蛹虫草培育详细技术全套资料

蛹虫草培育技术全套

蛹虫草生产工艺流程图1、削茧：即把蚕蛹从蚕茧中剥离出来，并进行挑拣，去除死蛹和不良蛹。2、菌种培养基：按照菌种生长配方配制液体培养基，分装在摇瓶中，灭菌备用。3、菌种培养：在装有灭菌过的培养基的摇瓶中接种原母种，置于恒温环境中的摇床上，培养7天。即得菌液，用于接种（4接种）。4、接种：将上述3得到的菌液通过接种针接种到上述1得到的优良蚕蛹体内。5、硬化：将上诉4得到的接种后的蚕蛹，置于硬化室内，在恒温（并干燥）的环境下，硬化20天，让菌丝体布满蛹体内。6、培养：将上述5硬化后的蚕蛹，置于培养室内，在恒温（湿度较大）的环境下培养30天，让菌体充分生长。7、阴干：将培养生长好的菌体（连同载体蛹），置于干燥的阴干房内阴干5天，待水分降至20%以下，即转为干燥。8、干燥：将上述7得到的半干后的菌体，置于烘房内，50度烘干至水分8%以下。9、包装：按照上市要求，分装成若干g/袋。9、检验：按照企业标准对产品进行检验，合格即可上市。一、卫生要求1、进入净化车间需穿戴鞋套、净化服、帽子及口罩，并将个人物品放入个人衣柜内。2、更衣完成后需洗手消毒并穿戴一次性手套。3、严禁将食物、饮料等易造成微生物污染的物品带入净化车间内。4、每天下班前需整理净化车间内卫生，所有接种用具均应摆放在指定位置，及时打扫工作台及地面卫生。5、下班时，将鞋套、一次性手套丢入更衣室垃圾桶内，净化服、帽子等放置在个人物品柜内，净化服不得带出车间。6、车间内垃圾、废料须每天清理，垃圾归整后统一倒入楼下垃圾箱内。二、生产操作标准1、培养基制备及灭菌所有培养基配制必须按照培养基配方所要求药品、比例配制，不得私自更改配方或药品比例。灭菌过程必须严格按操作方法要求执行。操作方法：（1）称量：按培养基配方比例依次准确的称取配方药品放入烧杯中。（2）熔化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅拌均匀，然后在石棉网上加热使其溶解。药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。（3）调节PH：在为调节PH前，先用PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，随时用PH试纸测其PH，直至PH达到所需值。反之，用1mol/LHCl进行调节。（4）液体分装：分装三角瓶的量根据需求而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。（5）加塞：在培养基分装完毕后，在三角瓶扣塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染。（6）包扎：加塞后，在棉塞外包一层牛皮纸并用麻绳扎好，以防止灭菌时泠凝水湿润棉塞。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。（7）灭菌：将上述培养基以O.IMPa，121C,30min高压蒸汽灭菌。2、菌种扩培（1）左手持冬虫夏草菌斜面培养物，右手持接种环，按下图A方法将接种环进行火焰灼烧灭菌（烧至发红），然后在火焰旁打开斜面培养物的试管塞，并将试管口在火焰上烧一下（注：此过程需在超净工作台内完成）。（2）在火焰旁，将接种环轻轻插入斜面培养物试管的上半部（此时不要接触斜面培养物），至少冷却5s后，挑起适量培养物后，再烧一下管口，盖上管帽并将其放回试管架中。（3）用左手迅速拿取装有已灭菌培养基的三角瓶，在火焰旁取下瓶口棉塞，瓶口在火焰上烧一下，将沾有少量菌苔的接种环迅速放进三角瓶中（注意：接种环不要碰到试管口），并在三角瓶液体培养基中均匀搅拌。完成后，同样烧一下瓶口，盖上棉塞，将接种环在火焰上灼烧后放回原处。将接种好的三角瓶放入摇床培养。（4）菌种扩培时摇床参数控制设置摇床温度为20-22度，摇床转速适当，遮光培养。摇床培养时间约一周。（5）待观察到培养瓶中，培养基略微浑浊，肉眼可见大量菌球形成时，摇床培养结束即可进行接种。3、蚕蛹接种（1）接种蚕蛹准备：蚕蛹去除茧壳后，清水洗涤干净，晾干再使用75%酒精泡洗或用沾有75%酒精的脱脂棉擦洗杀菌，杀菌后晾干备用。