乙肝表面抗原测定

乙肝表面抗原测定综述乙型肝炎病毒：机体感染HBV后血清中首先出现的标志物，可作为乙肝的早期诊断和普查HBsAg无传染源性而有免疫原性，可刺激机体产生抗-HBs通过血液检测是唯一检测是否感染乙肝病毒的唯一途径乙肝病毒是通过血液传播，主要通过母婴，血液和性传播。日常生活和工作接触不会传播乙肝病毒。假如HBsAg、HBeAg和抗HBc三项阳性〔即为大三阳〕，其血液就有高度传染性2021/1/122凝集反响2021/1/1232.间接凝集反响：反向间接凝集根本原理：将抗体致敏的红细胞与样本中相应抗原作血凝试验，观察红细胞凝集现象，用以判断样本中相应抗原的有无及其效价。凝集反响2021/1/1243.协同凝集反响根本原理：以金黄色葡萄球菌为载体；将特特异性抗体先结合至金黄色葡萄球菌外表；其Fab段游离与菌体外表，遇到相应抗原时与之结合；即可导致金黄色葡萄球菌凝集成块，称为协同凝集试验。凝集反响2021/1/125沉淀反响2021/1/126沉淀反响可溶性抗原〔如细菌浸出液、细胞裂解上清液及血清蛋白等〕与相应抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反响。参与沉淀反响的抗原称为：沉淀原参与沉淀反响的抗体称为：沉淀素沉淀反响2021/1/127凝胶沉淀试验单向琼脂扩散试验：抗原或抗体这两种成分中只有一种扩散，将抗体与琼脂混合，将抗原置于凝胶孔中，抗原则呈辐射状扩散，在孔的周围与抗体结合，在比例适宜的地方形成肉眼可见的沉淀环。当抗体的浓度一定时，抗原的浓度与形成沉淀环的直径成正比。双向琼脂扩散试验：双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。该反响是将抗原和抗体参加同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进展互相扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。沉淀反响2021/1/128免疫电泳技术对流免疫电泳：双向琼脂扩散试验+电泳火箭免疫电泳：单向琼脂扩散试验+电泳免疫电泳：双向琼脂扩散试验+区带电泳沉淀反响2021/1/129酶标记免疫测定技术2021/1/1210酶联免疫吸附剂测定法简称酶联免疫法，或者ELISA法。是固相酶免仪测定中最具代表性的一种既可检测抗原又可检测抗体3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物2021/1/1211双抗体夹心法酶联免疫吸附剂测定法根本原理：将抗体包被到固相载体上，使待测标本中的相应抗原与抗体结合，然后再与酶标抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗去多余未结和成分，加底物后的显色，根据显色反响的强度确定待检抗原的含量。2021/1/12122.双位点一步法根本原理：在双抗体夹心法根底上使用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时参加进展反响，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤后，即可参加底物，显色后进展抗原的定性或定量测定。酶联免疫吸附剂测定法2021/1/12133.竞争法根本原理：酶标抗原和待检抗原对固相抗体具有一样的结合力，在同一反响体系中两者竞争结合固相抗体。假设将固相抗体和酶标抗原固定限量，且前者的结合位点少于酶标和非酶标抗原的分子数量和，免疫反响后，结合与固相酶标抗原量与标本中待检抗原含量成反比。酶联免疫吸附剂测定法2021/1/1214荧光免疫分析技术2021/1/1215荧光免疫显微技术用荧光素标记抗体；与特异性抗原作用；除去游离的荧光抗体，借助显微镜观察；检测固定组织上的相遇抗原或者血清中的相应抗体。2021/1/12161.直接法根本原理：将特异性荧光抗体直接滴加于待检抗原标本上，直接与相应抗原反响，检测未知抗原。荧光免疫显微技术2021/1/12172.间接法根本原理：用荧光素标记抗球蛋白抗体，鉴定未知抗原或未知抗体；先是未标记抗体〔一抗〕与标本中的抗原反响；再用已标记的二抗与一抗反响；通过观察荧光现象，从而到达检测未知抗原或抗体的目的。荧光免疫显微技术2021/1/12183.补体结合法根本原理：利用补体结合反响的原理，用荧光素标记抗补体的抗体，测定未知抗原或抗体先是标本中的抗原与抗体反响形成抗原-抗体复合物后，参加补体与之结合。再加上抗补体的荧光素标记抗体，通过荧光现象检测抗原或抗体荧光免疫显微技术2021/1/1219放射免疫技术2021/1/1220放射免疫根本原理：标记抗原〔Ag*〕和非标记抗原〔Ag〕对特异性抗体〔Ab〕的竞争结合反响2021/1/1221免疫放射根本原理：以过量的放射性核素标记抗体与待测抗原进展的非竞争性结合反响；待充分反响后，除去游离的标记抗体；Ag-Ab*复合物的放射性强度与待测抗原呈正比关系。2021/1/1222免疫放射技术类型1、单位点IRMA过量标记抗体与待测抗原反响，形成抗原-标记抗体复合体反响平衡后别离剩余的标记抗体测定上清液的放射量〔放射强度与待测抗原的量呈正比关系〕2、双位点IRMA〔双抗原夹心法〕固相抗体与待测抗原结合，形成固相抗体-待测抗原-标记抗体复合物别离游离的标记抗体，测定固相上的放射性强度2021/1/1223金标记免疫技术2021/1/1224斑点免疫金层析试验免疫金测试区：特异抗体参照区：抗免疫金抗体2021/1/1225发光免疫技术2021/1/1226化学发光酶免疫测定根本原理用参与催化某一化学发光反响的酶来标记抗原或抗体与固相化的抗体或抗原试剂反响形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物洗涤后参加发光底物，酶催化和分解底物发光传送至计算机数据处理系统计算出测定物的浓度

