五倍子软膏的质量控制及稳定性考察

郑雪花;杨祎蓂;杨君;杨跃辉【摘要】目的建立五倍子软膏质量控制方法并考察其在常温和加速条件下的稳定性.方法采用薄层色谱(TLC)法和高效液相色谱(HPLC)法鉴别五倍子软膏中的没食子酸;采用显微镜法检查五倍子软膏的粒度;采用HPLC法测定五倍子软膏中没食子酸的含量结果TLC法及HPLC法鉴别没食子酸专属性强且重复性好.HPLC法测定没食子酸在0.1532~0.6128凹范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为100.23%,RSD=1.85%.三批中试样品在加速试验条件下第6个月性状发生变化;在常温下放置6个月各项指标均符合规定.结论五倍子软膏在常温下贮藏6个月质量稳定，建立的质量标准可用于五倍子软膏的质量控制.％ObjectiveToestablishthequalitystandardofChineseGallOintment,andtoinvestigateitsstabilityunderroomtemperatureandacceleratedcondition.MethodsGallicacidinChineseGallOintmentwasqualitativelyidentifiedbyTLCandHPLC;thegranularityofChineseGallOintmentwasobservedbymicroscopeandcontentofgallicacidwasmeasuredbyHPLC.ResultsTheidentificationofgallicacidshowedastrongspecificityandgoodreproducibility.Thegallicacidintherangeof0.1532~0.6128pgshowedgoodlinearrelationwiththepeakarea(r=0.9997),andtheaveragerecoveryratewas100.23%(RSD=1.85%).TheappearanceofChineseGallOintmentwaschangedafter6monthswithacceleratedcondition,andthevariousindexofpilottestsamplesmetthequalitystandardunderroomtemperaturefor6months.ConclusionChineseGallOintmentisstableatroomtemperaturefor6monthsandtheestablishedqualitystandardcanbeusedforqualitycontrol.【期刊名称】《实用药物与临床》【年（卷），期】2017（020）006【总页数】4页（P697-700）【关键词】五倍子软膏;质量控制;稳定性【作者】郑雪花;杨祎蓂;杨君;杨跃辉【作者单位】中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳110004【正文语种】中文五倍子始载于唐代《本草拾遗》，为漆树科植物上的虫瘿，由五倍子蚜寄生而形成［1］。五倍子的主要成分有鞣质、没食子酸、五倍子油、矿物质微量元素等，其中鞣质含量高达50%~70%［2］。现代药理学研究证实，五倍子具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗肿瘤等药理作用［3-7］。五倍子软膏系将五倍子粉与白凡士林、甘油等基质混合制备的混悬型软膏剂，主要用于我院婴幼儿尿布皮炎的预防和治疗，临床应用历史悠久且效果显著。为保证该制剂的产品质量及临床疗效，本研究参照2015年《中华人民共和国药典》对五倍子和软膏剂的质量要求，建立了该制剂的质量控制方法，并考察了制剂在常温和加速条件下的稳定性［8］。1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）;SartoriusCPA225D型电子天平（德国Sartorius公司）;AS10200B超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；恒温水浴锅（北京永光明仪器厂）；生物显微镜（重庆奥特光学仪器有限责任公司）。1.2试剂与药材没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110831-201204）、五倍子软膏（中国医科大学附属盛京医院，批号：20160524、20160525、20160526）、盐酸（沈阳化学试剂厂）、甲醇（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯）、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸、重蒸水。2.1薄层色谱鉴别取五倍子软膏约5g，温水融化，加甲醇5mL，超声处理15min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取五倍子对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法2015年版《中国药典》第4部通则0502试验，分别吸取上述3种溶液各2",分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸（5:5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视［8］。供试品溶液色谱中，在与对照药材和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（结果见图1）。在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致。2.2粒度检查取五倍子软膏适量，于载玻片上涂成薄层，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，显微镜下随机取5个视野观察，平均每张载玻片上检出超过180pm的粒子不得多于10粒。