对ELISA法检测大便HpSA进行方法学评价,医学检验论文

对ELISA法检测大便HpSA进行方法学评价,医学检验论文幽门螺杆菌〔Helicobacterpylori,简称Hp〕,首先由巴里马歇尔〔BarryJ.Marshall〕和罗宾沃伦〔J.RobinWarren〕二人发现，幽门螺杆菌感染是慢性胃炎的主要致病因素，还与消化性溃疡、胃癌的产生密切相关.Hp检测方式方法很多，主要分为参与性和非参与性两类.参与性检测方式方法包括快速尿素酶试验〔RUT〕、组织学检测法、病原菌培养和聚合酶链反响〔PCR技术〕;非参与性检测方式方法包括尿素呼气试验〔14C-UBT〕和血清学试验。ELISA法检测大便HpSA是近年来开展并逐步推广的一种检测Hp的新方式方法，本课题以尿素酶试验和组织学检测法作为检测幽门螺杆菌的金标准,对ELISA法进行方式方法学评价。1材料与方式方法1.1研究对象2018年1月-2020年12月在开封市中心医院住院治疗的慢性胃炎患者200例，华而不实，男120例，女80例，年龄20岁~70岁，平均45岁。患者4周内未服用铋剂、抗生素、H2受体拮抗剂和质子泵抑制剂等对Hp检测有干扰的药物，排除胃、十二指肠手术史及全身性严重疾病。1.2仪器与试剂美国宝特仪器有限公司生产的ELx800全自动酶标仪；幽门螺杆菌抗原检测试剂盒，由北京协和药业有限公司提供，批号：3401036;快速尿素酶试纸，由深圳养和生物科技有限公司生产；Warthin-Starry染液，自配。1.3检测方式方法患者用干净枯燥的专用容器留取大便2g~3g,立即放入-20℃的冰箱备用，最好24h内测定。利用胃镜取胃窦处的组织两份：一份涂片做组织学检查；一份做快速尿酶试验。快速尿酶试验：胃窦组织块放在试纸上，5min内观察结果：变红色为阳性，不变色为阴性。组织学检测：先用福尔马林液固定组织，然后切片，Warthin-Starry染色，镜检，幽门螺杆菌染成黑褐色，弧形，背景呈棕黄色。ELISA法检测大便HpSA:检测前把试剂和标本从冰箱中取出，恢复至室温。取400l稀释液参加一干净枯燥的塑料试管内，取约0.1g大便参加华而不实，充分混匀。准确汲取100l混悬液滴入抗体包被的板孔内，再参加酶标抗体液2滴，同时设阴阳性对照各一孔。室温下孵育1h,在自动洗板机上洗板3次，拍干，参加底物液2滴，室温下孵育10min,参加终止液2滴，混匀后在全自动酶标仪上读取吸光度OD值，设定波长450nm.判定标准：OD1.50,阳性；OD1.20,阴性；1.20OD1.50,中介，复查。1.4统计学处理采用SPSS15.0统计软件对实验结果进行统计学处理，求出实验的准确率、阳性率、特异度和敏感度，并用2检验比拟两种实验方式方法阳性率的差异。2结果采用ELISA法和金标准法对200例慢性胃炎患者测定，ELISA法的阳性率77.5%〔155/200〕,特异度90%〔45/50〕,敏感度103%〔155/150〕,准确率97.5%〔195/200〕;金标准法阳性率75%〔150/200〕.二者阳性率差异不具有统计学意义〔2=0.36,P0.05〕〔表1〕.3讨论自从1982年幽门螺杆菌被发现以来，人类对Hp的研究和探寻求索就没有间断过.幽门螺杆菌对人类的危害主要表如今三方面：导致胃炎和胃溃疡；引发胃癌；引起顽固性口臭.有关研究证实,慢性活动性胃炎幽门螺杆菌的感染率占95%;Hp能够引起细胞过度增生，激活癌基因，导致基因突变，引发胃癌；Hp可以以定居于口腔黏膜，产生尿素酶，分解口腔正常菌群产生的尿素，释放出氨，引起顽固性口臭。为了把Hp的危害降低到最小，应该早发现早治疗，诊断幽门螺杆菌感染的最好方式方法是将临床病情分析和实验室检查相结合.