所需要的时间。死体积（VM）：流动相流过色谱柱所需要的流动相体积。调整保留时间（t'R）：组分在固定相中滞留的时间。调整保留体积（V‘R）：组分在固定相中滞留的体积。

t'R＝tR－tMV'R＝VR－VMK、k与保留值的关系

k＝K×VS/Vm

k＝MS/Mm＝（tR－tM）/tM

可得:

tR＝tM（1＋k）＝tM（1＋K×VS/Vm）

上式是色谱法最基本的公式之一，它表明了保留值与分配系数及分配比的关系。K↑，tR↑，组分后出柱

K=0，组分不保留

K→∞，组分完全保留tR＝tM（1＋k）＝tM（1＋K×VS/Vm）

注：应选择合适分离条件使得难分离的组分K不等第三节经典液相柱色谱法

按分离原理可分为吸附、分配、离子交换、尺寸排阻和亲和色谱法。一、吸附柱色谱法基本原理：利用吸附剂对样品中各个组分吸附能力不同，导致在相对运动时产生差速迁移而分离。吸附作用和吸附平衡①吸附剂：多孔、比表面积大、有吸附活性中心、微粒状物质。吸附用色谱硅胶和硅胶粉②吸附剂对不同的物质有不同的吸附作用，吸附能力可用吸附平衡常数Ka来衡量。Ka实际上是组分分子在固定相和流动相中分配达到平衡时的浓度比。③吸附色谱法的的吸附过程是样品各组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心的过程。④Ka值小则表明不易被固定相保留，先出柱。分离机制：各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离吸附→解吸→再吸附→再解吸→无数次洗脱→分开

吸附等温线：在一定温度下，某组分分子在吸附剂表面被吸附平衡时，该组分在两相中的浓度CS、Cm与K相对关系曲线。①线形等温线：K为定值，与溶液中试样浓度无关，当流动相保持恒速时，组分谱带的移动速度也恒定，流出曲线为正态。CsCm流动相②凸形等温线：出现拖尾峰，在色谱过程中最常见。一般上部组分不易洗脱，而中部易洗脱，迁移快，出现拖尾峰。CsCm流动相③凹形等温线：溶质与固定相之间发生相互作用，溶质集中区比稀少区迁移慢，出现前伸峰。CsCm流动相吸附剂及其选择基本要求：应颗粒均匀，有一定机械强度，具有较大的比表面积和足够的吸附能力，与被分离组分、洗脱液、流动相均不发生反应，吸附可逆。常用吸附剂①硅胶：吸附活性：活泼型>游离型>束缚型可与极性或不饱和化合物形成氢键而具有吸附活性，表面可与水结合而降低吸附能力，加热到100℃可逆地除水而活化。但500℃以上则不可逆失去“结构水”而失活。硅胶具有微酸性，适合分离酸性和中性物质。②氧化铝：由氢氧化铝高温脱水而成，分为酸性、碱性、中性三种，分离能力强，活性可以控制的强活泼吸附剂。碱性：适合分离碱性、中性化合物。酸性：适用于分离酸性化合物。中性：凡酸性、碱性不能分离的物质均可。氧化铝的活性与含水量有关，活度级数表示。

吸附剂选择的基本原则：分离弱极性物质一般选用强活性吸附剂，分离强极性物质，应选用弱活性的吸附剂。硅胶含水量%活性分级氧化铝含水量%0Ⅰ03Ⅱ315Ⅲ625Ⅳ1038Ⅴ15硅胶，氧化铝的含水量与活性流动相及其选择基本要求：①纯度合格，②粘度小，对样品有一定溶解力，③不与样品和吸附剂发生不可逆化学反应，④性质稳定，易于蒸发，对分离组分回收率无干扰。常见流动相：水、乙醇等，极性大小根据介电常数获得。水>甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>乙酸乙酯……>甲苯>苯>四氯化碳>环己烷>石油醚选择：要使组分得以分离，必须从试样、流动相、吸附剂三方考虑，流动相选择根据相似相溶原则。梯度洗脱（gradientelution）：用两种或两种以上溶剂按最佳比例混合，在洗脱过程中逐渐改变溶剂的比例，使混合溶剂的极性逐渐发生改变，以获得最佳的分离效果。适用于分离相对分子质量中等的脂溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；第十一章色谱分析法概论