见表1。2.3没食子酸含量测定［8］2.3.1样品制备①对照品溶液的配制：精密称取没食子酸对照品适量，加50%甲醇制成每1mL含40pg没食子酸的对照品溶液，即得。②供试品溶液的配制：取五倍子软膏约5g（含五倍子生药量约0.5g）,精密称定，加入4mol/L盐酸溶液50mL,沸水浴中加热水解3.5h，放冷，滤过，定容至50mL量瓶中，摇匀，精密量取1mL,置100mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。③阴性对照溶液的制备：按处方工艺制备不含五倍子粉的空白软膏基质，再按供试品溶液配制方法制备阴性对照溶液，即得。2.3.2色谱条件与系统适用性试验色谱柱：十/I烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（15:85）;检测波长：273nm；柱温：25°C;流速：1mL/min;进样量：10pL;理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于2000。2.3.3方法学考察①线性关系考察：取没食子酸对照品溶液，分别进样4、6、8、10、12、14、16pL,以峰面积为纵坐标、进样量（pg）为横坐标，进行线性回归，得标准曲线方程为Y=3298.1X+19.493,R2=0.9997。结果表明，没食子酸在0.1532-0.6128pg范围内线性关系良好。专属性试验：取五倍子软膏、没食子酸对照品及不含五倍子粉的空白软膏基质分别制备供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液，按上述色谱条件分别进样10pL,记录色谱图。结果显示，理论塔板数按没食子酸峰面积计算不低于2000;阴性对照品对没食子酸的测定无干扰；供试品溶液与没食子酸对照品溶液相应色谱峰的色谱一致。表明该色谱条件符合专属性要求。见图2。精密度试验：精密吸取对照品溶液10pL，重复进样6次，记录峰面积，并计算出没食子酸峰面积RSD为1.71%，表明该方法的精密度良好。重复性试验：取同一批号样品6份，按上述供试品溶液配制方法制备6份供试品溶液，精密吸取供试品溶液10pL进样，测定没食子酸的峰面积并计算含量。结果表明，五倍子软膏中没食子酸含量的RSD为1.21%。表明方法的重复性较好。稳定性试验：取同一批号的供试品溶液，在0、2、4、6、8、12h分别进样10pL,记录峰面积，计算没食子酸峰面积的RSD为1.06%。表明供试品溶液在12h内稳定性良好。回收率试验：精密称取6份已知含量的五倍子软膏（含量：5.38%）约0.5g,分别精密加入定量的没食子酸对照品，制备供试品溶液，测定没食子酸的含量，计算回收率，结果表明，平均回收率为100.23%,RSD为1.85%。见表2。2.3.4样品含量测定取3批五倍子软膏，按“2.3.1”项制备成供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10pL,注入高效液相色谱仪进行测定，结果显示，五倍子软膏中没食子酸的含量分别为5.42%、5.31%、5.34%，平均含量为5.36%。2.4稳定性考察［8］取拟上市包装样品中试规模3批，进行加速试验和长期试验。加速试验条件为温度（30±2洗、相对湿度65%±5%的条件下放置6个月，分别于第0、1、2、3、6个月取样测定，测定结果见表3。长期试验条件为常温、相对湿度60%±10%的条件下放置6个月，分别在0、3、6个月取样检测，结果如表4。五倍子软膏在加速试验条件下，第6个月观察到软膏性状发生轻微改变，有部分液体析出现象，但鉴别、粒度及含量测定项均符合规定；在长期试验条件下6个月内各项指标均符合质量要求。五倍子软膏的主要药效成分为五倍子，因此，可以参考《中国药典》对五倍子的质量要求制定五倍子软膏的质量标准。采用TLC对五倍子软膏中五倍子进行定性鉴别，没食子酸特征斑点清洗且专属性强，重复性好；HPLC检测没食子酸的保留时间一致，因此可作为五倍子软膏的鉴别方法。五倍子的主要有效成分为鞣质，又称单宁酸，是葡萄糖羟基与7~9个没食子酸所形成的酯类化合物的混合物，为可水解鞣质［9］。因此，酸水解后的没食子酸含量可以作为五倍子的质量控制依据。本研究采用HPLC法测定没食子酸含量，方法学稳定，易操作，专属性强，为五倍子软膏的质量控制奠定了研究基础。加速试验第6个月观察到软膏性状发生轻微改变，有部分液体析出现象，但鉴别、检查及含量测定项均符合规定，可见五倍子软膏易受温度影响，因此建议阴凉处贮藏。长期试验条件下放置6个月，五倍子软膏的外观性状良好，没食子酸含量未出现明显变化，鉴别及粒度检查项均符合要求。表明五倍子软膏在常温下6个月稳定性良好，且与直接接触制剂的包装相容性良好。*通信作者【相关文献】杨雅西，平静，于鹰，等.五倍子古今应用探要[J].山西中医学院学报,2012,13(3):11-14.冯淑萍.五倍子药材及制剂质量标准研究[D].陕西:陕西中医学院,2009TrentinDS,SilvaDB,AmaralMW,etal.TanninspossessingbacteriostaticeffectimpairPseudomonasaeruginosaadhesionandbiofilmformation[J].PLoSOne,2013,8(6):e66257.TheisenLL,ErdelmeierCA,SpodenGA,etal.TanninsfromHamamelisvirginianabarkextract:characterizationandimprovementoftheantiviralefficacyagainstinfluenzaAvirusandhumanpapillomavirus[J].PLoSOne,2014,9(1):e88062.PayneDE,MartinNR,ParzychKR,etal.TannicacidinhibitsStaphylococcusaureussurfacecolonizationinanIsaA-dependentmanner[J].InfectImmun,2013,8