小麦抗病性的鉴定

-.z.实验十二小麦抗病性的鉴定Ⅰ小麦抗条锈病的鉴定一、目的学习和初步掌握小麦条锈病抗性鉴定技术。

二、内容说明锈病对小麦产量的影响很大，在*些地区甚至是限制小麦增产的主要因素。其中条锈病(Pucciniastriiformis)是小麦三种锈病中分布面最广、危害最大的病害。选育和栽培抗锈品种是防治小麦锈病危害的一项最根本、最有效的措施。因此，从事小麦育种工作必须掌握对锈病抗性的鉴定方法。

锈病在自然条件下，并非每年各地都严重发生。因此，在进展抗锈病育种时，除在发病的麦田中进展直接鉴定外，还必须人工接种鉴定，如采用幼苗鉴定和成株鉴定。幼苗鉴定一般在温室中进展，于麦苗第一叶长达4—5cm时接种病原菌，等充分发病后进展鉴定。其优点可在较短的时间内测定大量材料的抗性，测定对不同生理小种的抗性，还能防止本地没有而外地有的新生理小种的传播。由于小麦受锈病危害主要是成株期，因此田间进展成株鉴定更能反响大田生产上的抗性。本实验采用成株期人工接种鉴定法。

三、材料仪器

1.材料供试小麦育种材料、感病对照品种、抗病对照品种；供试条锈病菌种(选用致病力强、分布广的不同生理小种)。

2.仪器用具试管、培养皿或烧杯、玻棒、注射器等。

四、方法步骤

1.供试材料的种植把每个被鉴定材料种成一个小区，北方春季经常干旱，采用凹穴播种法，播种时灌水，提高保湿性，以利充分发病。在鉴定材料圃的四周和在鉴定区内每隔10—20个小区播种高感品种作为诱发行。诱发行最好用2—4个高感品种等量混合播种。

2.接种时间接种条锈病的适宜时间，通常是在小麦拔节前后。

3.采集孢子和配制孢子悬浮液

(1)采集条锈菌孢子在温室培养的发病植株上，按不同生理小种分别采集新鲜孢子粉，将试管倾斜套进麦株病叶；再轻轻震动，使已成熟的孢子落于管内，到达要求量即可。

(2)孢子悬浮液的配制把采集来的新鲜孢子粉，在玻璃杯(或培养皿)内先用少量蒸馏水湿润孢子粉，搅成糊状，再加水稀释，至孢子悬浮液透光呈桔黄色即可。配制孢子悬浮液时，最好是分生理小种配，以便分别接种，减少小种间相互干扰。如果采取混合接种，则各小种的孢子粉事先应等量混合，而后配成孢子悬浮液，现配现用。

4.接种方法一般可用的接种方法有涂抹、注射、喷雾、喷粉等方法，但最常用的是注射接种法。其方法是：

(1)将配制好的孢子悬浮液吸入注射器，装上针头，而后在感病诱发行植株的第二可见(从上数)叶片与叶鞘相接处将针头倾斜刺入，切勿刺穿，再稍稍回抽，即行注射孢子液，以见到心叶上端冒出水珠为度。在诱发行接种，一般每隔1m左右选取单茎3—5个予以注3—5针。

(2)锈菌孢子一般多浮于液面，在注射时，必须注意震动。如气候干旱，接种前几天最好先行灌水，以提高田间湿度，有利于锈病孢子萌发、侵染和发病。

(3)接种应选择晴天、无风或微风，估计夜间有露的那天黄昏进展。为了提高田间湿度，接种后和开场发病后，在诱发行上用清水喷雾，或浇水，保证良好的诱发条件。

5.鉴定工程及抗性分极标准衡量小麦品种对锈病的抗性和发病程度，常用以下三个指标，即反响型、普遍率及严重度。

(1)反响型是指小麦植株受病菌侵染后的保卫性反响。可以用过敏性坏死的有无及强弱，夏孢子堆能否形成、生长量的大小、多少来判断。优点是能较好地反映出品种免疫性的本质。目测评定，其反响型可分为6级，其分级标准如表12-1。

(2)普遍率指病害发生的普遍程度，即发病叶片数占调查总叶片数的百分率。一般用目测估计法观测记载。要求准确鉴定时，可根据被鉴定材料小区面积的大小，可设点随机选取30—50片叶观察记载，并按下式计算：

(3)严重度即病叶上孢子堆占叶面积的百分率，用以表示病害发生的严重程度。理论上讲，应将小区内每一片叶都进展统计而后取其平均值。但实际工作中，往往因人力缺乏，而仅采用目测估计法，将发病叶片总观后得出结论。严重度计算公式如下：

严重度分级标准目前还不统一，但多数采用7级分级标准(表12-2)

