生化原理基础

生化原理基础第1页/共60页主要内容生化分析的对象生化分析的原理生化试剂的作用和组成生化仪如何算出结果第2页/共60页一、生化仪分析的对象第3页/共60页1、血液的组成第4页/共60页2、生化项目的分类（临床性质）肝功能肾功能心肌酶谱糖尿病胰腺炎血脂痛风免疫性疾病第5页/共60页3、生化项目的分类（化学性质）酶类底物代谢类无机离子类特种蛋白类第6页/共60页第一部分小结1、生化仪分析血清中的化学物质。2、化学物质代表了人体的生理指标。第7页/共60页二、生化仪分析仪的原理第8页/共60页1、吸收光谱法第9页/共60页光谱的范围第10页/共60页补色的定义如果把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。/nm颜色互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝610-650橙绿蓝650-760红蓝绿第11页/共60页吸光度定义，为透光率第12页/共60页Lamber-Beer定律

溶液的吸光度等于该物质的吸光系数ε、浓度C和光径L的乘积A=εCL第13页/共60页吸收曲线第14页/共60页吸收波长右图是几种不同浓度的KMnO4溶液的吸收曲线第15页/共60页2、比浊法第16页/共60页定义第17页/共60页第二部分小结1、吸收光谱法和比浊法。2、生化仪是检测吸光度A的。第18页/共60页三、生化试剂的作用和组成第19页/共60页1、生化试剂的意义显色剂单一性

第20页/共60页2、生化试剂的分类NAD+-NADH系统p-NP（p-NA）系统H2O2偶联的指示系统抗原抗体反应指示系统其它显色反应第21页/共60页NAD+-NADH指示系统NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+、CO2等。第22页/共60页ALT（GPT）的测定原理R1：NADH、乳酸脱氢酶（LDH）R2：

L-丙氨酸、α-酮戊二酸

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸

LDH

丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2O第23页/共60页p-NP和p-NA指示系统p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、r-GT、AMY等。第24页/共60页ALP（AKP）的测定原理R1：AMP缓冲液、MgCl2；R2：对硝基苯磷酸盐

ALP对硝基苯磷酸盐+H2O

→

磷酸盐+对硝基苯酚第25页/共60页H2O2偶联的指示系统H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。/天成医疗网目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu（氧化酶法）、Cr、UA等。第26页/共60页GLU的测定原理R1：4-氨基安替吡啉、抗坏血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶（GOD）、过氧化物酶（POD）、酚。

GOD

葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖酸+H2O2POD

2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚

→醌亚胺+4H2O

第27页/共60页抗原抗体反应指示系统特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等第28页/共60页载脂蛋白测定原理和临床意义测定原理：免疫透射比浊法，抗原抗体免疫复合物形成的浊度的大小在合适的抗体浓度下与抗原含量成正比R1（缓冲液）:磷酸盐缓冲液pH7.520mM，PEG，表面活性剂，防腐剂，稳定剂；R2（抗血清）:羊抗人apoAl（apoB）抗血清，防腐剂，稳定剂。抗原(血清中的apoAl,apoB)+抗体(抗血清试剂)

缓冲环境

>抗原抗体免疫复合物第29页/共60页其它显色反应（TP）测定原理：蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，导致540nm吸光度的增加，增加的程度与蛋白质的含量成正比。碱性条件酞键+Cu2+→紫红色络合物第30页/共60页其它显色反应（Ca）测定原理：甲基麝香草酚兰(MTB)在碱性条件下可与Ca2+形成红色络合物，引起612nm吸光度的上升，上升程度与Ca浓度成正比

。

碱性条件

MTB+Ca2+→红色络合物第31页/共60页第三部分小结1、不同的试剂和血清中不同的物质（项目）反应，导致了吸光度的变化。2、试剂有NAD+-NADH系统、p-NP（p-NA）系统、H2O2偶联的指示系统、抗原抗体反应指示系统和其它显色反应。第32页/共60页四、生化仪如何算出结果第33页/共60页1、测定方法及反应度的计算测定方法反应度第34页/共60页2、终点法定义和反应度的计算第35页/共60页终点法的定义指经过一段时间的反应，整个反应达到平衡，所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加（或降低），吸光度的增加（或降低）程度与被测定物的浓度成正比。

第36页/共60页TP的反应曲线（单试剂）第37页/共60页单试剂单波长反应度计算反应度=最后吸光度—试剂空白吸光度第38页/共60页TC的反应曲线（双试剂）第39页/共60页双试剂单波长R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度；（反应起始时间设置为0）R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度—t3前一时刻的吸光度×体积校正因数；（反应起始时间设置为<0）第40页/共60页3、零级动力学法定义和反应度计算第41页/共60页零级动力学法定义指反应速度与反应物（底物）浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（△A/min）与被测物（催化剂）的活性或浓度成正比。

第42页/共60页底物[S]、产物[P]和反应速率V在酶作用下，底物[S]浓度不断下降，随之有相应产物[P]产生。不少酶在反应一开始的阶段，由于各种因素影响，反应速度较慢，称为延滞期，随后在过量浓度的底物存在条件下，酶反应以恒定的速度进行，不受底物浓度变化的影响，这段反应称为线性反应期或零级反应期。随时间延长，反应速度除与酶量有关，还与底物浓度有关。第43页/共60页α-AMY的反应曲线（单试剂）第44页/共60页ALP的反应曲线（双试剂）第45页/共60页反应度的计算反应度的计算C(U/L)=△A/min*F第46页/共60页4、一级动力学法定义和反应度计算第47页/共60页一级动力学法定义在被测物参与反应的条件下，在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加（或降低）速度越来越小，由于这类反应达到平衡的时间很长，必需在特定时间段内进行监测，该段时间内吸光度的增加（或）降低与被测定物的浓度成正比。

/天成医疗网第48页/共60页BUN的反应曲线（双试剂）第49页/共60页反应度的计算第50页/共60页5、定标的定义和方法第51页/共60页01234mol/LR。。。。*80604020C第52页/共60页定标的方法线性定标非线性定标第53页/共60页单点线性定标第54