2.2《土壤中分解尿素细菌分离与计数》学案况家茂

.课题2土壤中分解尿素的细菌的分别与计数考点要求1．研究培育基对微生物的选择作用，进行微生物数目的测定。2．能利用选择培育基分别细菌，运用有关技术解决生产生活中有关微生物的计数。双基过关一、理论基础1．挑选菌株(1)实验室中微生物挑选的原理：人为供给有益于生长的条件(包含营养、温度、pH等)，同时或其余微生物生长。(2)选择培育基：在微生物学中，将同意种类的微生物生长，同时和其余种类微生物生长的培育基，称作选择培育基。（3）配制选择培育基的依照依据选择培育的菌种的生理代谢特色加入某种物质以达到选择的目的。比如，培育基中不加入有机物能够选择培育微生物；培育基中不加入氮元素，能够选择培养；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培育金黄色葡萄球菌等。2．统计菌落数目（1）测定微生物数目的常用方法有和。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培育基表面生长的一个菌落，根源于样品稀释液中的一个。经过统计平板上的菌落数，就能推断出样品中大概含有多少活菌。为了保证结果正确，一般选择菌落数在的平板进行计数。别的，测定微生物数目的常用方法还有直接计数。3．设置比较设置比较的主要目的是清除实验组中对实验结果的影响，提升实验结果的。比如为了清除培育基能否被杂菌污染了，需以培育的培养基作为空白比较。二、实验设计对于土壤中某样品细菌的分别与计数实验操作步骤以下：1．取样：从肥饶、润湿的土壤中取样。应先3cm左右，再取样，将样品装入预先准备好的中。2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基将菌液稀释同样的倍数，在牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数目应显然选择培养基上的数目，所以，牛肉膏蛋白胨培育基能够作为，用来判断选择培育基能否起到了选择作用。3．微生物的与察看将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250mL)，充分摇匀，汲取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102挨次等比稀释至107稀释度，并依照由107～103稀释度的次序分别汲取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培育基、1个牛肉膏蛋白胨培育基。将涂布好的培育皿放在30℃-1-页.温度下培育，实时察看和记录。精选选择培育基中不一样形态的菌落接入含培育基的斜面中，察看可否产生如教材中图2-lO的颜色反响。4．细菌的计数当菌落数目稳准时，选用菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下，起码对3个平板进行重复计数，而后求出，并依据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三：思虑与议论1）怎样从平板上的菌落数推断出每克样品中的菌落数？2）为何分别不一样的微生物要采纳不一样的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数目，采纳的稀释范围同样吗？四：典例剖析种类一选择培育基的配制【例1】剖析下边培育基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培育基的配方中，为微生物的生长供给碳源和氮源的分别和。(2)想想这类培育基对微生物能否拥有选择作用?假如拥有，又是怎样进行选择的?种类二统计菌落数目106的培育基【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为中获取以下几种统计结果，正确的选项是( )A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取均匀值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和2墨6，取均匀值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取均匀值233种类三设置比较()【例3】用来判断选择培育基能否起到了选择作用需要设置的比较是．未接种的选择培育基．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培育基C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培育基D．接种了的选择培育基基础自测一、选择题1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这类酶要能忍耐93℃左右的高温。假如请你来找寻这类耐高温的酶，你会去哪里找寻( )A．土壤中B．海水中C．热泉中D．冷库中2．以下能选择出分解尿素的细菌的培育基是( )．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；-2-页.3.某同学在稀释倍数为106的培育基中测得平板上菌落数的均匀值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)()A．2.34×108B．2.34×109C．234D．23.44.在做分别分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培育基上挑选出大概150个菌落，而其余同学只选择出大概50个菌落。A同学的结果产生原由()①因为土样不一样②因为培育基污染③因为操作失误④没有设置比较A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④5.