第三节经典液相柱色谱法主讲人：徐厚君

色谱分析法（chromatography）又叫层析法，是利用混合物中各组分在两相即固定相和流动相中物理和/或化学性质的微小差异导致分配系数K不同，当两相做相对运动时，不同组分将产生反复多次的差速迁移，而导致彼此分离，然后对各组分逐个进行定性定量分析的方法。它是目前多组分混合物最重要的分离分析方法。按流动相和固定相的聚集状态分：GC、LC、SFC按操作形式分：柱色谱（填充柱和毛细管柱色谱），平面色谱（薄层色谱和纸色谱）按色谱分离原理分：吸附（固定相为固体）、分配（固定相为液体）、离子交换、尺寸排阻和亲和色谱。分类差速迁移和谱带展宽同一组分分子在差速迁移过程中会出现沿色谱柱纵向扩散的现象，称为谱带展宽。流动相进入柱子后，已被吸附在固定相的AB将重新溶解到流动相而解吸，解吸组分又遇到吸附剂而再次被吸附，随着流动相流动过程两组分不断发生吸附、解吸、再吸附的过程，两组分理论上的小差异逐渐被放大，最终被分离称为差速迁移。谱带展宽现象色谱法的基本参数分配系数K：一定的温度和压力下，组分在相对运动的固定相和流动相中达到分配平衡时的浓度之比。

K=Cs/Cm分配比k：容量因子一定的温度和压力下，组分在相对运动的固定相和流动相中达到分配平衡时的质量之比。

k＝CsVs/CmVm=Ms/Mmk＝K×Vs/VmtR＝tM（1＋k）＝tM（1＋K×VS/Vm）

K↑，tR↑，组分后出柱

K=0，组分不保留

K→∞，组分完全保留

吸附剂选择的基本原则：分离弱极性物质一般选用强活性吸附剂，分离强极性物质，应选用弱活性的吸附剂。二、分配柱色谱法又叫做液液色谱法，其固定相和流动相均为液体。基本原理：利用物质在互不相溶的两组溶解分配的差异来实现分离的。要求：流动相和固定相互不相溶，应有分界面。

样品随流动相进入固定相后，溶解进入固定液，然后又经过萃取回到流动相中，随流动相迁移，平衡被破坏，色谱过程实际上是组分在两相间多次溶解、萃取的过程。动态分配平衡用K表示，K＝Cs/Cm，K小则组分在固定液中浓度小，保留时间短，迁移速度快。固定相和流动相固定相是将固定液涂在一定粒度的载体上构成。载体：仅起到负载固定液的作用，惰性、多孔、对样品无吸附作用，不与其他物质发生反应，具有一定机械强度。常用载体有吸水硅胶、纤维素、多孔硅藻土等。固定液：样品的良好溶剂，和流动相互不相溶。流动相：不溶于固定液，对样品有一定溶解度，但能力小于固定液。种类：分为正相分配色谱和反相分配色谱。正相：用极性溶剂做固定液，非极性弱极性溶剂流动相，适合分离极性物质。反相：用非极性或弱极性溶剂为固定液，极性溶剂作为流动相，适合分离非极性弱极性化合物。三、离子交换色谱法

固定相为离子交换树脂的液相色谱法，它利用离子交换树脂上可交换的离子与流动相中组分离子发生交换而获得分离，适用于分离离子型化合物和无机化合物。固定相→离子交换树脂流动相→水为溶剂的缓冲溶液被分离组分→离子型的有机物或无机物离子交换树脂阳离子交换树脂