（2）接种使用一次性注射器，接种前仔细检查蚕蛹质量，不得使用病死蛹或体质较差的蚕蛹等。接拿蚕蛹时需轻拿轻放。（3）接种时，左手拿蛹右手拿注射器进行注射（注射位置为蚕蛹软体部分）。注射器内预先吸取适量的菌液。（4）接种量：接种菌液量约0.3ml，体型较大的蚕蛹可适当增加接种量。4、硬化接种完成后将接种好的蚕蛹放置在蚕蛹硬化框内，不得叠放、挤压放置，蚕蛹之间留有2cm-3cm间隙。一个框放满后通过传递窗传出放置到硬化室避光培养。硬化室培育温度控制为20°C左右，周期约20天。硬化刚开始1-5天，避光，15C-18C，空气湿度控制60%。6-20天提温到20C-23C培育。硬化期每天通风1-2次每次20-30min。培育期，需每天填写虫草培育记录，详细填写各项环境参数以及蚕蛹硬化情况。进入硬化程序两天后，要逐一检查蚕蛹硬化情况，发现未硬化或是已经变质腐烂、病变蚕蛹，必须及时将腐烂、病变蚕蛹挑拣出来，以防止感染其它蚕蛹。5、培育接种后的蚕蛹经约20天硬化后转移至培育室内进行培育。转移时将蚕蛹由硬化框内取出放置在无菌盒内盖上盖子(注意：不能叠放、挤压放置)。培育室环境因子控制：白天增加光照，打开墙面补光灯补充光照14小时，空气湿度保持在60%。晚上关灯10小时，温度10C。虫草长出后保持温度18C-22C，空气湿度80%-90%，必要时可向地面喷水增湿。光照期间应每隔4个小时调换内外侧无菌盒位置，并翻动蚕蛹使其受光均匀。子实体生长期需要通风增氧，昼夜要有5C-7C的温差。并控制好温度、湿度等环境参数。待子座呈橘红色或橘黄色棒状，高度5-8cm,头部出现龟裂状花纹，可见黄色粉末状物，此时即可视为菌体成熟。6、晾干菌体培育成熟后由无菌盒中取出，放置在晾干框中(注意：不可叠放、挤压放置)置于晾干室晾干。空气湿度较大时，可采取分级烘干的方法去除水分。烘干前期控制温度为35°C-45°C，失去大部分水分后，后期温度控制为50C-65C，烘至质量不再减少即可。注意：烘干温度不可过高，容易导致子实体变色。成品虫草水分控制在5%以内视为合格。7、器材清洗所有器材使用完毕后应及时清洗，将器材内遗留物倒入废料桶内，先以水冲洗后，加入适量去污粉，用刷子反复刷洗多次后倒出，再以清水冲洗2-3次。清洗完成后烧杯及三角瓶等应倒放控干水分，玻璃棒、接种环等放置在指定位置以备下次使用。废料桶内垃圾应每天清理不得长时间放置在清洗室，避免滋生细菌、霉菌等。附录一、LDZX立式压力蒸汽灭菌器使用方法1、开盖开盖前必须确认压力表指针归零，灭菌器内无压力。逆时针转动手轮转圈，直至转动至顶部，使灭菌器充分提起，拉起左侧立柱上的保险销，向右推开横梁移开灭菌器盖。2、通电接通电源，将控制面板上的电影开关按至ON处，控制面板上的低水位灯亮，灭菌器内属断水状态，压力表指针指向零位。3、加水灭菌器开盖状态下，将蒸馏水直接注入灭菌器内约8升，同时观察面板上的水位灯，当加水至低水位灯灭，应继续加水至高水位灯亮时停止加水。当加水过多溢至内胆时，应开启下排水阀放去内胆中多余水分。4、堆放将包扎好的待灭菌物品，各包之间留有间隙，依次堆放在灭菌筐内，有利于蒸汽穿透，提高灭菌效果。堆放灭菌包时应注意留出安全阀排汽孔空隙，否则因安全阀汽孔堵塞未能泄压，造成锅体爆裂事故。5、密封将横梁推向左侧立柱，提起手动保险销，使横梁全部嵌入立柱槽内，保险销下落锁住横梁。将手轮顺时针旋转，使灭菌器盖与下法兰压紧，加力使之充分密合。6、参数灭菌温度设置为121°C，灭菌时间设置为20min。7、结束灭菌完成，保温时间结束自动切换为End显示，此时应将电源开关按至OFF，关闭电源。开启排汽阀，放净灭菌室内余汽，待压力表指针回落至零为止。注意：放汽时，先微开排汽阀排汽，待压力表示数降至0.1Mpa以下时，开大排汽阀排汽。排汽完成后即可开盖。二、空气浴恒温摇床培养箱使用方法1、开机接通电源，将机身右侧电源键按至ON档。2、参数设置适当温度与频率。三、超净工作台使用方法1、开机接通电源，将电源键按至ON档。2、参数选择适当温度与风速等。四、空气除湿机使用方法1、开机接通电源，将电源键按至ON档。2、参数使用上下选择键