细胞生物学实验参考资料

细生学验线体超染与察一实目1.观动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。2.学一些细胞器的超活染色技术。二实原活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理状态所染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类内活染是以胶体状的染料溶液注入动物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的染又称超活染色它由活的动植分离出部分细胞或组织小块以料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。詹纳斯绿B是性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用染始终保持氧化状态即色状态呈绿色而线粒体周围的细胞质中这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。三实用（一）材料肝胞、人口腔皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞（二）器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。（三）试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2.詹斯绿B溶（原液）称取5詹纳斯绿B溶于mlRinger稍加微(3040℃，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。3.詹斯绿B溶液应用液）取%原液ml加入49ml溶液混匀即可。现用现配。四实操1.人腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1)取洁载玻片放3℃恒温浴锅的金属板上，2滴詹斯绿B应用染液。(2)实者用牙签宽头在自己口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染10～15min(注不可使染液干燥，必要时可再加滴染)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。(3)在倍镜下选择平展的口上皮细胞高倍镜或油镜进行观察可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构是线粒体。2.小鼠肝细胞线粒体的超活染色观察(1)用椎脱臼法处死小白鼠于解剖盘中开腹腔小鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer液反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。

(2)在净的凹面载玻片的凹穴,滴加詹纳绿应用液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体表面可充分得到氧化被色织块边缘被染成蓝绿色即—般需染0～30min)。(3)吸染液滴加Ringer溶眼科剪将组织块着色部分剪碎细或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴子载玻片上，盖上盖玻片进行观察。(4)在倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具l～个的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。3.洋鳞茎表皮细胞线粒中的超活染色观察(1)用管吸取詹纳斯绿B应染液，滴一滴于干净的载破片上，然后撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色1015min(2)用管吸去染液，加滴Ringer，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。(3)在倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据、细胞核被挤—侧细胞壁处。细观察细胞质中线粒体的形态与分布。五实报及业绘制口腔上皮细胞、洋葱鳞茎表皮细胞、小白鼠肝细胞中线粒体的形态与分布细生学验细膜通性察一实目1.了细胞膜对物质通透性的一规律。2.了溶血现象及其发生机制。二实原细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞各种物质出入胞的方式是不同的是生物界最普遍的溶剂水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散现象就是渗透渗作用是细胞膜的主要功能之一红细胞放在低渗盐溶液中水分子大量渗到细胞内可细胞胀破血蛋白释到介质中不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液这种现象称为溶血将红细胞放在某些等渗盐溶液中由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。三实用(一)材绵羊血细胞（二）器材普显微镜、普离心机、扭力天平10ml试管、10ml刻度心管、试管架，2ml注射（无需针头）5ml移液、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。

（三）试剂1．Alsever溶葡萄糖

2.05g柠檬酸钠(Na9C6H5O7.2H2O)0.89g柠檬酸（6O7.H2O）0.05g氯化钠蒸馏水调PH至.2，过滤灭菌或高压10min，置℃冰箱保存。2.0.128mol/LNaCl溶。3．mol/LNaCl溶液4．0.4mol/LNaCl溶液。3.0.128mol/LNH4Cl溶。4.0.128mol/LNH4AC溶液5.0.128mol/LNaNO3溶。7.0.32mol/L葡糖。8.0.32mol/L甘。9.0.32mol/L乙。10.0.32mol/L丙酮

0.42g100ml11.

蒸馏水。四实操1．从购买绵羊血取5ml（防止污入盛有s液中，混匀后置冰箱保存备用（周使用2.使前用s液保存的新鲜血ml，加8ml的.128mol/LNaCl溶液小心混匀，1000r/min离心5min如此次洗，最后配30%的红细胞（）液。3.取1支管，按附表中所示测试溶液，分别取样3ml作出标记后，各管均加入红细胞悬液滴，混匀后静置于温中，观察各支试管中发溶血的时间及其变。五观结1.试内液体分两层：上层浅黄色透明层色不透明为不溶（检细胞完好呈双凹盘状。2.如试管内液体混浊上带红色者称不完全溶血（＋或＋＋有分红细胞呈碎片。3.如试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋发现细胞全部呈碎片。六实建1.血离心时，试管均需在扭力天平上平衡。2.目红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配30%的红细胞悬液；3.试中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。七实报及业