RSO3-H++X+→RSO3-X++H+

固定离子可交换离子待测离子阴离子交换

R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。交换过程离子交换树脂具有网状高分子结构，网架稳定，化学性质及热稳定性好，在网状结构骨架上有许多活性基团，可被交换或电离。根据活性基团不同可分为：阳离子和阴离子交换树脂两类。

阳离子交换：M++N+R－

M+R－＋N＋阴离子交换：X－＋R+Y－

R＋X－＋Y－平衡时，选择性系数KS＝[M+R－][N＋]/[M+][N+R－]

近似等于分配系数K，K大则表示组分与树脂亲和力强。

强酸：-SO3H、国产732＃阳离子弱酸：-COOH、-OH、国产724＃

强碱：N+R3X－、国产711＃阴离子弱碱：－NH2、－NR2、国产701＃失活与再生①失活：活性基团上可交换离子都被交换，树脂失活。②再生：用一定浓度的稀酸或稀碱淋洗，使反应逆向进行，树脂恢复交换能力的过程。树脂的主要性能交联度：树脂上交联剂的含量。交联度大，则结构紧密，网眼小，大离子难以进入，交换速度慢，选择性好，且在水中溶解度小。交换容量：每克干树脂能参加交换反应的活性基团数。粒度：指离子交换树脂颗粒的大小。用树脂溶胀状态所能通过的筛孔数表示。一般制备纯水10－50目；色谱用水100－200目。流动相作用①使交换剂具有可交换的容量。②使组分分离。③调节各组分分离度。参数：pH值和离子强度容量容量pHpH强阳弱阳强阴弱阴四、尺寸排阻柱色谱法凝胶色谱法：是测定高分子化合物的可靠方法，分为①凝胶过滤色谱，水做流动相，适用于水溶性高分子；②凝胶渗透色谱，有机溶剂做流动相，适用于脂溶性高分子。分离提纯生物高分子，如蛋白质分离纯化凝胶渗透色谱

基本原理凝胶是一种由有机分子制成的分子筛，利用固定相（如凝胶孔径）与被分离组分空间尺寸大小关系而分离的，分子越小，扩散渗透进入凝胶孔的机会越多，越容易滞留。流动相和固定相固定相应用最广泛的就是凝胶，它是一种网状、多孔、弹性高聚物的溶胀体，非常稳定。其中葡聚糖是最常用的凝胶。网状孔隙大小用交联度表示，它是每克干胶吸水的重量。吸水量>7.5g/g为软胶；吸水量<7.5g/g为硬胶一般葡聚糖、琼脂糖凝胶选用水或水溶液来作流动相；聚苯乙烯凝胶则宜选用有机溶剂做流动相。葡聚糖凝胶五、亲和色谱法利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。第十一章色谱分析法概论第四节平面色谱法主讲人：徐厚君原理吸附：利用吸附剂对样品中各个组分吸附能力不同，导致在相对运动时产生差速迁移而分离。分配：利用各个组分在互不相溶的两组溶液分配的差异来实现分离的。离子交换：利用离子交换树脂上可交换的离子与流动相中组分离子发生反复交换而获得分离。尺寸排阻：利用固定相（如凝胶孔径）与被分离组分空间尺寸大小关系而实现分离。分配系数K吸附平衡常数Ka：组分分子与流动相分子竞争吸附活性位点达到平衡。Ka小，先出柱。分配系数K：组分在两相间多次溶解、萃取达到动态分配平衡。K小，先出柱。选择性系数Ks：近似等于分配系数K，K大则表示组分与树脂亲和力强，后出柱。尺寸排阻：固定相吸附：吸附剂，常用的如：硅胶、氧化铝、活性炭等。分配：常用载体为吸水硅胶、纤维素、微孔聚乙烯小球等。固定液有水、甲醇、硅油、角鲨烷。离子交换：强酸、弱酸阳离子交换树脂和强碱、弱碱阴离子交换树脂。尺寸排阻：葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯乙烯凝胶。流动相吸附：根据分离组分的极性和介电常数来确定流动相的极性。分配：正相：非极性或弱极性溶剂，苯，甲苯；反相：极性溶剂，水，甲醇，乙醇。离子交换：一般用水，但可通过控制PH和离子强度来改善分离效果。尺寸排阻：凝胶过滤：水，凝胶渗透：有机溶剂。适合分离的物质吸附：不同族的化合物、同分异构体。不适合分离同系物和强极性化合物。分配：正相：适合极性化合物。反相：适合非极性或弱极性化合物。离子交换：离子型有机化合物和无机化合物。尺寸排阻：分离提纯高分子化合物。第四节平面色谱法