发光免疫技术2021/1/1227化学发光酶免疫测定

发光免疫技术2021/1/1228化学发光免疫测定根本原理用化学发光剂直接标记抗原或抗体〔化学发光剂标记物〕；与待测标本中相应抗体或抗原、磁颗粒性的抗原或抗体反响；通过磁场把结合状态〔沉淀部分〕和游离状态的化学发光剂标记物别分开来；参加发光促进剂进展发光反响；通过对发光强度的检测进展定量或定性检测。

发光免疫技术2021/1/1229电化学发光免疫测定

是电化学发光和免疫测定相结合的产物。

发光免疫技术2021/1/1230新技术2021/1/1231实时荧光定量PCR〔FQ-PCR〕FQ-PCR是一种实时定量检测技术,融汇了PCR的灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术的准确定量等优点。根本原理是利用TaqDNA聚合酶的5'-3'外切核酸酶活性,在扩增的同时降解杂交于扩增区域内的探针,使连接于杂交探针的荧光淬灭基团和荧光发射基团别离而产生荧光,因此荧光强度的变化能反映扩增产物量的变化。2021/1/1232基因芯片基因芯片是近几年生命科学研究领域的一项新检测技术，它是指固定基质上集成各种可以作为受体的生物信息，利用受体与连接物间的反响来进展生物学的检测。主要包括蛋白芯片和基因芯片。蛋白芯片是将位置和构造的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗体按预先设计好的方式固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上组成密集的分子排列，当荧光、免疫金等标记的靶分子与芯片上的探针分子结合后，通过一些定量检测方法对标记信号的强度进展检测，从而判断样品中的靶分子的数量，到达一次实验同时检测多种生物样品的目的。2021/1/1233微粒子酶免疫分析(MEIA)

MEIA检测HBsAg是目前世界上检测乙型肝炎病毒标志物的金标准，采用顺磁性微粒作为固相载体，用稳定的4-甲基磷酸伞型酮(MUP)测出荧光发光的强度来