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ICS9g.Lg0DB32江苏省地方标准DBtZTtZg—Z0Z0Technicalspecificationofdetectingwhite-spotsyndromevirus(WSSV)bydiatedisothermalamplificationLAMP江苏省市场监督管理局发布前言州大学提出并归口。LAMP方法。LAMP、蟹白斑综合征病毒的鉴定及其检疫。范性引用文件GBT682分析实验室用水规格和试验方法SCT8水生动物产地检疫采样技术规范定义文件。增Loop-mediatedisothermalamplification(LAMP)4试剂和材料4.1水4.2模板制备缓冲液4.3BstDNV聚合酶UpL能在反复冻融或经历温度剧烈变化情况后使用。4.4dNTPs混合物。4.5染色剂0×SYBRGreenI，-20℃避光保存。4.6引物AT4.7阳性对照4.8阴性对照主要仪器和设备移液器。成像仪或紫外灯。锅。6.1取样2制样体积(μL)10×反应缓冲液510μMdNTPs110μMFIP210μMBIP210μMF310μMB3灭菌双蒸水6.4配制完全反应预混液RL无酶反应预混液加1μLBstDNA聚合酶混匀，配制完全反应预混液。6.5加样按每管24μL完全反应预混液，分别在对应管中加入待检样品模板1μL、阳性对照pET-28a(+)-234质粒1μL、阴性对照pET-28a(+)空载质粒1μL，混匀。6.6孵育将上述PCR管置于高精度恒温仪中，于63.0℃±0.2℃反应55min。6.7染色LAMP扩增反应结束后，取反应液1μL，加入到含有38μL无菌双蒸水、1μL100倍稀释的10000×SYBRGreenI的200μLPCR管中，混匀后室温放置3min，置于紫外灯或凝胶成像仪下观或器械污染。常。A.1模板制备缓冲液A.2SYBRGreenIA.3TE缓冲液(p
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