转基因分析的全球会议

转基因分析的全球会议第1页，共51页，2023年，2月20日，星期二谈及到广义的、而不仅仅是

转基因生物时，应包括以下几点：食品法典和欧盟的实验室质量标准

可接受的标准分析方法

食品法典审议的方法，检测和确定来自于生物技术的食品－－一般方法和标准方法第2页，共51页，2023年，2月20日，星期二测量不确定度方面（取样和分析）

采用欧洲网络转基因生物实验室转基因检测分析方法定义的最低性能要求（弊）第3页，共51页，2023年，2月20日，星期二从事控制进出口食品检测

实验室评估能力的准则

第8步在1997年6月的食品法典委员会上通过（见CAC/GL27-1997)第4页，共51页，2023年，2月20日，星期二要求3.下列标准应被参与食品进出口监测的实验室采纳：

ISO/IEC导则25：1990规定了检测实验室应遵守的一般标准“校准和监测实验室职权范围的一般要求“;

[注：现在改为英文的ISO/IEC17025:2005]第5页，共51页，2023年，2月20日，星期二参加适当的符合“国际统一议定书的（化学）分析实验室的能力测试“理论与应用化学65（1993）2132－2144;[在1995年7月的第21届会议上，已被食品法典委员会采纳]规定要求的食品分析水平测试计划[注：最新议定书理论与应用化学，2006，78（1），145-196现已通过了食品法典委员会]第6页，共51页，2023年，2月20日，星期二凡提供、使用的分析方法应该有以食品法典已审定的原则规定的根据

使用内部质量控制程序，如这里所讲的“分析化学实验室内部质量控制统一准则，“理论与应用化学67（1995）649-666第7页，共51页，2023年，2月20日，星期二4.上文提到参与评估的实验室机构应遵守一般实验室认可标准，如ISO/IEC导则58:1993中规定了“校准和检验实验室认可

系统的通用操作与认可标准”。第8页，共51页，2023年，2月20日，星期二欧洲议会和2004年4月29国会制定（EC）882/2004条例

官方控制以确保核查遵守饲料和食品法、动物健康和动物福利法规第9页，共51页，2023年，2月20日，星期二第11条取样和分析方法•使用的采样和分析方法应遵守官方控制或相关社区的规则

（a）如果没有这样的规则存在，以国际公认的规则或协议为准。例如欧洲标准委员会（CEN）已接受或在国家立法中商定的准则第10页，共51页，2023年，2月20日，星期二（b）若上述情况均不存在，按与目的相符的其他方法或按照发达国家科学议定书执行第11页，共51页，2023年，2月20日，星期二凡第1款不适用的，验证的分析方法可采取

发生在单个实验室的符合国际公认协议的准则。第12页，共51页，2023年，2月20日，星期二3.附件三详细列出了符合标准的所有可能的分析方法第13页，共51页，2023年，2月20日，星期二第12条官方实验室1.主管部门应指定在官方控制可进行样品分析的实验室第14页，共51页，2023年，2月20日，星期二然而，主管当局可能只指定实验室，运营、评估以及认可按照以下欧洲标准执行：

ENISO/IEC17025“能力测试和校准实验室的一般规定”第15页，共51页，2023年，2月20日，星期二EN45002“评估测试实验室的一般标准”

EN45003“校准和测试实验室认可制度－通用的运作和认可准则”，考虑到不同标准的测试办法规定了通用的饲料和食品法。

（注：这些提法现已更新与关于认证机构的新的欧盟条例(2008年6月23日通过？))一致第16页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件三：分析方法的特征分析方法应符合以下标准特点：

•准确性;

•适用性（矩阵和浓度范围内）;

•检测限;

•限制度;

•精度;第17页，共51页，2023年，2月20日，星期二•可重复性;

•再现性;

•恢复性;

•选择性;

•敏感性;

•线性;

•测量不确定度;

•可根据需要选择的其他标准。第18页，共51页，2023年，2月20日，星期二第1（e）中提到的精确值应通过一个已按国际认可的协议执行的合作试验赋予（例如：ISO5725:1994或化学的国际统一协议）或按已有的依据标准兼容性测试的分析方法执行。重复性和有效值应表示为国际公认的形式（如95％置信区间按ISO5725:1994或理论与应用化学定义）。协作实验的结果

