急性毒性二军医大学新药评价中心新药评价

急性毒性二军医大学新药评价中心新药评价第1页/共31页临床前毒理学评价目的意义

新药评价的核心内容之一

目的:确保临床用药安全超过限量、改变应用范围或用药途径变成毒物

1985--1994,收审新药近四千种,已批准上市

约占50%,而另外50%未被批准上市新药中,有相当一部分就是因毒理学评价没有通过第2页/共31页毒—无处不在

1274宋慈指出万物皆毒

美国“化学文摘”登记化学品约有一千万种,美国每年投放市场新化学品约一千五百种左右

1992年联合国环境与发展大会将有毒化学品列为二十一世纪全球七大环境问题之一

第3页/共31页药害事件

1935-1937

美国

二硝基酚

减肥

白内障、骨髓抑制,死亡

177人

1937

美国磺胺酏剂

消炎尿毒症、肾衰，死亡107人1954-56法国有机锡抗感染207人视力障碍、其中102人死亡1959-62欧日反应停镇静畸胎，12000多人1966-72日本氯碘喹啉肠道感染万余人失明或下肢瘫痪1937-59美国黄体酮先兆流产男性化,

600多人第4页/共31页临床前毒理学评价成功例子

化学物质致癌、致畸、己烯雌酚防流产而使子代女性出现阴道癌致癌、致畸、生殖及三代生殖试验青霉素严重过敏反应动物模型—豚鼠

第5页/共31页临床前毒理学评价的局限性

新药本身

新药不断地改变着化学结构和药理毒理学特征,不同于已有的老药,因而也往往超出人们原有的知识、经验和评价手段所达到的预测能力

第6页/共31页临床前毒理学评价的局限性现有评价手段不能完全适应“新药”评价需要

动物实验缺点

种属差异

数量有限

品种单一

健康模型剂量太大第7页/共31页临床前毒理学评价总的要求找出毒性剂量Toxicdosage确定安全剂量范围

Safetymargin毒性反应Toxicreaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,

持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性

寻找毒性反应靶器官Targetorgan

毒性反应是否可逆Reversibility确保临床用药安全第8页/共31页急性毒性试验目的意义基本内容和要求急性毒性LD50常用计算方法有关问题第9页/共31页急性毒性试验

目的意义

了解新药急性毒性强度

计算新药相对毒性参数

为临床毒副反应监护提供参考依据

为长期毒性、蓄积性毒性和特殊毒性试验选择剂量提供依据

其它方面

第10页/共31页新药急性毒性的强度

表.化学物质的急性毒性分级标准(WHO,1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分级ig大、小鼠LD50

吸入大、小鼠LC50

涂皮兔LD50

人口服可能的

(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━极毒<1<10<50.06剧毒1-5010-1005-444中等毒51-500101-100045-35030低毒501-50001001-10000351-2180250实际无毒>5000>10000>2180>1200━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*吸入毒性LC50指中毒栏中的浓度,一次中毒2-4小时,观察24天

第11页/共31页新药急性毒性的强度

表.欧共体对化学物的毒性分级━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━动物及给药途径剧毒毒有害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠LD50ig(mg/kg)≤2525-200200-2000大鼠或兔经皮LD50(mg/kg)≤5050-400400-2000大鼠LC50(mg/L/4hr)≤0.50.2-22-20━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

第12页/共31页相对毒性参数

治疗指数TI=LD50/ED50安全系数SF=LD5/ED95可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99安全范围SM=(LD1/ED99-1)X100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本无害量ED95基本有效量LD1肯定无害量

ED99肯定有效量第13页/共31页为临床毒副反应监护提供参考

中毒症状起始时间持续时间恢复时间对抗试验为临床急救提供依据

第14页/共31页急性毒性试验观察动物反应指标

中毒部位毒性症状表现中枢神经系统

呆滞:对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应过敏、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、共济失调

