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文档简介

学习目标①掌握酶法破碎方法的选择。重难点重点：识记纤维素酶和溶菌酶的相关知识；难点：正确先用纤维素酶和溶菌酶用于生化分离。纤维素酶1溶菌酶2目录1.纤维素霉纤维素霉水解酶寡糖单糖真菌多组分酶纤维素酶是多糖水解酶的一种，能水解纤维素的β1,4-糖苷键，将纤维素分解成寡糖或单糖。纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中。细菌、真菌、动物体内等都能产生纤维素酶。一般用于生产的纤维素酶来自于真菌，比较典型的有木霉属、曲霉属和青霉属。1.纤维素霉纤维素酶反应和一般酶反应不一样，其最主要的区别在于纤维素酶是多组分酶系，且底物结构极其复杂。纤维素酶根据其催化反应功能的不同可分为内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡聚糖苷酶。内切葡聚糖酶随机切割纤维素多糖链内部的无定型区，产生不同长度的寡糖和新链的末端。外切葡聚糖酶作用于这些还原性和非还原性的纤维素多糖链的末端，释放葡萄糖或纤维二糖。β葡萄糖苷酶水解纤维二糖产生两分子的葡萄糖。1.纤维素霉由于底物的水不溶性，纤维素酶的吸附作用代替了酶与底物形成的ES复合物过程。纤维素酶先特异性地吸附在底物纤维素上，然后在几种组分的协同作用下将纤维素分解成葡萄糖。1.纤维素霉2.溶菌霉亚历山大·弗莱明于1923年发现溶菌酶，1928年首先发现了青霉素。后英国病理学家弗劳雷、德国生物化学家钱恩进一步研究改进，并成功的用于医治人的疾病，三人共获诺贝尔生理或医学奖。青霉素的发现，使人类找到了一种具有强大杀菌作用的药物，结束了传染病几乎无法治疗的时代；从此出现了寻找抗菌素新药的高潮，人类进入了合成新药的新时代。2.溶菌酶溶菌酶水解酶细菌肽聚糖溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解细菌中肽聚糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的βB-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性肽聚糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂、内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。2.溶菌酶2.溶菌酶溶菌酶广泛存在鸡蛋革兰氏阳菌3.蜗牛酶蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。蜗牛酶是很有价值的一种酶。它可以用于酵母细胞壁的破碎，因此广泛用于细胞生物学和基因工程学的研究。蜗牛酶内含常见9种酶:从蜗牛消化腺中发现有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、阿尔法淀粉酶、甘露糖酶、蔗糖酶、半乳聚糖酶、蛋白水解酶、氨基酸转移酶等多种具有生物活性的混合酶。2技能训练过渡1.酶溶法结合超声波法破碎大肠杆菌细胞1菌体准备2酶处理3超声波4检查破碎率1.酶溶法结合超声波法破碎大肠杆菌细胞操作原理大肠杆菌是革兰阴性菌，其外壁层的稳定需要Ca2+参与，利用EDTA可以清除Ca2+,破坏其稳定性；利用溶菌酶可以裂解内壁层的肽聚糖；而裂解液中加入TritonX-100可以破坏细胞膜；再经过超声波处理，可使菌体细胞

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