应公开发表或免费提供。第19页，共51页，2023年，2月20日，星期二分析方法只能在单一的实验室予以审定的情况下，他们应当按照化学统一的指导方针审定，或按依据标准兼容性测试已确定绩效标准的分析方法执行。（单个实验室验证分析方法的化学统一指导方针（MichaelThompson,StephenLREllisonandRogerWood,理论与应用化学。2002，74（5），835-355）现已被欧盟和食品法典接受。）第20页，共51页，2023年，2月20日，星期二什么是标准的分析方法？

－－为什么要引入？第21页，共51页，2023年，2月20日，星期二传统的方法（具体的分析方法）•分析师被剥夺了选择的自由，因此，某些情况下，不得不使用一些不恰当的方法;

•程序抑制了自动化的使用;

•想改变无法令人满意的或劣于另一目前可用方法的分析方法，在行政上很难实施。第22页，共51页，2023年，2月20日，星期二标准方法（方法的表型特征）•这个“标准”的做法与目前食品法典和欧盟采用的程序相比，拥有更大的灵活性

•在食品分析的某些领域中，提供了许多分析方法，其中有一些符合有关法规特点、但由于时间的限制还未经食品法典或欧盟审议。

如:没有具体规定的方法第23页，共51页，2023年，2月20日，星期二但是，“标准法”也可能意味着接受由食品法典，欧盟等设定的单个标准

如:方法是否不够好？第24页，共51页，2023年，2月20日，星期二法典委员会的分析和取样方法审议检测和鉴定转基因食品的方法一般方法和标准方法

（论文CX/MAS08/29/8)）第25页，共51页，2023年，2月20日，星期二

转基因食品分析的

审定和质量控制要求指南考虑到：

•标准的做法和已确定的特征（LOD技术，LoQ等）

•实验室质量

•测量的不确定度第26页，共51页，2023年，2月20日，星期二基于DNA分析方法的附加要求

-扩增长度

-是否有该方法的具体操作规则

-定性和定量PCR检测方法是否有区别

-是否能开展单一或多重PCR扩增基于蛋白质方法的附加要求：

-试剂应与反应时间所需耗试剂等量第27页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件一：当一种转基因食品的检测方法CCMAS表示赞同时，该信息可提供给食品法典方法的说明

-该方法的目的和意义

-科学依据

-该方法所需要的规范的预测模型/数学模型第28页，共51页，2023年，2月20日，星期二方法的优化信息

-引物对/荧光寡核苷酸探针测试

-选择性测试

-稳定性测试

-灵敏度测试

-稳定性测试

-交叉反应第29页，共51页，2023年，2月20日，星期二实际应用的方法

-适用性

-操作特点和实用性的方法

-操作技能要求

分析控制

需要指出的第30页，共51页，2023年，2月20日，星期二方法验证/性能-扩增长度

-该方法是否是仪器化的或化学特异性的

-是否需进行单一或多重PCR扩增

-基于PCR技术和免疫学方法验证的标准是否有差别第31页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件二:适用于分析转基因食品法典定义

-精度

-适用性

-动态范围-范围的量化

-检测限（LOD值）

-定量限（LOQ）

-实用性

-重复性标准偏差（RSDr）

-再现性标准偏差（RSDR）

-回复

-稳定性

-灵敏度

-选择性

-真实性第32页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件三：定量PCR审定法

每个特征给定和预期值的信息，如：重复性标准偏差和再现性标准偏差信息

分析控制验收标准和给出结果的解释信息第33页，共51页，2023年，2月20日，星期二重复性标准偏差（RSDr）

建议：重复性相对标准偏差≦25％或接近这个值在该方法的整个动态范围是可行的。

再现性标准偏差（RSDR）

建议：再现性相对标准偏差﹤35％或接近该值在标准浓度及大多数的动态范围内是可行的。RSDR≦50％左右是可行的极限的定量下限。第34页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件四：定性聚合酶链反应方法的审定

附件五：基于蛋白质方法的审定

定性和定量方法的审议第35页，共51页，2023年，2月20日，星期二附件六：转基因食品的水平测试

得分标准信息来自logtransformed数据库

注：问卷分析方法技术委员会/lap/rsccom/amc/amc_index.htm下载第36页，共51页，2023年，2月20日，星期二法典准则的测量不确定度

(CAC/GL54-2004)

