免疫复合物与检测

免疫复合物与检测第一页，共29页。当Ag在体内持续存在或由微生物与宿主细胞不断释放入细胞外液时，可引起特异性Ab产生，从而形成免疫复合物。一.免疫复合物含义及形成：（一）含义：immunecomplex，IC它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。第二页，共29页。（二）IC的形成：1.Ag持续存在于体内：（产生Ab，形成AgAb或AgAbC）感染：是Ag持续存在于体内的最常见原因，如细菌、病毒、寄生虫感染；组织Ag：自身组织的部分成分发生变异，如DNA、IgG等；外源性Ag：在生活、工作环境中接触的外来性物质如粉尘、药物等；肿瘤Ag：如白血病等第三页，共29页。2.IC的清除受阻：形成的IC一般分为大分子IC、中等大小的IC及小分子IC三种：大分子IC：沉降系数为19S，MW>100万，易被巨噬细胞吞噬而清除；小分子IC：可溶性，沉降系数<6.6S，MW<50万，易被肾小球滤过而排除；中等大小的IC：沉降系数在8.8S－19S间，MW在50－100万间，既不易被巨噬细胞吞噬也不易被肾小球滤过，而沉积在血管壁、肾小球基底膜处，形成免疫复合物病。第四页，共29页。二.免疫复合物病：（一）致病机理：中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。激活补体：a.激活C3a、C5a、C567→趋化嗜中性粒细胞→释放溶酶体酶→引起组织损伤；b.激活C3a、C5a（过敏毒素）→作用于肥大细胞和嗜碱性粒细胞→释放血管活性物质→血管通透性增加→引起组织水肿；第五页，共29页。

激活血小板：与血小板上的IgGFc受体结合→使血小板聚集→微血栓形成→局部出血缺血、坏死

第六页，共29页。第七页，共29页。常见病损部位肾小球、关节、皮肤第八页，共29页。（二）所致疾病内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎、变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关节炎；皮肤：皮肤炎、脉管炎；全身：SLE第九页，共29页。血清病第十页，共29页。类风湿性关节炎体内变性IgG刺激机体产生抗体(称为类风湿因子,IgM型)，形成IC，沉积于全身小关节滑膜处，引起小关节红肿、变形僵直、失去运动功能。第十一页，共29页。系统性红斑狼疮

细胞核物质(如DNA、RNA、核内可溶性蛋白)刺激机体产生抗核抗体，形成IC，沉积于全身毛细血管、关节滑膜、心脏瓣膜等处，引起全身性损伤。第十二页，共29页。三.IC检测方法的分类：(一)局部组织中IC的检测：制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜检测IC所致典型病理改变；或用IF、免疫酶技术检测IC在组织中的沉着。（二）循环中IC的检测：Circleimmunecomplex，简称CIC。CIC检测方法大致分为两类：第十三页，共29页。1.抗原特异性方法：利用IC中Ag的特异性而设计的方法。但由于每一待测标本中Ag的特异性是不同的，不同Ag就需不同方法进行检测，造成方法不统一，因此临床上使用较少。2.抗原非特异性方法：利用CIC与游离的Ag或Ab相比较，在物理性质、生物学活性上的差异而设计的方法。第十四页，共29页。根据物理性质上的差异而设计的方法：A.根据CIC与游离的Ag或Ab分子大小不同而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密度超速离心法；B.根据CIC与游离的Ag或Ab溶解度不同而设计的方法：聚乙二醇（PEG）沉淀试验第十五页，共29页。根据生物学性质的差异而设计的方法：A.根据C1q+CIC（AgAb)而设计的方法：抗补体试验、C1q结合试验；B.根据IgGFc受体＋CIC（AgAb)而设计的方法：血小板凝集试验；C.根据C3b受体＋CIC（AgAbC)而设计的方法：Raji细胞试验第十六页，共29页。四.IC检测方法概述：1.聚乙二醇（PEG）沉淀试验：原理：PEG为水溶性多聚体，在3％-4％低浓度时，能使血清中CIC沉降。第十七页，共29页。方法：

PEG＋待测血清

↓

使PEG终浓度达到3－4％

↓4℃过夜离心，取出沉淀↓将沉淀用NaOH溶解

↓在分光光度计上测定OD（A）值第十八页，共29页。优缺点：该试验不但可检测IC，还可获得IC（收集沉淀），简单，快速；特异性差，易受血清中大分子物质干扰；常作为CIC检测的粗筛试验第十九页，共29页。2.抗补体试验：原理：C1q+IC方法：豚鼠血清（含补体)+待测血清(56°1h灭活其中补体）↓再加入致敏羊红细胞↓

不溶血溶血（IC阳性）（IC阴性）第二十页，共29页。第二十一页，共29页。

优缺点：

该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性凡引起补体失活的原因都可引起假阳性，因此豚鼠血清必须保持新鲜；待测血清在56°1h灭活自身补体时，对其中的Ig构型有改变，可引起Ig聚集代替IC而与C1q结合，出现抗补体活性。第二十二页，共29页。3.C1q结合试验：原理：C1q＋IC方法：待测血清（灭活补体）＋同位素标记的C1q

↓PEG(使IC沉降）

测定沉淀物中的放射活性

优点：对IC的检测既可定性又可定量，重复性好，结果客观；缺点：易出现假阳性，C1q不但能与IC结合，还能与血清中鱼精蛋白、C反应蛋白结合

第二十三页，共29页。4.血小板凝集试验：原理：IC+血小板上的IgGFc受体→血小板凝集方法：待测血清＋血小板

若出现凝集，则待测标本中含有IC；

若不出现凝集，则待测标本中无IC。特点：由于不同个体血小板对IC的敏感性不同，所以实际运用时，至少需要三份不同个体的混合血小板。可出现假阳性：高浓度的Ig、凝血酶、蛋白溶解酶、胶原等都可使血小板凝集。

第二十四页，共29页。

5.Raji细胞试验：原理：Raji细胞是一种有B细胞特征的淋巴母细胞样细胞，由Burkitt氏淋巴瘤衍变而来，其表面无SmIg，含有大量的补体受体，尤其是C3b受体。该法仅适用于检测AgAbC复合物。方法：待测血清+Raji细胞孵育→洗涤，加入同位素标记的抗人IgG→离心、洗涤→检测沉淀细胞的放射活性。第二十五页，共29页。五.IC检测的有关技术问题：

到目前为止，所有检测IC的试验，还没有另人满意的标准化措施；在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。目前普遍应用的标准品是HAHG——热聚合人IgG（不是