表-1各溶液的溶血现象观察果编号

测试溶液

是否溶血

时间

分析原因10.128mol/LNaCl20.05mol/LNaCl30.4mol/LNaCl40.128mol/LNaNO350.128mol/LNH4Cl60.128mol/LNH4AC70.32mol/L甘油80.32mol/L乙醇90.32mol/L丙酮100.32mol/L葡萄糖11H2O书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表。目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－

细生学验酸性磷酶的示法一实目1.掌Comori法基本原理和方法。2.观酸性磷酸酶在细胞内的分布状况。二实原酸性磷酸酶能分解磷酸脂而释放出磷酸基，在PH5.0的境中，磷酸基能与铅盐反应形成磷酸铅。但因其是无色的以经过与硫化铵作用，形成棕黑色的硫化铅沉淀此就能显示酸性璃酸酶在细胞内的存在与分布。本实验的技术特点是：①用冷冻涂片和中性福尔马林固定，可避免在固定、包埋及制片过程中酶的失活保了实验稳定性②采用较短的作用时间可免细胞质内其它蛋白质及核内出现阳性假象，保证了实验的可靠性。③以姬姆萨染色的巨噬细胞为观察对象，细胞核及细胞轮廓以及细胞质中反应沉淀的颗粒都比较清晰，有助于深入理解细胞吞噬作用、浴酶体功能和分布以及溶酶体标志——酸性磷酸酶的性质。三实用（一）材料小鼠腹腔液涂(重观察巨噬细胞（二）器材高压灭菌锅、冰箱、注射器、载玻片、盖玻片及温箱。（三）试剂1.10%中性福尔马林pH6.8～7.2)甲醛10ml醋酸钠2g蒸馏水90ml2.酸磷酸酶作用液蒸馏水90ml0.2mol/L醋酸缓冲液pH4.6)12ml5%硝酸铅2ml3.2%-甘油磷酸钠4ml先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加醋酸铅溶液，另—份加甘油磷酸钠溶液，然后再两者缓缓混合，边混匀边搅匀。P＜，可加少量醋酸调节临用前配制配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀则严重影响实验结果。3.硫溶液硫化胺1ml蒸溜水9ml4.姬萨染液1:30)姬姆萨原液滴磷酸盐缓冲(PH6.8)5ml5.淀肉汤牛肉膏0.3g蛋白胨1.0g氯化钠0.5g

蒸馏水100ml高压灭菌9.9104Pa(15磅20min再加入可溶性淀6g，～℃水浴溶解后，℃箱保存备用。四实操1.取白1只每日腹腔注6淀粉肉1m1连续注3天。2.第天注射后～脱颈处小鼠打腹部皮肤暴露腹膜，再向腹腔内注射生理盐水ml，过3min后原射部位取腹腔0.10.2ml3.将腔液滴在预冷的载玻片上片～2滴玻片垂直插入玻片架迅放到冰箱内(4℃，让细胞自行铺展。4.30min后将玻片转入0%中福尔马林4冰箱内固定0min。5.自水漂洗min，把水沥干6.转酸性磷酸酶作用液中37处理0min7.自水漂洗片刻。8.硫胺处理～min。9.自水冲洗，甩干。10.用:30的姆萨染液染15min11.自水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。12.对实验将第3步的腔液涂片置0℃温中处30min使酶失活，再进6～11步的同样实验。五实结在巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗粒和班块。部分细胞内，酸性磷酸酶极为丰富，整个细胞质区域都有黑色沉淀。中性粒细胞呈现阴性反应。六实报及业1.简酸性磷酸酶显色的原理是什么？2.绘一张实验所见的巨噬细胞中酸性磷酸酶显色图。

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