引言

使用ISO/IEC17025:1999，分析师能意识到相关的每个分析结果的不确定性、并估计该不确定性，这是重要和必须的。测量的不确定性可能来自一些程序。为了达到食品法典的控制目的，食品分析实验室被要求使用可行的通用的检测或验证方法，并在纳入日常使用之前，验证他们的程序。因此，这些实验室提供了一系列可以用来估算其测量不确定度的分析数据。第37页，共51页，2023年，2月20日，星期二只适用于定量分析的准则大多数定量分析结果采取“a±2u或a±U”的形式记录其中“a”是被测量浓度真实值（分析结果）的最优估计，“u”是标准的不确定性，而“U”（相当于2u）是扩大的不确定性。“a±2u”代表了置信区间为95％的范围，即在该范围内找到的真实值可信度是95％。“U”或“的2u”常见于分析师的报告中，以下简称“计量不确定性“，可用不同方式进行估计。第38页，共51页，2023年，2月20日，星期二ⅰ.结果在不确定度外，高于检测限ⅱ.结果高于检测限，检测限在不确定度内ⅲ.结果低于检测限，检测限在不确定度以内ⅳ.结果在不确定范围内，低于检测限检测上限第39页，共51页，2023年，2月20日，星期二这意味着法典的规定和执法界限是不同的

规范的制定应该受到赞赏第40页，共51页，2023年，2月20日，星期二测量的不确定性是否

同时适用于采样和分析？测量不确定性适用于整个测量过程。对于分析者来说，一直考虑单一的“分析”

测量不确定性，但现在越来越多地认识到必须对整个系统加以考虑，并且“抽样”

测量不确定性的重要性正在日益增加。第41页，共51页，2023年，2月20日，星期二法典委员会的分析和取样方法

第29次会议，布达佩斯，匈牙利，2008，10/3-14/3测量不确定性指导

（论文

CX/MAS08/29/9

）取样不确定性指导

（论文

CX/MAS08/29/9-Add1.)第42页，共51页，2023年，2月20日，星期二同意：

准备分析测量确定性的近一步指导意见进一步进行基于以下论文的讨论：欧洲分析化学组织/国际分析化学溯源性合作组织/波兰华沙分析测量技术展/北欧技术试验协作机构指南关于“取样测量不确定性的评估“和做好准备北欧技术试验协作机构报告604

（不是将来，现在立即行动）

目的的实施在于认真仔细的考虑-

难点在于转基因产品部门的执行！第43页，共51页，2023年，2月20日，星期二统一标准“一种欧洲的观点”

AndrewDamant

英国食品标准局第44页，共51页，2023年，2月20日，星期二立法-1•条例（EC）No1829/2003CRL－GMFF法律规定第32条

•CRL–GMFF的操作按照条例（EC）No641/2004执行

-附件一规定给申请授权者提供检测方法类型的参考信息-包括分析方法的信息

-申请人还提供了与寄主侧翼序列相邻的完整插入序列

以便构建一种特异性事件检测方法

还提供食品和饲料样品以及对照样品

第45页，共51页，2023年，2月20日，星期二立法-2•CRL-GMFF开展的活动与欧洲转基因

实验室的网络协调一致ENGL“定义转基因检测分析方法的最低执行需求”•（EC）No1981/2006条例-第6条和附件二提供一些国家实验室关于协助CRL测试和验证检测与鉴定方法的参考细节第46页，共51页，2023年，2月20日，星期二验证过程申请者/EFSA检测方法不可信的潜在要求细节补充信息潜在要求……”测试停止“潜在要求EFSA接受对照样品方法相关数据（第一步）科学评估方法样品文献（第二步）CRL试验测试样品和方法（第三步）共同研究探讨（第四步）结果报告（第五步）第47页，共51页，2023年，2月20日，星期二转基因测试分析方法

最低执行需求的定义•最初发表于2005年•第一阶段（步骤2和3）-

由申请人提交的执行方法

数据和部分官员档案的评估;•第二阶段（第4步）协作试验之后的全面确认研究的执行，方法、数据的评估

•目前正在修订第48页，共51页，2023年，2月20日，星期二第一阶段接受标准的方法实用性方法的实用范围，分析方法的参考等可行性设备时间实际困难特异性特异性事件活动范围包括1/10th和至少5×目标浓度精确度在参照值±25%以内

R2系数≥0.98PCR效率≥-3.1斜坡≥-3.6RSDr超过整个动力学范围≤25％LOQ≤1/10th的目标浓度,并且RSDr≤25％LOD值