对于土壤取样的表达错误的选项是()．土壤取样，应选用肥饶、润湿的土壤．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌．应在火焰旁称取土壤6.以下对于从土壤中分别细菌的操作步骤中，正确的选项是( )①土壤取样②称取10g土壤拿出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③汲取0.1mL进行平板涂布④挨次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③7.以下对于测定土壤中细菌数目的表达，正确的选项是( )A．一般采纳103～107倍的稀液分别涂布B．测定放线菌的数目，一般采纳103、lO4和105倍稀释C．测定真菌的数目，一般采纳103、104和105倍稀释D．当第一次丈量某种细菌的数目，能够将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培育8.以下对于微生物的培育表达错误的选项是()A．细菌一般在30～37℃的温度下培育1～2dB．放线菌一般在25～28℃的温度下培育5～7dC．霉菌一般在25～28℃的温度下培育3～4dD．不一样种类的微生物，一般需要同样的培育温度和培育时间9.以下操作需要在火焰旁进行的一组是( )①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培育A．①②③④⑤B．②③④⑤④⑤C．③④⑤D．②③④10.以下能够判定出分解尿素的细菌的方法是( )．以尿素为独一氮源的培育基中加人酚红指示剂．以尿素为独一氮源的培育基中加入二苯胺试剂C．以尿素为独一氮源的培育基中加入苏丹Ⅲ试剂．以尿素为独一氮源的培育基中加入双缩脲试剂11.土壤取样时最好选择哪一种环境中的土壤做分别细菌的实验( )A．街道旁B．花盆中-3-页.C．农田中D．菜园里二、非选择题12.统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个，根源于样品稀释液中的一个。计数时一般选择菌落数在的平板计数。13.在做本课题实验时，一位同学在稀释倍数为106的培育基中涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这3个平板上菌落数的均匀值163作为统计结果。你以为这一结果能否靠近真切值?假如需要改良，怎样改良?14.在进行操作本课题实验时应特别注意：、、。15．在做本课题实验时，甲同学挑选出的菌落与其余同学不一样，而且他在设计实验时并没有设置比较。思虑以下问题：(1)你以为出现甲同学这类结果的原由可能是什么?(2)要帮助甲同学清除可能影响实验结果的要素，需要设置，实验方案有两种：一种方案是能够由其余同学用与甲同学进行实验，假如结果与甲同学一致，则证明甲同学，假如结果不一样，则证明甲同学存在操作或的配制有问题。另一种方案是将甲同学配制的培育基在不加的状况下进行培育，作为空白比较，以证明培育基能否遇到。(3)由此问题你得出的启迪是什么?16．在105稀释度下求出3个平板上菌落数的均匀值是63，那么每克样品中的菌落数是多少?参照答案：一、1（1）目的菌珠克制阻挡（2）特定克制阻挡(3)自养能固氮的微生物；2(1)有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。(2).稀释度细菌30-300显微镜3.非测试要素可信度无杂菌污染二、1.土壤，铲去表层土。2.培育基多于比较3.培育1ml9ml0.1mL4.30-300平均数三：思虑与议论1统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的均匀值，而后按课本旁栏的公式进行计算2这是因为土壤中各种微生物的数目（单位：株/kg）是不一样的，比如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获取不一样种类的微生物，就需要按不一样的稀释度进行分别，同时还应该有针对性地提供选择培育的条件。四：典例剖析种类一选择培育基的配制分析：碳源是供给碳元素的物质，氮源是供给氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大部分生物都能利用葡萄糖，可是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这类培育基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。答案：(1)葡萄糖尿素(2)有选择作用。因为此配方中尿素是独一氮源，所以，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。-4-页.启迪：选择培育基挑选微生物的原理：人为供给有益于目的茵株生长的条件(包含营养、温度、pH等)，同时克制或阻挡其余微生物生长。2分析：在设计实验时，必定要涂布起码3个平板．作为重复组，才能加强实验的说服力与正确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，可是，此中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，所以，不可以简单地将3个平板的计数值用来求均匀值。答案：D启迪：在设计实验时，必定要涂布起码3个平板作为重复组；在剖析实验结果时，必定要考虑所设置的重复组的结果能否一致，结果不一致，意味着操作有误，需从头实验。分析：将菌液稀释同样的倍数，在牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数目应显然多于选择培育基上的数目，所以，牛肉膏蛋白胨培育基作为比较。比较依照的原则是单调变量，所以与选择培育基同样接种、培育。答案：C启迪：比较实验是指除了被测试的条件之外，其余条件都同样的实验，其作用是