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文档简介

实验三

微生物的分离与纯化

自然界中各种微生物混合生活在一起，即使取得很少量的样品也是许多微生物共存的群体。人们要研究某种微生物的特征，首先须使该微生物处于纯培养状态。微生物的平板分离技术为人类获得丰富的微生物资源以及在工、农、医、环境、动植物细胞培养等方面做出了巨大贡献。1一、实验目的：1、掌握倒平板的方法2、掌握常用微生物分离纯化技术3、学习平板菌落计数的基本原理和方法

2二、实验原理采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养基，分离真菌用马丁氏-孟加拉红培养基。依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落，从而推算样品中含有多少细菌、放线菌以及真菌的活菌数目土壤是微生物生存的大本营，种类和数量及其丰富3三、实验步骤：从土壤中稀释分离微生物的方法如下：（一）土壤悬液的制备准备1瓶土壤悬液：称0.5克土壤放入4.5ml无菌水中，手摇振荡(5-10min)，使土样分散。（二）倒固体琼脂培养基平板：取一瓶牛肉膏蛋白胨培养基熔化后，待冷至55-60℃时，倒平板。4(三-1)稀释平板分离法1、悬液稀释：（本实验取0.5g放入4.5ml无菌水中稀释）52、悬液涂布(演示):无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10－3，10－4，10－5稀释液各0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板(三个稀释度，每个稀释度涂布2个平板，共6个平板)6平板涂布7(三-2)划线分离法——平皿划线（演示）每人用1个牛肉膏蛋白胨平板做划线分离，从上次实验室环境生长的单菌种挑取划线分离8平皿划线分离法9（四）吹干将已涂布好的平皿皿盖半揭开，置于无菌台上吹干。（五）培养：待吹干后，将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于37℃培养箱培养。（六）检查结果(时间安排？)10实验要求每人倒5个板，其中普通细菌培养基3板，一涂布、一划线、一机动；马丁培养基2板：一涂布、混合11试管斜面接种1.两支试管呈“V”字形

2.拔下试管塞3.火焰上微烧一周

4.接种环灼烧、冷却5.接种、划线

6.塞上塞子，灼烧接种环12结果分析:1.计数：（牛肉膏平板取单菌落数目在30～300个左右的稀释度来计数)我所计数的平板稀释度是：

单菌落数目：

、

。2.计算：活菌数目/每克土壤＝

（计算过程）＝

菌落形成单位(CFU)/每克土壤[每克土壤中菌落形成单位数＝同一稀释度2次重复的平均菌落数×稀释倍数×10]3.对你和同伴的细菌计数结果进行分析13思考题1.你所做的涂布平板和划线平板是否较好的得到了单菌落，如果不是，请分析原因；2.怎样判断稀释涂布平板记数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？3.平板菌

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