实验设计范例-肺水肿

验设计大纲成都医学院实验技术教研室PS。国内外研究现状：任何原因引起肺泡表面活性物质(PS)减少或灭活，均可使肺泡表面张力增加，肺泡过度缩小甚至萎陷，间质负压加大，继而诱发或加重间质及肺泡水肿，临床体外循环后发现，肺含水量的明显增加与内源性PS活性降低有显肺水的清除等重要生理功能。据相关文献报道，外源性PS能够在一定程度上抑制肺水肿的发生[2]。张更荣等观察了气管内滴注外源性PS治疗家兔急性肺水肿的疗效，发现伤肺肺含水量明显减少、存活时间显著延长[3]。同样应用外源性PS治疗大鼠肺水肿、肺出血实验中也发现肺泡内蛋白质渗出显著减少，肺体指数降低，肺含水量显著降低，肺水肿程度减轻[4.5]。诸多资料显示，外源性PS疗法可能成为有效治疗肺水肿的综合措施之一。外源性PS治疗可减轻肺水肿程度，抑制肺水肿形成。目前，内源性PS的产生机制国内已经研究的很透彻了，PS与肺泡Ⅱ型上皮细胞共同构成了PS系统，该系统异常与肺部损伤密不可分，它既是肺损伤的结果，同时也是肺损伤过程中的重要内在因素。肺泡Ⅱ型上皮细胞是合成表面活性物质的主要SPS质网中合成，通过某种机制转运到高尔基复合体和多囊泡体，然后转运到板层体储其分泌肺泡表面活性物质增多，以达到辅助治疗肺水肿的作用，如：肾上腺糖皮质激素，内皮素-1，盐酸氨溴索等，而其中盐酸氨溴索具有可促进肺表面活性物质的分泌的作用，而对肺水肿没有其他干扰的治疗作用。动物分别行外源性PS灌入气管治疗和促内源性表面活性物质释放药，灌入气管治．志20045B期0灌注所致肺损伤的实验研究．中华小儿二、实验设计方案(实验设计目标,拟解决的主要问题,实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安。(一)实验设计目标，拟解决的关键问题设计目标：探讨外源性肺表面活性物质和内源性肺表面活性物质对实验性肺拟解决的关键问题：实验模型的制备。对试验性肺水肿的模型进行分组与实验(二)实验设计动物设计我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由：1)、家兔易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。2)、家兔肺相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。2、实验专业设计观察对实验性肺水肿治疗作用，观察兔子死亡时间(min)，肺系数(g／kg)，肺湿／干重比(g／g)，血管外肺水(g)等实验指标。3、实验统计设计实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于家兔编号下。具体方法：动物(2)对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。(3)重复：本实验采用的是每实验小组有20只家兔，具有一定的重复性。(4)统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。(g／kg)AB1B2B3AB1B2B3血管外肺水(g)AB1B2B3(min)AB1B2B3表2四组动物体重及模型形成时间比较(±s)组别模型形成时间(min)兔子死亡时间(min)A(n＝20)B(n＝20)B(n＝20)B(n＝20)注：基础值比较表3四组动物肺组织含水量测定比较(±s)组别肺系数(g／kg)肺湿／干重比(g／g)血管外肺水(g)A(n＝20)B(n＝20)B(n＝20)B(n＝20)注：实验值比较(5)统计数据分析本实验采用计量资料来测定各种指标的数值，所有数据均采用平均数±标准差 (±s)表示，四组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析，组间两两比较行四组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析，如各组肺系数总体均值的比(1)建立检验假设(2)计算统计量(1)建立检验假设(2)计算统计量X=(X1+X2+X3+……+Xn)/n4、实验方法设计实验技术路线A组假手术注入生理盐水肺组织含水量测定B1组直接注入肺组织含水量测定B组实验组B2组注入盐酸氨B3组注溴索，促内源性ps释放解救水水量测定定实验技术方法(1)随机抽样：随机80只正常的家兔，并分别编号，再随机平分成四组，并(2)实验分组：(3)实验手术：AB组同时取兔，称重(婴儿秤)后固定于兔台上，剪去颈部长毛(换药碗装水)。用1%普鲁卡因局麻(大约三公分长，不同点局麻)，切开颈部皮肤(*轻点，不要损伤气管和血管)，呈钝形分离出气管(分离干净)，做倒T形切口，插入气管插管并结扎固定，分离颈外静脉，静脉插管。促和困难，气管插管管口是否有粉红色泡沫样液体溢出。(5)处理措施：1)外源性肺表面活性物质(PS)的提取：膨胀，轻轻拍打后自气管内自然流出灌洗液，若灌洗液呈红色弃掉。每只肺反复灌h获乳白色物质即为PS纯品。所有操作均在常温下进行，所得PS在4℃冰箱保存，Ps加入含0．05mmolCaCl的0.1mol生理盐水超声乳化后制成混悬渡，浓度为50g22)滴注药品：当家兔出现肺水肿时(有粉红色泡沫样液体时)，B1组为外源性PS治疗组，迅同时迅速实行气管内注入同等体积的生理盐水(NS)2.0ml／kg。A组为假手术组，(6)取材：等家兔自然死亡，并记录其死亡的时间。解剖家兔胸腔，支气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。结扎处上方切断气管，将肺清理出(把心脏等清除)，切勿挤压。(7)肺组织含水量测定：采用重量分析法[7]肺系数：准确称肺重量，并计算肺系数，肺系数＝肺重量(g)/体重(kg)肺湿干重比：取左上肺叶称湿重,然后放入烤箱(80℃,48h)中烘烤至恒重,再秤干重,计算肺W/D以评估肺组织的水肿程度血管外肺水：取下右下肺并剪成两半(用2把止血钳夹住切口,避免肺内液体流出),各称湿质量;一半肺即刻剪碎,按1ml/100mg组织加入生理盐水匀浆,分别测血液和匀浆中Hb的含量,剩余组织匀浆迅速置于-70℃保存备用;另一半肺置于80℃烘箱内干燥72h至恒质量,称肺干质量;计算公式为:总肺水量指数(TLW)=(肺湿质量-肺干质量)/肺湿质量,每克湿肺含残血量=(匀浆液Hb/血液Hb)×匀浆总样本量×1.055/匀浆肺质量,湿肺含残血量=肺湿质量×每克湿肺含残血量,EVLWI=(肺湿质量-肺干质量-湿肺含残血量)/肺湿质量。(三)可行性分析:1、家兔易得到，容易侍养，在科研工作中被广泛利用。2、ps提取方法已具备，我们事先自己提取，盐酸氨溴索葡萄糖注射液市场有3、手术器材和设备均为实验室常用，手术方法我们也相对熟练。(四)预期效果:足的替代药物。2、为临床上进一步研制有关外源