平面色谱法是将固定相涂铺成平面状层，色谱过程在平面层内进行色谱展开，原理与柱色谱完全相同。包括薄层色谱法、纸色谱法和薄层电泳法。它具有设备简单，操作方便，分离速度快等优点。一、薄层色谱法基本原理和特点将固定相（吸附剂）均匀地涂抹在玻璃、塑料或金属薄层表面上，试样点在一端的起始线上，然后将薄层板放在密闭的容器中以适当的溶液展开，在毛细管作用下，溶剂沿薄层缓慢移动，组分则在两相发生吸附、脱附作用而分离。铺板→活化→点样→展开→定位(定性)/洗脱(定量)薄层液相色谱图谱各组分在薄层上的位置用比移值Rf表示

Rf是溶质分子和流动相在色谱过程中迁移速度的相对值，它与物质的性质、流动相及固定相的性质有关，还受色谱操作条件的影响。当色谱条件一定时，Rf为定值，可用来定性但它影响因素多，难以重复。相对比移值Rs

参考物质i可以是试样的一部分，也可以是另外加入的物质。Rs的值可以大于1，也可以小于1，因此系统误差小，重复性好于Rf。前沿被测物原点ba参比物ibaRf范围：0<Rf<1Rf=0.2~0.8（常用）

Rf=0.3~0.5（最佳）吸附、分配、离子交换、空间排阻。分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色方便。药物杂质检查、纯度测定、定量。吸附薄层色谱固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分离。K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。分配薄层色谱固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。吸附剂硅胶：硅胶H、硅胶G、硅胶HF254氧化铝：可分为中性（pH7.5)、碱性（pH9.0）和酸性（pH4.0）展开剂常用的有：石油醚<环己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水展开剂的选择：根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性

吸附剂的选择：根据被测物极性和吸附剂的吸附能力

被测物极性强——弱极性吸附剂

被测物极性弱——强极性吸附剂

可用单一溶剂，也可以用混合溶剂。实验时候必须综合考虑展开剂、样品极性和吸附活性三者，他们相互制约。多种混合溶剂时，如，环己烷：丙酮：水：二乙胺=10:5:5:2，比例大的起到溶解分离的作用，比例小的起到调整改善Rf值作用。水的作用是增加整个体系的极性，丙酮可混匀系统，二乙胺控制系统pH值。薄层色谱法的实验技术薄层板的类型：板子分为不加粘合剂的软板和加粘合剂的硬板。①软板：制作简单，随铺随用，展开快；但分离后不能保存，斑点弥漫。②硬板：粘合剂＋吸附剂＋水或溶剂，涂于干板，烤箱活化。硅胶G——自含粘和剂硅胶H——不含粘和剂硅胶HF254——含荧光剂，254nm紫外光照发绿光硅胶HF365——含荧光剂，365nm紫外光照发光薄层色谱法的实验技术薄层板制备：①软板：将吸附剂干粉均匀铺在玻璃板上即可。②硬板：粘合剂＋吸附剂＋水或溶剂，涂于干板，烤箱活化。倾注法：用玻璃棒涂铺糊状吸附剂；刮层平铺：用玻璃条做框边，然后用玻棒平刮；涂铺器铺层法：活化：一定温度烤箱加热，干燥备用。点样：溶液一般配制成0.5－1％的试样，所用溶剂要求容易挥发，极性与展开剂相似。用毛细管或微量注射器轻轻地点在起始线上，点样量要适中，一般1-5μl，电吹风挥干溶剂。自动点样器边缘效应edgeeffect：是指同一组分的斑点在薄层中部比边缘移动慢的现象。防止方法就是将薄层板两边缘刮去1－2mm。

