微生物检验标本的采集

微生物检验标本的采集第1页/共33页微生物检验标本的采集第2页/共33页1.为感染的诊断提供依据2.为抗感染治疗提供参考3.临床流行病学调查微生物检验的一个重要功能就是进行细菌耐药监测，以指导临床合理使用抗生素，并制定合理的用药方案。临床微生物检验的主要功能微生物检验的作用第3页/共33页标本采集的重要性正确采取、处理与运送细菌培养标本是细菌检验成功的关键，是微生物检验分析前质量控制的重要内容。若标本采取或处理不当，造成污染，导致错误的检验结果，给临床造成误导，会延误对患者的正确治疗，造成严重后果。

第4页/共33页发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查。尽量在抗菌药物使用前采集标本。标本采集时应严格执行无菌操作，避免污染。标本采集后应尽快送至实验室以提高检出率。盛标本容器须经灭菌处理。送检标本应注明来源和检验目的，以便选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物。标本采集和运送的基本原则第5页/共33页

常见的微生物检查标本一、血液

二、脑脊液三、其他无菌体液

四、尿液五、痰及下呼吸道标本

六、分泌物脓汁七、粪便

八、咽拭子九、生殖道标本

十、组织标本第6页/共33页一、血培养送检指征1．发热（≥38℃）或低温（≤36℃）2．怀疑有菌血症或脓毒症如休克、寒颤3．白细胞>10×109/L4．血小板减少5．皮肤粘膜出血6．昏迷7．多器官衰竭8．严重的局部感染9．呼吸频率加快等

第7页/共33页血培养采集的时机尽可能在用抗菌药物前；尽可能在寒战时或发热高峰前1小时采集血液，这个时候是菌血症细菌入血的高峰期。第8页/共33页血液标本采集

多次采集：成人一套血培养应包括一个需氧瓶和一个厌氧瓶，儿童厌氧菌感染比较少见，只用一个需氧瓶。菌血症患者病原菌周期性出现于血液中，病原菌浓度处于相当低的水平，因此一次血培养应在30-60分钟内于不同部位采集2～3套血培养（每一套标明采血位点），以提高检出率。如果培养48h以后为阴性，若临床怀疑为菌血症的应在24h内再连续采集三次血培养标本。血量：成人每瓶量8-10ml；儿童3-5ml；婴儿1-2ml。

第9页/共33页：采集方法

①选择静脉和穿刺点，75%酒精从中心点向外旋转消毒皮肤，再用碘酊按同样方法消毒，待干后用用酒精棉球擦去碘迹；②去除培养瓶封帽，用75%酒精棉球消毒橡皮塞(不可用碘酒消毒)，放置60秒待干；

③用无菌棉棒清除橡皮塞子表面剩余的酒精，用采血针采集需要血量注入瓶中，轻轻颠倒混匀；

④采集后立即送检，不能立即送检的于室温保存，不可冷藏。第10页/共33页

血液注入顺序1.如果用无菌针管抽采血量够20毫升：先打入厌氧瓶再打入需氧瓶（因为有的厌氧菌在有空气的情况下很容易死亡）采血量不够20毫升：先打入需氧瓶，满足需氧瓶10毫升的血量，剩下的打入厌氧瓶。2.如果用真菌采血的软管，应先采集需氧瓶。第11页/共33页

血培养阳性的临床意义1.培养出革兰阴性菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等时，多数可以确认为病原菌；2.培养出凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、芽胞杆菌等时，感染？污染？第12页/共33页

二、脑脊液培养标本的采集采集对象及时间：疑为细菌性或真菌性骨髓炎的患者；疑为伤寒感染的患者；最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3-5ml，分装到3个无菌小瓶中（各1-2ml）。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml。注意事项：如不能及时送检不可冷藏，天气寒冷应注意保温送检，以免病原菌死亡影响检出率。第13页/共33页14三、其他无菌体液的采集临床常用于培养的无菌体液包括胸腔积液、腹水、胆汁、心包积液、关节液、鞘膜液等。无菌体液细菌培养的价值远高于有菌部位标本。采集时间：

①抗生素使用前②停止用药1-2天后③下次用药前④血药浓度较低时抽取第14页/共33页无菌体液的采集方法①2%碘酊充分消毒皮肤，用注射器以无菌操作方法抽取或引流体内可疑感染部位的体液；②标本采集量应＞1ml。胸腔积液、腹水可抽取10ml,心包液、关节液等可抽取2～5ml。③标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检，也可将抽取液直接注入血培养瓶送检。注意事项：不能立即送检时于室温放置，不得冷藏，勿以拭子送检。15第15页/共33页四、尿标本的采集采集指征(1)有典型的尿路感染症状；(2)肉眼脓尿或血尿；(3)尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性；(4)不明原因的发热，无其他局部症状；(5)留置导尿管的患者出现发热；(6)膀胱排空功能受损；(7)泌尿系统疾病手术前。