幽门螺杆菌的实验室检查方式方法有很多，包括参与性和非参与性两种，常用的有RUT法、组织学检测、细菌培养、UBT法和血清抗体检查。每种方式方法各有其特点，细菌培养复杂费时，需要专门的实验室条件，但特异性高，能够做药敏试验和细菌学研究。UBT法结果准确，操作简单，克制了细菌呈局灶性分布而造成RUT法假阴性的缺乏，但UBT法处于临界值的结果不可靠。血清抗体检查主要用于流行病学调查，不同试剂盒测定结果存在一定差异，且与其他细菌抗原有穿插反响。RUT法快速方便，结果准确，可在胃镜检查时取材，但结果受取材部位、组织块大小、菌量多少和环境温度影响。组织学检测、特异性和敏感性都很高，但不同染色方式方法间结果存在差异，步骤繁琐，费用较高。RUT法和组织学检查，由于特异性高，准确可靠，被定为幽门螺杆菌实验室检查的金标准.ELISA法检测大便HpSA是一种非参与性方式方法，美国胃肠病周会于1997年首先报道了该检测方式方法,它与14C-UBT法有很多一样的优点，已经广泛被人们接受。它的检测原理是感染Hp的胃粘膜更新脱落，进入消化道，最后随粪便排出，大便中便有Hp-SA存在，通过酶标双抗体夹心法测定HpSA,阳性即Hp感染。铋剂、抗生素、H2受体拮抗剂和质子泵抑制剂几乎不干扰测定结果。它又比14C-UBT法具有更多的优点，14C具有放射性，对人体有一定的危害；检测需要昂贵仪器，费用高，对呼气动作有特殊要求，儿童呼气常因达不到要求而影响结果，而ELISA法克制了14C-UBT法的局限性。血清抗体检查的敏感度较高，但由于血清中的抗体含量与病情往往不同步，该方式方法不常用于临床诊断。ELISA法的特异性和准确率不如金标准法，但金标准法为参与性方式方法，采集标本时需要胃镜操作，有一定的技术要求，也会给病人带来一定的痛苦和思想压力，十分是儿童，不配合时，操作难以进行。ELISA法检测大便HpSA具有特异性强、敏感性高、准确可靠的优点，又由于它是非参与性方式方法，取材方便，没有痛苦，容易为病人所接受。美国胃肠病周会报道,ELISA法的特异度和敏感度都在90%以上，与本课题的结果相符；上海中山医院的刘红春教授曾研究报道,ELISA法特异度92.1%,敏感度91.7%,准确率91.8%,与本课题的结果也相符。另有报道,ELISA法检测大便HpSA合适大面积的幽门螺杆菌的流行病学调查，十分合适于儿童、孕妇及体弱等不合适胃镜检查者，对疾病的预防和随访都是不错的选择；可作为疗效观察的指标，感染彻底治愈后，4d~5d抗原检测即可为阴性；可以以作为临床常规检测项目加以推广，协助胃病的诊断和治疗。以下为参考文献[1]苏爱平，许翠萍，房晓芬，等。幽门螺杆菌感染在慢性胃炎患者中的危险因素[J].世界华人消化杂志，2008,16〔33〕:3810-3813.[2]何周桃，谢贤和，韦红，等。幽门螺杆菌5种方式方法比拟[J].临床荟萃，2018,26〔7〕:570-574.[3]刘春红，贺伯明，方国汀，等。幽门螺杆菌粪便抗原检测的临床意义[J].中国实用内科杂志，2001,21〔10〕:606-607.[4]Perez-TralleroE,MontesM,AlcortaM,etal.Non-endoscopicmethodtoobtainHelicobacterpyloriforculture[J].Lancet,1995,345〔8950〕:622-623.[5]孙艳艳。幽门螺杆菌感染与脑梗死的相关性研究[J].中国实验诊断学，2006,10〔8〕:826-828.[6]孙艳艳。蛋白芯片技术检测幽门螺杆菌感染的临床价值[J].中华医院感染学杂志，2006,16〔12〕:1347-1349.[7]刘晓峰