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文档简介

江苏省市场监督管理局发布ICS65.020.30江苏省地DB32方标准DBT3685—2019tectiontechnicalregulationforPorcineSapelovirus前言GBT草。草单位：江苏省农业科学院。猪萨佩罗病毒检测技术本标准规定了猪萨佩罗病毒的核酸检测(RT-PCR法)、血清学检测(间接ELISA方法)等要求。规范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修订单)适用于本文件。GBT682分析实验室用水规格和试验方法NY/T541动物疫病实验室检验采样方法语和定义PorcineSapelovirus(PSV)。4核酸检测(RT-PCR法).1材料准备PCR引物P15`-GAGAAGGTAAAGATGGGCAAAAC-3`和P25`-AATACAGGATGACACAGGAAGGG3`(见附录B)。PCR相关试剂。猪萨佩罗病毒阳性病料RNA提取物反转录为cDNA作为阳性对照，水作为阴性对照。高速离心机(10000r/min)、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽凝胶成像系统(或紫外投射仪)、移液器等仪器。.2操作步骤4.2.1DNA模板制备书)，并反转录成cDNA(利用反转录试剂盒)，保存备用。4.2.2PCR4.2.3电泳制备1%琼脂糖凝胶，内加适量溴化乙锭或其替代物，取PCR产物10μL~20μL分别与适量加样缓冲液混合后，加样到电泳孔中，9V/cm恒压下电泳15min~30min。将电泳好的凝胶放到紫外投射仪.3结果判定R.4废弃物处理和防止污染的措施过程中的废弃物，应做好无害化处理，检测过程中防止交叉污染的措施见附录A。5血清学检测(间接ELISA方法)料准备C板及其他必要的溶液和酶标仪、移液器等仪器。待检血清样品采集于疑似患病猪场。作步骤L液体，加入洗涤液200ul/孔，室温下浸泡5min，甩去洗涤液，再重新脂乳封闭液200μL，37℃作用2h。按5.2.2步骤洗涤四次。L5.2.6加入底物，每孔加100μL，室温避光显色8min。终止反应，每孔加入50μL终止液终止反应。测定光吸收值(OD)，在酶联免疫检测仪上于4

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