显色条件的确定课件

1显色反应

6.3显色反应与分析条件的选择2显色剂3显色条件的确定5测定中的干扰以及消除方法4测量条件的选择1为什么显色？官能团强吸收直接测定UV-VIS官能团弱吸收衍生化反应UV-VIS显色反应通常通过显色反应生成吸光系数大的有色物质进行测定，以提高灵敏度332+桔红色510邻二氮菲有机物质无机物质1显色反应

被测组分转变为有色化合物的反应2对显色反应的要求

选择性好，显色条件易于控制，重现性好；灵敏度高，一般ε>104;生成的显色化合物稳定；显色化合物与显色剂的颜色差异大，显色剂在测定波长处无明显吸收,对照性好,Δmax>60nm32显色剂无机显色剂：有机显色剂：形成的络合物稳定、选择性好，灵敏度高等，常用5有机显色剂CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：双硫腙，能与20多重金属离子形成有色鳌合物NN型：丁二酮肟邻二氮菲磺基水杨酸63显色条件的确定——单因素试验法CRCR1）显色剂用量（λMAX

CM、pH一定）作A~CR曲线，寻找适宜CR范围ACR

一般选择线性范围内有最大吸光度、且显色剂用量最少的点。在测定波长一定的条件下，影响显色反应的因素有：显色剂用量、pH、温度、反应时间、干扰组分等

7pH3～8为适宜的酸度范围邻二氮菲－亚铁反应完全程度与pH的关系

9固定CM、CR，作A~pH曲线，寻找适宜pH范围。pH1<pH<pH2ApHpH1pH2103)显色温度及显色时间(CM、CR、pH一定)作A~T曲线，寻找适宜反应温度。ATATATAtAt反应时间的选择:作A~t曲线，寻找适宜反应时间。114测量条件的选择无干扰，选择max有干扰时1)测量波长的选择2)待测溶液吸光度的选择控制A=0.15~1T=70%~10%方法1、非单色光影响小2、灵敏度高A选择C选择LAmax133)参比液的选择原则：扣除比色皿、样品基体（非待测组分）和显色剂的吸收以显色反应为例进行讨论M+R=M-Rmax试样 显色剂溶剂吸光物质参比液组成无吸收无吸收光学透明溶剂基体吸收无吸收吸收不加显色剂的试液无吸收吸收吸收显色剂+溶剂基体吸收吸收吸收吸收显色剂+试液+待测组分的掩蔽剂若欲测M-R的吸收maxA（样）=A（待测吸光物质）+

A（干扰）+A（池）A（参比）=

A（干扰）+A（池）14例:邻二氮菲光度法测水中的Fe，若显色剂及其他试剂有颜色，参比溶液为不含Fe的溶剂+所有试剂。若待测样品中有干扰组分与显色剂有反应,掩蔽干扰组分，参比溶液为待测样品+所有试剂+干扰组分掩蔽剂参比溶液选择举例151、绝对法：测定样品的吸光度，由A=εcL求出c，但须知吸光系数ε、光程L2、标准对照法：在同样条件下分别测定标准溶液（浓度为已知c标）和样品溶液的吸光度，然后求出被测样品的浓度3、标准曲线法：校正4、回归分析法：在一定条件下，测定已知浓度的多个不同样品的吸光度，用最小二乘法拟合出线性方程，再测定未知样品的吸光度，利用拟合方程求出被测样品浓度5、解联立方程组：利用吸光度的加和性，求多组分的浓度6、双波长分光光度法：自学7、示差分光光度法：透光率调零和100%的方法不同用cs>cx的标准溶液调T=0%或用cs<cx的标准溶液调T=100%6.4吸光光谱法的定量方法单组分测定多组分测定171单组分的测定：标准曲线法微量铁的测定氨基酸的测定邻二氮菲法茚三酮法蛋白质的测定考马斯亮蓝法总磷的测定磷钼蓝法营养盐的测定…….18定量校正目的：建立测定的分析信号与被分析物浓度之间的关系。一般用与被分析物质相同的标准试样进行校正。①工作曲线法（外标法）：是一种最基本的方法。用分析物的纯样准确配置一系列已知浓度的标准试样，测得每一浓度对应的吸光度A后，以A对浓度C作图。A=Kc19②标准加入法（增量法）——能减少或消除基体效应的影响将已知量的标准试样加入到一定量的待测试样中，测得试样量和标准试样量的总响应值。具体做法：将一系列已知量待测物的标准样品分别加入到几等份的待测样品中，配制成浓度为(cx+0)，(cx+c1),(cx+c2),(cx+c3)……..，得到和待测样品有相同基体的标准系列(加标，spiking)；通过仪器分别测量以上系列的响应值S0，S1，S2，S3，S4……；以标样浓度c对响应信号S作图，再将直线外推与浓度轴相交于一点(下图)，求得样品中待测物浓度cx。21cx0.00.20.0102030-10浓度，cAA2A3A4A10.40.60.81.01.2