6.病情鉴定在正常情况下，接种后约经两星期即可发病，抗锈性的病情鉴定时间是小麦乳熟期以后，田间锈病开展到顶峰时进展。每个品种逐个进展鉴定记载。鉴定小麦品种的抗锈性应以鉴定反响型为主，并目测鉴定普遍率和严重率。鉴定杂种后代只鉴定反响型。均按上述分级标准进展评定。

五、实验作业

1.采集条锈病菌新鲜孢子和配制其孢子悬浮液，并按分配任务进展注射接种和做好接种后的田间管理工作。

2.发病盛期对供鉴材料的抗病性进展鉴定，并对抗性进展综合评价分析。

3.小麦条锈病发病条件是哪些"在人工接种时怎样保证这些条件"接种鉴定抗性过程中，容易出现哪些问题干扰鉴定结果"

Ⅱ小麦抗赤霉病的鉴定一、目的学习和初步掌握小麦赤霉病抗性鉴定技术。

二、内容说明小麦赤霉病(Gibbrellazeae)主要在淮河以南长江中下游小麦产区发生危害，是该区的重要病害之一。在病害流行年份，可引起严重减产和品质变劣，并使受害麦粒带有致呕毒素，对人畜有严重毒害作用。

小麦对赤霉病的抗性，至今尚未发现免疫和高抗的品种，但不同小麦品种的耐病程度有明显的差异。因此，选育抗病性较好的品种仍是重要的育种目标之一。

赤霉病是从小麦花器侵入，以颖片内残留的花粉囊为基物进展腐生和发育，然后侵入到花的其它部位，甚至整个麦穗。小麦开花期间如果雨水多、相对湿度在95%以上、气温在20℃左右，并有一定菌源时则适宜赤霉病生长而发病。小麦品种抗赤霉病性可分为抗侵入和抗扩展两种类型。但迄今仅见到抗扩型的，所以现今是鉴定小麦穗部抗赤霉病扩展的强弱。

小麦抗赤霉病的鉴定方法有自然诱发鉴定、室内人工离体接种鉴定、田间人工接种鉴定等。

本实验采用室内人工离体接种鉴定和田间人工接种鉴定方法。

三、材料用具

1.材料假设干小麦品种和育种材料、感病对照品种、赤霉病菌菌种。

2.用具三角瓶、高压灭菌锅、搪瓷盆、广口瓶、烧怀、显微镜、载玻片、盖玻片、注射器。

四、方法步骤

(一)室内人工离体接种鉴定法

1.供鉴定材料的准备供鉴定的小麦材料要根据生育期的长短分期播种，每个材料一个小区，设易感病对照小区。当供试材料进入抽穗———始花阶段，自植株最上一个茎节的下方剪取麦穗，每个材料约20穗左右，插在盛有清水的广口瓶中，离体水培备用。

2.供试菌种的准备

(1)菌种选择赤霉病菌种宜选择当地致病力强的菌株。

(2)病菌培养病菌培养采用麦粒培养基，先将麦粒用清水洗净，倒入三角瓶(约占2/3)，加水少量(麦粒与水之比为4:1)，塞上棉塞，再用牛皮纸包住棉塞，在1.5磅高压消毒锅中灭菌30分钟。冷却后，在无菌操作条件下接种赤霉病少许于麦粒上，置于25℃恒温箱中培养。待红色菌丝长满麦粒表层时，摇动三角瓶，继续培养，直至全部麦粒长满菌丝后，倒入搪瓷盆内，用蒸馏水洗去菌丝，将麦粒平铺于搪瓷盆中，盖上两层纱布保湿，以便形成子囊壳和子囊孢子。

3.孢子悬浮液的配制将长满子囊孢子壳和子囊孢子的麦粒用蒸馏水洗下子囊孢子，经两层纱布过滤，然后取一滴菌液置100倍显微镜下观察，每个视野以15—20个孢子为宜，即可用于接种。

4.定量定位单一花内塞放浸菌液纸片接种或单花注射接种，但前者保湿性好，工作简便，效果可靠。

选择麦穗中一个小穗的第一小花或第二小花，在单一小花内塞放浸渍菌液纸片接种或用注射器吸取配制好的孢子悬浮液，进展定量(0.5ml)注射接种。然后，置于20℃左右的保温、保湿箱(或塑料袋)内24小时，在20℃左右的条件下光照培养，经常喷水保湿。

5.病情鉴定和分级标准目前尚无统一方法，本实验按6级分级标准进展。

接种后8天左右，对接种的全部麦穗进展病情鉴定。小麦抗赤霉病的分级标准是根据病原菌从一个接种小穗侵入后，进一步侵入小穗轴、主穗轴的程度进展抗性鉴定，共分6级，分级标准见表12-3。

(二)田间人工接种鉴定法此法根本上与室内人工接种法相似，即在大批待鉴定材料抽穗前5—7天，将长满子囊壳和子囊孢子的麦粒均匀地撒在麦地土表(或在开花期直接向待鉴材料麦穗喷洒病菌孢子悬浮液)，每亩施用带菌麦粒3kg左右。如遇干旱