展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应浸入展开剂深度0.51.0cm，展开至整板3/4距离,标记。1,2样品3标准品前沿原点

•••1.5-2.0cm2.0cm123展开：一般有上行展开，径向展开，下行展开等，其中上行展开常用，软板一般用近水平展开，硬板常用近垂直展开。对一次展开不能完全分离的还需进行二次展开。显色：如果展开后斑点无色，则通过显色定位，①紫外光照射法：采用汞弧灯253.7nm或GF254；②熏气显色法：不饱和有机物可Br或I蒸汽熏为黄褐色；③喷显色剂显色：一些氧化还原、酸碱反应显色。定性分析——利用Rf值，与对照品的Rf值比较，同时在一块薄层板上进行。也可采用相对比移值定性。定量分析——洗脱法，薄层扫描法薄层扫描法是用一定强度光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。检测方法吸收测定法和荧光测定法测量方法投射法和反射法扫描方式单波长和双波长定量方法外标法定量二、高效薄层色谱法是在薄层色谱的基础上，改用粒度小的吸附剂加聚丙烯酸等粘合剂，采用喷雾法制成的薄层板，一般采用径向展开，展开距离短。优点：分离效率高，操作灵活，分离容量大，斑点集中，速度快等，适用于分离复杂物质。三、纸色谱简介用滤纸作为载体的平面色谱法，能同时分离多种组分，但重现性差，时间长。基本原理：为分配色谱法，固定液为纸纤维中吸附的水或吸留的甲醇胺或缓冲液等。流动相为与水不相溶的有机溶剂以及与水相溶的某些溶剂。色谱过程：样品点在滤纸上即溶解于固定液中，流动相借纸纤维的毛细管作用展开，使样品组分在两相间产生连续的溶解、萃取过程，从而各组分产生差速迁移。纸色谱

谢谢！河北联合大学信息中心制作2011年3月用液－固色谱法分离极性组分，应选择的色谱条件是A流动相为极性溶液B吸附剂的含水量小些C吸附活性低一些D用非极性溶剂做流动相在液－液分配色谱中，下列哪对固/流符合反相色谱。A石蜡油/正己烷B石油醚/苯C甲醇/水D氯仿/水ACD用硅胶作为吸附剂，正丁醇作为展开剂，薄层色谱分析某弱极性物质时，其Rf值太大，为减小Rf，采用A增大硅胶吸附剂的含水量B换为乙酸乙酯作为展开剂C在正丁醇中加入一定量的乙醇D减小进样量C用柱色谱法分离脂溶性维生素，应采用反相色谱法。在硅胶A薄层板子上，以混合溶剂展开，组分的Rf值为0.41，在硅胶B板子上，用同样的溶剂展开，Rf为0.55，则A的活性小于B的活性。凝胶色谱分析法分子量越小的组分先流出色谱柱。在分配色谱法中，对组分起保留作用的是担体。√×××采用反相分配色谱法A.适于分离极性大的样品B适于极性小的样C极性小的组分先流出D极性小的后流出采用正相分配色谱法A极性大的组分先出来B极性小的组分后出来C流动相极性应小于固定相极性D适于分离极性小的组分BDC在液－液分配色谱法中，分离极性物质时，应选用正相色谱，此时固定相极性大，流动相极性小。用硅胶铺成的薄层板分离弱极性物质，采用流动相为环己烷－苯的混合溶剂，展开后Rf＝0.56，若将此薄层板预先在105℃加热1小时，再分离，则此时Rf<0.