第16页/共33页尿标本的采集（1）（1）清洁中段尿：嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗阴部，再用清水冲洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排去，中段尿约10-20ml直接排入专用的无菌容器中，及时送检和接种。（2）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦．患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难婴儿的尿标本采集。第17页/共33页尿标本的采集（2）(3)直接导尿：按常规方法对会阴局部进行消毒，用导尿管直接经尿道插人膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本的污染。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染。(4)留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。长期留置导尿管的患者应在更换新管后留取尿标本。注意事项：如不能及时送检不可冷藏。第18页/共33页五、痰及下呼吸道标本采集(1)1自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应≥1ml。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的10%NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。第19页/共33页痰及下呼吸道标本采集(2)2支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按相应操作规程采集，采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。其中气管穿刺法仅用于昏迷患者。3小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。第20页/共33页痰及下呼吸道标本检查注意事项对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；如不能及时送检，应将标本暂存于4℃，但放置时间不可超过24h。运输时勿置于冰块中。第21页/共33页

六、分泌物、脓汁的采集①开放性脓肿：以无菌生理盐水或75%酒精拭去溃疡表面渗出物，抽取脓液至于无菌杯中送检；或用无菌棉签擦取溃疡基底分泌物后放入无菌试管送检；②封闭性脓肿：碘酒消毒皮肤黏膜表面，穿刺中心部位抽取3-10ml注入无菌容器或血培养瓶送检。深部脓肿在送需氧培养的同时应考虑送厌氧培养，厌氧培养标本应隔绝空气送检；③脓疱或水疱：以75%乙醇消毒、干燥，用针头挑破，拭子采集疱液和基地层细胞标本送检；④瘘管内脓液：先用灭菌棉拭子挤压瘘管弃去前端脓液，再收集脓汁。第22页/共33页

注意事项①烧伤创面、脓肿标本不应采集表面或表皮组织；②不提倡采集烧伤或动物咬伤12小时内的伤口，除非存在感染指征；③当创伤出血时，敷用药物2h以内不应采集标本，此时获得阳性结果的机会很少。第23页/共33页七、粪便标本采集的时间①腹泻病人在急性期用药前采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内采；②胃肠炎在急性期6h内采集新鲜脓血便。有腹泻的病人，在送培养标本的同时可以送细菌涂片检查。抗生素相关性腹泻，培养是阴性，但涂片检查却可以看到细菌比例失调，涂片临床意义大于培养。第24页/共33页粪便标本的采集方法①自然排便法：挑取脓血、粘液便2-3g，液体便采集絮状物2-3ml，置于无菌杯中送检；②直肠拭子法：将无菌拭子用生理盐水湿润后插入直肠4-5cm处（幼儿2-3cm）在肛门括约肌处柔和旋转，见到拭子上明显带有粪便插入无菌试管送检。注意事项：

①除排便困难外，不推荐使用拭子；②标本不能混入尿液，消毒剂或者化学药物；③腹泻患者建议多次送检以确定致病菌。第25页/共33页

八、咽拭子标本的采集

目的：培养和鉴定引起咽炎的病原菌，不能反映下呼吸道感染的情况。方法：标本采集应在用药前，最好在清晨，嘱患者用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使悬雍垂向外牵引，将咽拭子超过舌根到达咽后壁或悬雍垂的后侧，在咽部肉眼见明显发红或有假膜处、两侧腭弓、咽后壁或两侧扁桃体反复涂抹，应避免接触舌部和口腔粘膜，消毒试管口，将拭子插入试管，塞紧送检。

第26页/共33页第27页/共33页九、生殖道标本采集方法(1)①宫颈分泌物：无菌拭子插入宫颈口1-2cm并旋转一周，停留大约10s取出，放回无菌试管送检；②阴道分泌物：拭去过多分泌物，以无菌拭子采集，放入无菌试管送检；③女性尿道分泌物：先拭去尿道口渗出物，以无菌拭子插入尿道在耻骨联合处按摩尿道，放入无菌试管送检；④男性尿道分泌物：清洗尿道口，以无菌拭子插入尿道2-4cm旋转后停留20s，取出拭子放入无菌试管送检；也可用挤压方法从尿道口挤出渗出物，以拭子送检；

第28页/共33页⑤前列腺分泌物：以肥皂水和清水清洗尿道口及附近皮肤，直肠按压按列腺获取分泌物以无菌杯采集或用无菌拭子送检；⑥盆腔感染标本：在后穹窿通过穿刺采集标本。注意事项：恶露标本不作为培养标本。

生殖道标本采集方法(2)第29页/共33页十、组织标本的采集采集时间：①浅表皮肤黏膜：使用抗生素前采集②深部组织：手术室后内窥镜检查时采集采集方法：无菌操作留取标本于无菌杯中送检注意事项：

严格无菌操作，少量标本应滴加无菌生理盐水保持湿润。第30页/共33页小结

微生物标本在标本采集前、中、后必须保证无菌，否则无法真实客观地反应病人情况。只有保证标本采集的质量，才能为提高微生