当样品量很少时，可在一份样品中加标，加一次作一次测量，可得到上述方法相同的结果；

当觉得上述过程麻烦时，可只加标一次，分别测量样品和加标样品的仪器响应，再直接通过公式Cx=CsAx/(AT-Ax)计算222多组分的测定解联立方程法AXY12根据吸光度加合性原则解联立方程，可求得Cx,Cy为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。ACs(x)23绘制特征吸收曲线①配制系列标准溶液0、C标1C标2。。。，显色反应：Fe2++3phen=Fe(phen)2+3②测量同一浓度标准溶液不同波长下的吸光度，每隔10nm测定一次，找出最大的吸收波长λmax(每变化波长，用空白溶液重新调零)（λmax=510nm）Fe2+的测定③用1cm比色皿在λmax=510nm下测定标准溶液的吸光度A标，绘制标准曲线A标~

C标④未知水样显色反应，测未知水样的A未，在该标准曲线上找出相应的C未1铁的测定25总铁的测定在水样中加NH2OH·HCl（盐酸羟胺）或抗坏血酸还原Fe3+:重复Fe2+的测定步骤测量范围：水中0.03~5.0mg/L的铁26②蒸馏-滴定法适合于氨氮浓度较高的水样，方法检出下限为0.2mg/L。先用蒸馏法将氨蒸出，吸收于硼酸溶液中，再用酸标准溶液滴定馏出液中的铵③电极法是利用氨气敏复合电极进行氨氮的定量测试，该法不受水样颜色和浊度的干扰，水样不必进行预处理，测定范围为0.03-1400mg/L。29N－(1-萘基)－乙二胺比色法在酸性溶液中，NO2－与对氨基苯磺酰胺生成重氮盐：

重氮盐与N-（1-萘基）-乙二胺偶联生成红色染料：

（红色染料）（λmax=540nm）2）亚硝酸盐氮：

N－(1-萘基)－乙二胺比色法（GB13580.7-92）、α－萘胺比色法（GB13589.5-92）和分光光度法（GB7493-87）、离子色谱法等。303）硝酸盐氮硝酸盐氮的测定方法主要有酚二磺酸光度法（GB74８0-87）、镉柱还原法、紫外分光光度法、离子色谱法和电极流动法等。

31①酚二磺酸光度法黄色化合物（λmax=410nm）32②紫外分光光度法水样经预处理后，先在波长220nm处测一次吸光度，此时，硝酸盐和溶解有机物均有吸收。再在波长275nm处测一次吸光度，此时有机物有吸收而硝酸盐无吸收。根据两次吸光度值，引入吸光度的经验校正值A校，进行定量测定。经验校正值为：A校＝A220－2A275式中，A220—220nm波长处测得的吸光度；A275—275nm波长处测得的吸光度。33③麝香草酚分光光度法测量原理：硝酸盐和麝香草酚在浓硫酸溶液中形成硝基酚化合物，在碱性溶液中发生分子重排，生成黄色化合物，415nm下测定。

适用于低浓度水样中硝酸盐氮的测定，最低检测质量浓度为0.12mg/L硝酸盐氮（以N计）。

干扰与消除方法：亚硝酸盐对本规范呈正干扰，可用氨基磺酸铵除去；氯化物对本规范呈负干扰，可用硫酸银消除344）凯氏氮凯氏氮是指以凯氏（Kjeldahl）法测得的含氮量，包括氨氮和在此条件下能被转化为铵盐而测定的有机氮化合物。在测定凯氏氮和氨氮之后，其差值即为有机氮。生活污水和食品、生物制品和制革等工业废水中常含较多的有机氮化合物，并以蛋白质及其分解产物（多肽和氨基酸）为主。35凯氏氮的测定

硫酸消解后的水样在碱性条件下可蒸馏出氨，用硼酸溶液吸收。反应式为：可根据水样的具体情况，选用纳氏试剂光度法或滴定法测定其含量。该法所测得的有机氮化合物为蛋白质、氨基酸、核酸、尿素等，不包括叠氮、联氮、偶氮、硝基氮等物质。若将水样先行蒸馏除去氨氮，再按凯氏法进行测定，可直接测得有机氮化合物365）总氮测试方法有过硫酸钾氧化－紫外分光光度法（GB１１８９４-８９）和加和法（凯氏氮、硝态氮）、仪器法等。过硫酸钾氧化－紫外分光光度法测定原理：在120－124℃的碱性介质条件下，用过硫酸钾做氧化剂，不仅可以将水中的氨氮和亚硝酸盐氮氧化为硝酸盐，同时可以将大部分有机氮化合物氧化为硝酸盐。然后用紫外分光光度法测定。该法主要适用于湖泊、水库、江河