植物神经系统瞳孔缩小、放大;分泌增多，如流涎、流泪

呼吸系统鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等心血管系统心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱胃肠系统气胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色生殖系统乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等皮肤、毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起粘膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀眼睛上睑下垂、眼球突出混浊其他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等

第15页/共31页为长毒、蓄毒试验选择剂量提供依据

长期毒性剂量设计LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄积性毒性剂量设计1/10LD50,然后按等比级数1.5倍逐渐递增第16页/共31页为特殊毒性试验选择剂量提供依据

生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD致突变试验啮齿类动物微核试验高剂量为1/2LD50果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为1/2LD50和1/4LD50精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2LD50

动物短期致癌试验高剂量应是MTD主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性的LD50

第17页/共31页其它方面

系列化合物的合格率分析(除理化性质为主外)也参考LD50复方中药物的相互作用,有时也通过拆方及合用的LD50来判别相互作用的性质第18页/共31页基本内容和要求---动物啮齿类----小鼠或大鼠非啮齿类----犬或其它一类药至少必须用二种动物(啮齿类及非啮齿类各一种,其中非啮齿类宜用Beagle犬);其它类酌情用二种动物小鼠18-22g,同次体重相差不超过4g;大鼠120-150g,同次体重不超过20g;犬用成年犬♀♂各半

第19页/共31页基本内容和要求---给药途径一类药及可溶于水的至少用两种给药途径,其中一种必须是临床给药途径其它类至少有一种临床给药途径实验动物上无法进行时,则作特殊说明,可用别的给药途径第20页/共31页基本内容和要求---剂量和分组

小动物一般分4-6个剂量组,组距0.65-0.85,求出LD50大动物可用50%等量递升法,一般用6条犬,求出ALD和MTD

第21页/共31页基本内容和要求---给药容积

不等浓度等容量给药常规给药容量为:小鼠ig0.2-0.4ml/10g,ip、sc和iv0.1-0.2ml/10g大鼠ig1-1.5ml/100g,ip、sc和iv为0.5-1ml/100g

第22页/共31页基本内容和要求---观察记录

给药当天,尤其是药后4h内应严密观察并记录,然后每天上下午各一次,连续观察7-14天详细记录动物毒性反应情况和死亡情况,中毒症状,中毒发生时间、持续时间、恢复期及动物最短死亡时间、最长死亡时间和平均死亡时间

死亡动物应及时进行尸检,记录病变情况;若肉眼可见变化时则需进行病理检查第23页/共31页基本内容和要求---结果处理

实验资料按下表列出,用Bliss法计算LD50。必要时求出不同性别LD50

表.XXX急性毒性结果及LD50计算━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━剂量对数剂量动物数死亡动物数死亡率机率单位LD50及可信限(mg/kg)(X)(只)(只)%(Y)(mg/kg)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━第24页/共31页基本内容和要求---MTD测定

最大允许浓度和最大允许容积仍未测出LD50,可只求MTD值。方法：一次给20只动物,连续观察7-14天,未见任何动物死亡,则MTD＞XXg/kg。若仅有个别死亡,则宜写成LD50>XXg/kg。iv要求

pH5-8，速度：大、小鼠

10-20s。ig时空腹,即禁食12-16h左右第25页/共31页表.急性毒性试验常用容量和最大容量(ml)

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━给药途径小鼠大鼠豚鼠家兔狗

ig0.2-1.01-41-55-1050-100ip0.2-1.01-32-55-105-15im0.1-0.20.2-0.50.2-0.50.5-12-5iv0.2-0.51-21-53-1035-50sc0.1-0.50.5-10.5-21-33-10━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*小鼠指20g,大鼠200g,豚鼠200g,兔2.5kg,狗10kg,前者为常用量,后者为最大容量第26页/共31页急性毒性LD50常用的统计方法白仑氏法(Behren'smethod)(累计法)密勒和滕特尔二氏法(MillerandTaninter'smethod),也叫目测法、概率法