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ICS65.020.01B16天津市地DB12方标准DBT1007—2020毒检测技Technicalregulationofdetectionfortomatoyellowleafcurlviruscarriedbyseedseedlingsofsolanumfruitvegetables天津市市场监督管理委员会发布前言GBT1.1-2009给出的规则起草。。单位：天津市植物保护研究所。茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒检测技术规程苗番茄黄化曲叶病毒的检测。范性引用文件(包括所有的修订版)适用于本文件。GBT试验方法。定义虱以持久方式传播，又被称为粉虱传双生病毒，是一类具有孪生颗粒形态的植物DNA病毒，广泛分布于见附录A。带病原菌进行传播的一类植物病害。仪器和试剂4.1仪器4.2试剂4.2.1总体要求NaCLgNaHPO0.18g、Na2HPO41.97g、蒸馏水1000mL，pH7.4。DNALysis缓冲液。4.2.4裂解缓冲液mMTrisHCLpHmMEDTApHSDS10μg/mLRNaseA。4.2.5乙酸钾缓冲液4.2.6凝胶电泳试剂TAEBuffer，核酸染料GoLdenview。MasterMix。5测试程序5.1检测样品5.2检测方法.2.1样品的制备准方法进行：inHDNAddHO每样本重复3次。对种苗组织DNA进行PCR扩增，目的扩增片段为543bp，可对扩增产物双向测序，与GenBank中TYLCVGenBank以验证样品种苗组织研磨物检测结果的准确性。6结果判定的PCR检验结果判定的方法见附录B：番茄黄化曲叶病毒。7样品保存茄果类蔬菜种苗样品可以其植株、幼嫩组织或DNA的形式保存，该样品需经登记后保存。番茄黄化A(资料性附录)化曲叶病毒番茄黄化曲叶病毒(TomatoYeLLowLeafCurLVirus)简称TYLCV或TY，隶属双生病毒科 (Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，是一类世界范围内广泛发生的单链环状DNA_________________________________(规范性附录)B性引物检测番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的特异性引物为：TYLCV-F：5’-ACGCATGCCTCTAATCCAGTGTA-3’；TYLCVR：5’-CCAATAAGGCGTAAGCGTGTAGAC-3’。B.2PCR反应体系(25μL)：2xTaqMasterMix12.5μL，正向和反向引物(10μmoL/L)各1μL，ddH2O10.5μL，样品DNA1μL。B品处理BPCR条件ssmin℃继续延伸10min；4℃保持。BPCR判定后取2μLPCR反应产物在1%的琼脂糖凝胶电泳后，置凝胶成像仪下观察DNA特异性条

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