分光光度实验讲义

试验一邻二氮菲分光光度法测定铁一、试验目的.学习如何选择分光光度分析的条件.把握邻二氮菲测定铁的原理.了解、把握722型分光光度计的构造和正确使用.学会工作曲线的制作和样品的测定二、试验原理可见分光光度法测定无机离子，通常经过两个过程，一是显色过程，二是测量过程。为了使测定结果有较高灵敏度和精确度，必需选择合适的显色条件和测量条件，一般状况下，应选择被测物质的最大汲取波长的光作为入射光，通过试验确定合适的显色剂用量、合适的溶液酸度、保证有色协作物的颜色能稳定足够的时间、排解其他组分的干扰。用于铁的显色剂许多，其中邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的显色剂。邻二氮菲又称邻菲罗琳，是测定Fe2+的一种高灵敏度和高选择性试剂，在pH=2〜9的溶液中可与Fe2+生成稳定的橙色协作物(摩尔吸光系数£=1.1X104L.mol1,cm1),在还原剂存在下，颜色可保持几个月不变。其反应式如下：橙色协作物的最大汲取峰在510nm波特长。Fe3+与邻二氮菲可以生成淡蓝色协作物，因此在加入显色剂之前，需用盐酸羟胺先将Fe3+还原为Fe2+,本试验的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3\Ca2\Mg2\Zn2+；20倍的Cr(VI)、V(V)、P(V)；5倍的C02+、Ni2\C/+等,均不干扰测定。三、仪器722型分光光度计50mL具塞比色管吸量管四、试剂.铁标准溶液：精确称取0.8634g的NH4Fe(SO4)242H2O,置于烧杯中，加入20mLi：1HC1和少量水，溶解后，定量的转移至1L容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。(含铁0.1mg/mL).邻二氮菲：0.3%(10-3mol/L)新配制的水溶液，可滴加HC1助溶.盐酸羟胺：10%水溶液（临用时配制）.NaAc-HAc缓冲溶液：50g的NaAc加入50mL冰乙酸，加水稀释至1000mL五、试验步骤.汲取曲线的制作和测量波长的选择：用吸量管吸取0.0mL和0.8疝铁标准溶液分别注入两个50mL比色管中，各加入ImLlO%的盐酸羟胺溶液，摇匀，再加入2mL邻二氮菲，5mLNaAc-HAc缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀。放置lOmin后，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440〜560nm之间，每隔10nm测一次吸光度，然后以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制汲取曲线，找出最大汲取波长。.标准曲线的制作：取6支50mL比色管，用吸量管分别加入OmL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.20mL、1.60mL的标准铁溶液（含铁0.Img/mL）,然后加入ImLlO%盐酸羟胺溶液，2mL0.3%邻二氮菲溶液和5mLlmol/LNaAc-HAc缓冲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在510nm波长下，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，测定其各溶液的吸光度，以含量为横坐标，溶液相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。.取自来水50mL,按上述步骤显色后，在其相同条件下测定吸光度，由标准曲线上查出试样中相当于铁的毫克数，然后计算其试样中微量铁的含量（g/L）六、思索题.盐酸羟胺的作用是什么？.用吸量管移取缓冲溶液时，是否需要特别精确？.假如邻二氮菲浓度太低，对试验是否影响？试验二水道水中可溶性磷酸盐的测定一、试验目的.通过试验进一步深入对分光光度计的了解.把握车目蓝分光光度法测定水中可溶性磷酸盐的方法二、试验原理在自然水和废水中，磷几乎都以各种磷酸盐的形式存在。它们分为正磷酸盐、缩合磷酸盐（焦磷酸盐、偏磷酸盐和多磷酸盐）和有机结合的磷酸盐。它们存在于溶液中、腐质粒子中或水生生物中。这里所测的可溶性磷酸盐是指通过0.45微米的滤膜的滤液中所含的磷。在测定污水中的可溶性磷酸盐时，首先得将污水过滤（滤膜在使用前应先在纯水中浸泡24小时，其他玻璃仪器也应用1+5盐酸浸泡洗涤洁净）。过滤后的水样中的磷酸盐与酸化的铝酸镀溶液生成淡黄色的磷铝杂多酸，遇氯化亚锡被还原成一种深蓝色络合物，通过分光光度计进行测定。三、仪器722型分光光度计50mL具塞比色管吸量管四、试剂.磷酸盐标准贮备溶液：称取4.390g磷酸二氢钾（KH2Po4）溶于纯水中,并定容为1000mL,加1〜2mL甲苯保存。.磷酸盐标准溶液:吸取5.00mL磷酸标准贮备溶液,用纯水稀释到1000mL。.0.5%酚献指示剂溶液.lmol/L硫酸溶液.铝酸钱溶液：称取50g铝酸钱溶于250mL纯水中，当心的把560mL浓硫酸缓缓加入到800mL纯水中，待冷却后，加入铝酸盐溶液，并用纯水稀释到2L。.2.5%氯化亚锡甘油溶液：称取2.5g氯化亚锡（SnCb2H20）,置于100mL甘油中，在温热水浴上促使其溶化，混匀后贮于玻璃瓶中，可长期使用。五、试验步骤.向7支比色管中分别加入2.0mL铝酸镂溶液，用蒸储水稀释至25mL刻度，摇匀。.分别向7支比色管中加入0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL的磷酸盐标准溶液和水样，用蒸储水稀释至50mL刻度，摇匀。.混匀后再分别向7支比色管中加入0.25mL（5滴）氯化亚锡甘油溶液，混匀后放置10〜12分钟。.在690nm波长下，用1cm比色皿，测定各溶液吸光度（为了获得较好结果