HIV检测及临床意义

HIV检测及临床意义第1页/共62页第2页/共62页第3页/共62页第4页/共62页第5页/共62页第6页/共62页第7页/共62页第8页/共62页中国每年新发现的HIV/AIDS

病例数（1985~2002）第9页/共62页第10页/共62页第11页/共62页第12页/共62页第13页/共62页第14页/共62页第15页/共62页第16页/共62页第17页/共62页第18页/共62页第19页/共62页第20页/共62页第21页/共62页第22页/共62页第23页/共62页第24页/共62页第25页/共62页第26页/共62页第27页/共62页HIV的检测第28页/共62页HIV感染可通过两种途径检测直接检测病毒或其组成部分检测人体HIV免疫反应——HIV特异性抗体从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应第29页/共62页HIV感染后抗原和抗体的变化

及其与疾病关系HIV感染人体后出现一过性病毒血症，6-8周后血清抗体阳转，病毒滴度降低，在随后的5-8年无症状带毒期里HIV抗体一直存在，但病毒难查到。进入AIDS期后血浆中病毒再次出现。故诊断HIV感染多数时间用抗体检测诊断，极早期（窗口期）用抗原检测。第30页/共62页HIV抗体诊断 目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认实验。第31页/共62页一、检测试剂筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。第32页/共62页2、确认试剂必须经国家药品监督管理局注册批准。确认试剂包括免疫印迹试验、条带免疫试验及免疫荧光试验试剂。目前以免疫印迹试剂最为常用。第33页/共62页ELISA方法： 目前最常用的初筛实验，自1985年首次检测HIV-1抗体的试剂盒供市以来，已从第一代的全病毒抗原间接法发展到第四代的以重组的多肽抗原及抗P24抗体包被的双夹心法，使窗口期缩短了2-3周。第34页/共62页四代艾滋病酶联免疫试剂比较solidphasespecificdetectionofconjugate第一代病毒裂解液HIV-1IgG抗体HIV-1-IgG抗体第二代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2IgG抗体HIV-1/-2IgG抗体第三代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-OIgM/IgG抗体HIV-1/-2/-O病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-O第四代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24AbIgM/IgG抗体HIV-1/-2/-Op24抗原病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24抗体第35页/共62页检测结果的报告和处理阴性反应出具HIV抗体阴性报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，可以进行HIV-1P24抗原或HIV核酸检测，或2－3个月以后再做抗体检测。筛查实验呈阳性发现反应，可出具“HIV抗体待复查”的报告，不能出阳性报告。第36页/共62页样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测阴性报告均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种原理初筛试剂选用初筛试剂阴性反应HIV抗体初筛检测流程图第37页/共62页快速诊断试剂：采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理快速、不需特殊仪器敏感度、特异度低于ELISA，且价格贵适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证第38页/共62页HIV抗体确认常用的确认实验方法是免疫印迹法（WB）。免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型。一般先用HIV-1/2混合型试剂进行检测第39页/共62页蛋白印迹实验（WB）

——广泛使用的确认实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIV蛋白抗原分开后转移到硝酸纤维膜上。标本中存在的HIV抗体与条带上的抗原结合，再加入酶偶联的抗人IgG抗体和底物，在抗原抗体结合的部位会出现有色条带其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做确认试剂。不同的研究机构有不同的判定标准第40页/共62页

HIV抗体确认检测流程图免疫印迹法(HIV1/2混合型)HIV-1阳性反应可疑反应出现HIV-2指带HIV-1阳性报告可疑反应阳性反应阴性反应报告HIV-2血清学阳性反应报告必要时测核酸阴性报告免疫印迹法（HIV-2）每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性阴性反应阴性报告

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P24抗原测定（一）适用范围HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的诊断。监测病程进展和抗病毒治疗效果。第42页/共62页（三）结果报告和解释

1、HIV-1P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认。2、HIV-1P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊。3、HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。第43页/共62页HIV核酸检测

第44页/共62页第45页/共62页PCR对与缩短窗口期病毒抗体试验PCR缩短HCV82天23天72﹪HBV59天34天41﹪HIV22天11天50﹪第46页/共62页1、辅助诊断某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否，但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（>1000）提示感染发生的可能性非常大。使用此指标应综合其他检测数据和样品背景情况进行综合分析与判断。第47页/共62页2、窗口期辅助诊断在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒RNA测定具有特殊的意义。目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。第48页/共62页3、病程监控由于HIV感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDS发病时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与HIV感染有关。第49页/共62页4、指导治疗方案及疗效测定并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗，这不但是经济上的原因，更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平后（如>35000-50000拷贝/毫升）才具有良好的效果。只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低50%才被认为临床有效。第50页/共62页艾滋病免疫指标的检测

第51页/共62页随着政府加速对国产抗艾滋病药物上市的批准，我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。艾滋病临床治疗中各种免疫指标(CD4+、CD8+T细胞等)对于确定感染状态、预测发病、评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。第52页/共62页CD4T淋巴细胞：（流式细胞术）

CD4T细胞是HIV的主要靶细胞,感染后随着病程进展，CD4T细胞不断下降

<500/mm3——有临床诊断意义

<200/mm3——AIDS病程进展，AIDS诊断和疗效观察的指标第53页/共62页HIV感染几周内，出现类流感症状，也称为血清阳转期，CD4细胞的数量降低。随之出现的免疫应答可以控制急性症状，恢复CD4细胞的数量，但并不能清除病毒。随着CD4细胞不断下降，当降至500/ul左右时，开始出现机会性感染或其它疾病，进入症状期。当CD4低于200/ul时，即进入艾滋病期。第54页/共62页CD4+T淋巴细胞小于350/ul（结合病毒载量，确定治疗时机）有效治疗8周后CD4+T淋巴细胞数量增加50/ulHAA